玉竹多糖低共熔溶劑提取工藝優(yōu)化及其抗氧化和抗糖基化活性研究

何瑞陽，王鋒*，蘇小軍，李清明，楊華，朱曉慧，范寬秀，江雪梅

1(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙，410128)2(湖南省發(fā)酵食品工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙，410128) 3(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙，410128)

玉竹(Polygonatumodoratum)為百合科黃精屬玉竹的根莖，又名葳蕤、鈴鐺菜、尾參，是我國重要的藥食同源大宗藥材，具有滋陰潤燥、生津止咳的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，玉竹具有抗氧化、調(diào)節(jié)免疫力、降糖、降血壓等作用[1]。玉竹含有豐富的多糖、黃酮、多酚等成分[2]，其中，多糖是其主要活性成分，在醫(yī)藥、食品、化妝品行業(yè)具有廣闊的應(yīng)用前景[3]。

低共熔溶劑(deep eutectic solvents, DESs)自ABBOTT等[4]2003年首次提出之后，由于其具有成本低、易合成、高溶解度、微毒甚至無毒等優(yōu)點[5]，在生物活性成分提取領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。其中，由氯化膽堿作為氫鍵受體(hydrogen-bond acceptor，HBA)與其他氫鍵供體(hydrogen-bond donor，HBD)組成的DESs在黃酮、多酚等生物活性物質(zhì)的提取方面[3]研究較多。也有文獻(xiàn)報道用于植物活性多糖的提取方面，如梁靜[6]采用氯化膽堿與甘油組合DESs提取鐵皮石斛多糖，提取率高達(dá)44.35%，顯著高于傳統(tǒng)提取方式。唐蘭芳[7]采用氯化膽堿與1,4-丁二醇組合提取黃精多糖(Polygonatumsibiricunmpolysaccharide extracted by deep eutectic solvents， DPsP)，最終提取率可達(dá)33.81%，約為熱水浸提法的4倍。DESs自身的極性、黏度等對多糖提取率起決定性作用；除此之外，提取過程中的溫度、時間與液料比等也對多糖的提取率有影響[8]，所以在利用DESs提取植物活性多糖時，對提取條件進(jìn)行優(yōu)化以獲得最優(yōu)提取條件至關(guān)重要。

大多數(shù)關(guān)于玉竹的研究，均是熱水提取[1]，鮮有采用DESs提取玉竹多糖(Polygonatumodoratumpolysaccharide extracted by deep eutectic solvents， DPoP)的研究報道。本研究采用DESs提取玉竹中的活性多糖，比較不同DESs組合，研究DESs摩爾比、DESs含水量、提取溫度、提取時間、液料比等因素對多糖提取率的影響，通過響應(yīng)面優(yōu)化工藝參數(shù)，采用DPPH法、ABTS法、氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity，ORAC)法對其進(jìn)行抗氧化活性測定，并測定DPoP對糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)生成的抑制作用，旨在建立一種玉竹多糖的高效提取方法，并為玉竹多糖的開發(fā)利用提供理論依據(jù)和技術(shù)參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

玉竹(品種：豬屎尾)，產(chǎn)自湖南郴州桂陽；葡萄糖(純度≥99%)，上海麥克林生化科技有限公司；DPPH(純度>97%)，梯希愛(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司；ABTS(純度≥98%)，上海瑞永生物科技有限公司；2,4,6-三吡啶基三嗪(2,4,6-tripyridin-2-yl-1,3,5-triazine，TPTZ，純度≥98%)，上海瑞永生物科技有限公司；氨基胍(純度≥98%)，美國Sigma公司；乙醇(含量≥99.7%)，成都市科隆化學(xué)品有限公司；考馬斯亮藍(lán)G-250、牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)、無水葡糖糖、氯化膽堿、尿素、硫酸、甲醇等均為分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；BJ-100型高速多功能粉碎機(jī)，德清拜杰電器有限公司；101A-3ET電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海實驗儀器廠有限公司；SCIENTZ-18 N冷凍干燥機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；TGL16M冷凍離心機(jī)，長沙英泰儀器有限公司；RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，鞏義市予華有限責(zé)任公司；SHZ-D(I)W循環(huán)水式多用真空泵，上海力辰邦西儀器科技有限公司；UV1901G/UV1901PCS紫外可見分光光度計，上海佑科儀器儀表有限公司；H-8數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海浦東物理光學(xué)儀器廠；VarioskanFlash多功能讀數(shù)儀，美國賽默飛世爾科技有限公司；IRAffinity-1傅立葉紅外光譜儀，日本島津有限公司；F-7000熒光分光光度計，日本日立公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 原料預(yù)處理

新鮮玉竹洗凈、去須、切片，放入烘箱中，60 ℃烘干至水分含量10%以下，使用高速多功能粉碎機(jī)粉碎，過70目篩得玉竹粗粉，低溫密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 玉竹多糖提取

(1)熱水浸提法(Polygonatumodoratumpolysaccharide extracted by hot water,HW)：根據(jù)《國家藥典》第三部(2015版)，稱取1 g玉竹粗粉置于圓底燒瓶內(nèi)，加入蒸餾水100 mL，加熱回流1 h，脫脂棉過濾，重復(fù)提取2次，濾液合并濃縮置100 mL容量瓶定容，得水提多糖溶液(HWPoP)。

(2)DESs提取法：稱取1 g玉竹粗粉置于三角瓶中，以一定比例加入DESs，熱水浴提取，提取結(jié)束冷卻后加入4倍體積無水乙醇，4 ℃醇沉12 h后離心、復(fù)溶于100 mL蒸餾水，得DESs提取多糖溶液(DPoP)[9]。

1.3.3 玉竹多糖提取率計算

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：采用苯酚-硫酸法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為y=26.337x-0.003 9，R2=0.999 5。

按照1.3.2提取操作各重復(fù)3組，采用苯酚-硫酸法比對標(biāo)準(zhǔn)曲線測定多糖含量，按照公式(1)計算多糖提取率：

(1)

式中：C，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得多糖質(zhì)量濃度，mg/mL；V，樣品體積，mL；N，稀釋倍數(shù)；m，稱取玉竹粗粉質(zhì)量，g。

1.3.4 不同組合DESs對玉竹多糖提取率的影響

以多糖提取率為指標(biāo)，選取酰胺(尿素)、羧酸(丁二酸、檸檬酸)和多元醇(1,4-丁二醇、乙二醇)作HBD，氯化膽堿作HBA，以摩爾比2∶1的比例配成5種不同組合的均勻穩(wěn)定的DESs溶液[10]，在溫度90 ℃、液料比30∶1、提取時間40 min，按照1.3.2(2)提取方法提取玉竹多糖，并計算提取率。5種DESs組合見表1。

表1 DESs類型Table 1 Type of DESs

1.3.5 單因素實驗設(shè)計

從1.3.4提取結(jié)果中選擇提取率最高的DESs組合，在本實驗室的研究基礎(chǔ)上選取DESs摩爾比(1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1)、提取溫度(50、60、70、80、90、100 ℃)、提取時間(20、30、40、50、60、70 min)、溶劑含水量(0%、10%、20%、30%、40%、50%)、液料比(10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1)進(jìn)行單因素考察，考察各因素對提取率的影響。

1.3.6 響應(yīng)面優(yōu)化實驗設(shè)計

在單因素考察結(jié)果上固定DESs摩爾比，對提取溫度(A)、提取時間(B)、溶劑含水量(C)、液料比(D)4個單因素進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實驗，以多糖提取率作響應(yīng)值進(jìn)行響應(yīng)面Box-Behnken(BBD)分析，確定多糖提取最優(yōu)條件組合。響應(yīng)面實驗因素與水平設(shè)計見表2。

表2 響應(yīng)面實驗因素與水平設(shè)計Table 2 Factors and level of Box-Behnken

1.3.7 DPoP制備

參照宗鑫妍等[1]的方法，采用Sevage試劑對1.3.2制備的DPoP溶液進(jìn)行脫蛋白處理，并采用考馬斯亮藍(lán)法測定處理后溶液中可溶性蛋白含量。以BSA作對照，在吸光度595 nm處，以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白濃度為橫坐標(biāo)，繪制可溶性蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=5.162 9x+0.040 5，R2=0.999 2。重復(fù)脫蛋白操作直至上層多糖溶液中可溶性蛋白含量穩(wěn)定。經(jīng)脫蛋白處理的DPoP溶液濃縮至一定體積后加入4倍體積無水乙醇，4 ℃冷藏6 h后離心、凍干得DPoP粉末，將其低溫貯藏備用。

1.3.8 DPoP紅外光譜測定

取1 mg低溫烘干的DPoP粉末，加入100 mg烘干至恒重的KBr，置研缽中研磨均勻，壓片，在波數(shù)4 000～400 cm-1內(nèi)進(jìn)行紅外掃描。

1.3.9 玉竹多糖抗氧化活性測定

DPPH自由基清除能力測定參照ZHAO等[11]的方法進(jìn)行；ABTS陽離子自由基清除能力測定參照CHENG等[12]的方法進(jìn)行；ORAC法參照ZAR等[13]的方法進(jìn)行。

1.3.10 DPoP抗糖基化能力測定

參照張家成[14]的方法稍做改動，測定多糖的抗糖基化能力，配制20 mg/mL BSA溶液、0.5 mol/L葡萄糖溶液(glucose，Glu)，按照體積比1∶1混合過無菌濾膜，取3 mL BSA-Glu混合液，分別加入樣品1 mL與6.0 mL 0.2 mol/L磷酸緩沖溶液，搖勻后避光37 ℃ 恒溫孵育6 d，以氨基胍代替樣品做對照組，磷酸緩沖溶液代替樣品做空白對照，測定AGEs在激發(fā)波長370 nm，發(fā)射波長440 nm處的熒光值，玉竹多糖對AGEs的相對抑制率按公式(2)計算：

(2)

式中：Fc,空白組熒光值；Fs,樣品組熒光值；Fs1,反應(yīng)體系由緩沖溶液代替Glu樣品的熒光值；Fs2,反應(yīng)體系由緩沖溶液代替BSA樣品的熒光值。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有操作均重復(fù)3次，實驗數(shù)據(jù)采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差”表示，采用SPSS 19 LSD法進(jìn)行方差分析，P<0.05為差異顯著，采用Origin 2018進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同組合DESs對多糖提取率的影響

如圖1所示，多糖提取率依次是UCC>EGCC>BCC>HW>AACC>CACC，尿素與氯化膽堿組合DESs對多糖的提取率顯著高于其他組合，氯化膽堿與多元醇組合DESs提取率高于HW，氯化膽堿與羧酸組合DESs則低于HW，這與汪濤等[15]在提取DPsP時結(jié)果類似，引起提取效果差異的原因可能是不同DESs之間的擴(kuò)散度、溶解度、黏度、極性等理化性質(zhì)不同。實驗確定以尿素與氯化膽堿組合做后續(xù)優(yōu)化。

圖1 不同組合DESs對多糖提取率的影響Fig.1 Effects of different types of DESs on the yield of polysaccharide 注：不同字母代表差異顯著(P<0.05)，相同字母代表差異不顯著

2.2 單因素試驗結(jié)果

2.2.1 尿素與氯化膽堿摩爾比對提取率的影響

如圖2所示，當(dāng)尿素與氯化膽堿摩爾比開始增大時，多糖提取率呈現(xiàn)增長趨勢，在3∶1時達(dá)到最大，超過3∶1之后，多糖提取率降低，這與尿素中的NH2基團(tuán)與Cl-形成的氫鍵強弱對DESs的熔點與黏度造成的影響有關(guān)[16]，在摩爾比為5∶1時的提取率出現(xiàn)上升現(xiàn)象，而夏伯候等[17]在采用1,2-丙二醇與氯化膽堿組合提取夏枯草總黃酮時于摩爾比5∶1處也出現(xiàn)類似現(xiàn)象，具體原因有待進(jìn)一步研究。本研究選擇尿素與氯化膽堿摩爾比3∶1做后續(xù)優(yōu)化。

圖2 DESs摩爾比對多糖提取率的影響Fig.2 Effects of DESs molar ratio on the yield of polysaccharide

2.2.2 提取溫度對提取率的影響

如圖3所示，隨著溫度的升高，多糖提取率不斷增大，當(dāng)溫度超過90 ℃以后多糖提取率呈現(xiàn)下降的趨勢，可能是高溫導(dǎo)致的多糖降解，溫度對DESs的黏度、極性和物料的溶解度都會造成影響[18]，所以選擇提取溫度90 ℃做后續(xù)優(yōu)化。

圖3 提取溫度對多糖提取率的影響Fig.3 Effects of temperature on the yield of polysaccharide

2.2.3 提取時間對提取率的影響

如圖4所示，隨著提取時間延長提取率快速上升，在40 min時達(dá)到最大，提取時間超過40 min后提取率降低，在一定時間內(nèi)，提取時間與活性成分溶出率成正比，超過40 min后可能出現(xiàn)多糖結(jié)構(gòu)破壞降解，導(dǎo)致提取率降低，而在60 min時較50 min時的提取率略有升高，但不具有顯著性(P>0.05)，可能是多糖繼續(xù)溶出與結(jié)構(gòu)破壞共同作用的結(jié)果。本研究選擇提取時間40 min做后續(xù)優(yōu)化。

圖4 提取時間對多糖提取率的影響Fig.4 Effects of time the yield of polysaccharide

2.2.4 DESs含水量對提取率的影響

如圖5所示，當(dāng)DESs水分含量在0%～20%時，提取率隨含水量增大而增大，在20%時達(dá)到最大，當(dāng)含水量超過20%，提取率開始下降。含水量在30%～40%出現(xiàn)上升趨勢，然而有趣的是宋歆睿[19]在采用低共熔溶劑提取蒲公英主要活性成分時，目標(biāo)物的提取率在含水量為40%時較含水量30%時也有所上升，這可能是由于未結(jié)合的水降低了DESs的黏度與表面張力，提取率出現(xiàn)上升現(xiàn)象，而含水量繼續(xù)增加導(dǎo)致分子間作用力降低，提取率迅速下降[20]。本研究選擇DESs含水量20%做后續(xù)優(yōu)化。

圖5 DESs含水量對多糖提取率的影響Fig.5 Effects of DESs water content the yield of polysaccharide

2.2.5 液料比對提取率的影響

如圖6所示，液料比在10∶1至30∶1時，溶劑量的增加，使得物料細(xì)胞與外界溶劑之間造成濃度差，濃度差增加更易使得植物細(xì)胞破碎，多糖提取率呈上升趨勢，而當(dāng)液料比超過30∶1時，過多的DESs可能使得物料之間相互作用減弱，不利于多糖提取，所以選擇提取液料比30∶1做后續(xù)優(yōu)化。

圖6 液料比對多糖提取率的影響Fig.6 Effects of liquid-solid ratio on the yield of polysaccharide

2.3 響應(yīng)面試驗結(jié)果分析

根據(jù)2.2結(jié)果分析，固定尿素與氯化膽堿摩爾比為3∶1，選取提取時間、提取溫度、DESs含水量與液料比作為單因素，選取多糖提取率為響應(yīng)值，進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實驗，Box-Behnken實驗設(shè)計與結(jié)果見表3。

2.3.1 回歸方程模型與方差分析

采用Design-Expert 8.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸擬合分析，二次方程模型為Y=29.69+0.76A+0.46B-0.35C-0.36D-0.14AB-0.58AC+0.54AD+0.14BC-0.29BD+1.02CD-2.20A2-2.30B2-3.09C2-3.07D2。

表3 響應(yīng)面試驗設(shè)計與結(jié)果Table 3 Design and result Box-Behnken

根據(jù)表4結(jié)果分析，回歸模型總回歸系數(shù)R2=0.973 4，且模型P<0.01，實驗?zāi)Ｐ瓦_(dá)到極顯著水平，模型方差失擬項P=0.492 6>0.05，說明該模型擬合度良好，可用于預(yù)測4種因素不同組合情況下多糖的提取率，模型變量A、B、CD、A2、B2、C2、D2均達(dá)極顯著水平(P<0.000 1)，單因素變量C、D及相交變量AC均達(dá)顯著水平(P<0.05)，各單因素在取值范圍內(nèi)，對玉竹多糖提取率影響大小順序為：提取溫度(A)>提取時間(B)>液料比(D)>溶劑含水量(C)。

2.3.2 響應(yīng)面分析

通過Design-ExPert8.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合得到響應(yīng)面圖，響應(yīng)面的三維圖與等高線圖可以看出2個變量之間的相互作用，如圖7-a所示，隨著提取溫度與含水量的增加，提取率呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢，等高線圖密集且呈橢圓形，表明兩變量相交對提取率影響極顯著，如圖7-b所示，隨著含水量與液料比的增大，提取率呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢，等高線圖呈橢圓形，證明兩變量相交對提取率影響顯著，如圖7-c所示，隨著提取溫度與液料比的增大，提取率也呈現(xiàn)先增后減的趨勢，三維圖呈凸面，等高線圖橢圓形，但相比圖7-a，等高線較為稀疏，證明兩變量相交對提取率有一定影響，這與方差分析結(jié)果一致。

表4 響應(yīng)面結(jié)果分析Table 4 Analysis of Box-Behnken

2.3.3 回歸模型驗證實驗

通過響應(yīng)面優(yōu)化分析，得到DESs提取玉竹多糖預(yù)測最優(yōu)工藝條件為：提取溫度91.73 ℃、提取時間40.97 min、溶劑含水量19.2%，液料比29.38∶1，預(yù)測多糖提取率為29.80%，為驗證回歸模型可信性，采取上述最佳操作條件進(jìn)行提取實驗，考慮到實際操作與儀器限制，將最終選取提取條件設(shè)為：摩爾比3∶1、提取溫度92 ℃、提取時間41 min、溶劑含水量19%，液料比29∶1，在此優(yōu)化條件下，多糖提取率為(29.03±0.54)%，與預(yù)測值接近，表明該實驗回歸模型可靠，能較為準(zhǔn)確的預(yù)測玉竹多糖提取率。多糖提取率為熱水浸提法(6.21±0.05)%的4.67倍。

2.4 玉竹多糖紅外光譜測定結(jié)果分析

圖8 DPoP紅外光譜圖Fig.8 FTIR of spectra of DPoP

2.5 DPoP對DPPH自由基清除能力

自由基由在人體內(nèi)積累會引發(fā)某些慢性疾病，如動脈粥樣硬化、神經(jīng)病變、慢性抑郁癥、癌癥等。天然抗氧化劑能清除自由基且具有安全、健康等優(yōu)點，受到人們廣泛關(guān)注[23]，如圖9所示，在測定質(zhì)量濃度為2～20 mg/mL時，清除率隨樣品質(zhì)量濃度的增大而增大，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到20 mg/mL時，清除率達(dá)到了(17.97±0.47)%，表明DPoP對DPPH自由基有一定的清除能力。經(jīng)擬合，DPoP曲線方程為y=0.02x2+1.33x-1.98，R2=0.994，IC50=31.03 mg/mL。

圖9 DPoP對DPPH自由基清除率Fig.9 DPPH radical scavenging rate of DPoP

2.6 DPoP對ABTS陽離子自由基清除能力

ABTS陽離子自由基為穩(wěn)定的有機(jī)自由基，在氧化劑作用下氧化成綠色的ABTS陽離子，當(dāng)抗氧化物存在時，ABTS的產(chǎn)生會被抑制。如圖10所示，結(jié)果表明DPoP對ABTS陽離子自由基有一定的清除作用，且在測定濃度范圍內(nèi)DPoP對ABTS陽離子自由基的清除效果具有濃度依賴性，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到20 mg/mL時，清除率達(dá)到了(40.69±0.34)%，經(jīng)擬合，DPoP曲線方程為y=0.01x3-0.34x2+5.22x+0.38，R2=0.998，IC50=23.25 mg/mL。綜合圖9和圖10，DPoP雖然具有一定的清除DPPH自由基和ABTS陽離子自由基的能力，但其清除作用均顯著低于陽性對照維生素C，這可能是由于多糖的抗氧化機(jī)制與維生素C不同所致。多糖在體內(nèi)是通過調(diào)節(jié)抗氧化酶的活性，利用抗氧化酶的還原作用將氧化物還原為低毒或無害的物質(zhì)，從而達(dá)到清除自由基作用[24]，玉竹多糖抗氧化機(jī)理有待進(jìn)一步深入研究。

圖10 DPoP對ABTS陽離子自由基清除率Fig.10 ABTS cationic radical scavenging rate of DPoP

2.7 DPoP的ORAC值

ORAC值最接近真實的生理環(huán)境氧化過程，具有可操作性強、靈敏度高等優(yōu)勢而被廣泛應(yīng)用于食品功能性成分抗氧化測定方面[10]。以水溶性維生素E為對照組，經(jīng)計算得玉竹多糖的ORAC值為(121.67±3.65) μmol/g，DPoP在ORAC法中表現(xiàn)出較強的抗氧化能力。唐蘭芳[7]測定低共熔溶劑提取DPsP的ORAC值也達(dá)到(130.53±8.29) μmol/g，與DPoP的ORAC值相近；唐仕榮等[25]通過超聲輔助提取枸杞多糖，測得枸杞多糖的ORAC值為78.34 μmol/g，顯著低于DPoP的ORAC值。圖11為對照組標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖11 熒光衰退標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.11 Fluorescent decay standard curve

2.8 DPoP抗糖基化能力

AGEs是糖基化反應(yīng)的終末端產(chǎn)生的對人體有害物質(zhì)，與糖尿病、心臟病、腎衰竭和老年癡呆等許多疾病的發(fā)展有關(guān)[16]。如圖12所示，DPoP對BSA-Glu體系中糖基化終末產(chǎn)物AGEs的抑制作用僅稍低于氨基胍，表現(xiàn)出很強的抗糖基化能力。在測定范圍內(nèi)，DPoP對AGEs相對抑制率呈線性增長，當(dāng)DPoP質(zhì)量濃度達(dá)到2.0 mg/mL時，抑制率達(dá)到(87.63±0.66)%，展示出良好的抑制效果，作為從食物資源中提取的天然成分，DPoP必將具備很好的應(yīng)用前景。

圖12 DPoP對AGES相對抑制率Fig.12 Relative inhibition rate of AGES of DPoP

3 結(jié)論

DESs提取玉竹中的活性多糖較熱水有更強的溶出能力，工藝確定以尿素-氯化膽堿體系作溶劑，采取響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計，得到最優(yōu)提取條件：在尿素-氯化膽堿摩爾比為3∶1，提取溫度92 ℃、提取時間41 min、DESs含水量19%，液料比29∶1的條件下，玉竹多糖最終提取率可達(dá)(29.03±0.54)%，為熱水浸提法的4.67倍。

通過紅外光譜分析確定DPoP性質(zhì)與糖苷鍵類型，DPoP為酸性多糖，存在β-吡喃糖苷鍵與α-吡喃糖苷鍵。DPoP抗氧化測定結(jié)果均表明,DPoP具有抗氧化能力，DPoP對DPPH自由基、ABTS陽離子自由基清除能力隨多糖質(zhì)量濃度增大而增大，在質(zhì)量濃度為20 mg/mL時，清除率分別達(dá)到(17.97±0.47)%、(40.69±0.34)%，ORAC值達(dá)到(121.67±3.65)μmol/g；糖基化終末端產(chǎn)物AGEs在體內(nèi)積累是引發(fā)糖尿病的直接因素，抗糖基化結(jié)果表明，DPoP對AGEs的生成具有良好的抑制效果，當(dāng)DPoP質(zhì)量濃度達(dá)到2.0 mg/mL時，抑制率可達(dá)到(87.63±0.66)%，DPoP在新型降糖保健食品的開發(fā)方面有較大的應(yīng)用潛力，有望進(jìn)一步研究體內(nèi)抗糖作用與機(jī)制以及進(jìn)行相關(guān)功能性食品開發(fā)。