前列腺癌組織前列腺特異性抗原、雄激素受體、嗜鉻粒蛋白A表達與Gleason分級的相關(guān)性

馮小蘭，黃喜健

[1.廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院）病理科；2.廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院）泌尿外科，廣西 南寧 530001]

前列腺癌是老年男性最常見的腫瘤疾病之一，其早期可以根治，但早期卻不易發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移率較高，多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已發(fā)展為中晚期，采用內(nèi)分泌治療、化療、放療等均達不到完全治愈的效果，嚴重威脅男性的健康和生命，因此對前列腺癌患者提供有效的預(yù)后評估指標是目前研究的熱點之一。目前前列腺癌病理評分采用的是Gleason評分系統(tǒng)，其從組織學(xué)角度評估患者的預(yù)后，主要根據(jù)腫瘤的生長形態(tài)和腫瘤在間質(zhì)的浸潤狀況作為分級依據(jù)，已成為制定前列腺癌治療方案和預(yù)后評估的重要參考指標之一[1]。前列腺特異性抗原（PSA）篩查在全世界廣泛應(yīng)用，也是臨床醫(yī)師篩查前列腺癌患者的重要參考指標，其高水平表達提示存在前列腺癌的可能；雄激素受體（AR）為雄激素依賴性轉(zhuǎn)錄因子，可介導(dǎo)依賴雄激素的細胞功能，是促進前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵因素[2]；嗜鉻粒蛋白A（CgA）是神經(jīng)內(nèi)分泌細胞最特異性的標志物，在雄激素缺乏的環(huán)境誘導(dǎo)下，前列腺癌細胞可以轉(zhuǎn)化為具有神經(jīng)內(nèi)分泌細胞樣功能的腫瘤細胞[3]。但目前關(guān)于PSA、AR、CgA在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移中作用的報道有限?；诖?，本研究旨在探討前列腺癌Gleason評分與前列腺癌病理組織PSA、AR、CgA表達的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2016年6月至2021年6月廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)院（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院）收治的65例行經(jīng)尿道前列腺增生電切術(shù)且經(jīng)術(shù)后病理證實為前列腺腺癌患者的臨床資料。患者年齡53～88歲，平均（73.62±6.32）歲。診斷標準：符合《診斷病理學(xué)（第3版）》[4]中的相關(guān)診斷標準，根據(jù)腺體上皮細胞出現(xiàn)核間變（核增大、核漿比例增大、核不規(guī)則，出現(xiàn)明顯大核仁）、腺體結(jié)構(gòu)異常（腺體大小及輪廓不規(guī)則）、浸潤性生長及免疫組化抑癌基因P63、高分子細胞角蛋白（HCK）基底細胞染色缺失綜合判斷。納入標準：符合上述診斷標準者；病理診斷為前列腺腺泡性腺癌患者；有逐漸加重的排尿困難、尿頻、尿急等尿路梗阻癥狀或無痛性肉眼血尿或前列腺增大癥狀者等。排除標準：合并其他原發(fā)性惡性腫瘤者；其他類型前列腺癌或轉(zhuǎn)移癌者；術(shù)前經(jīng)過相應(yīng)治療者等。本研究經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會審核并批準。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化染色方法 患者前列腺癌組織經(jīng)常規(guī)蘇木精‐伊紅染色及免疫組化染色。所有標本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，取材、脫水、包埋、連續(xù)4 μm厚切片4張，1張行蘇木精 -?伊紅染色，另3張分別行PSA、AR、CgA免疫組化染色。所有抗體均購自福州邁新公司，采用鏈霉菌抗生素蛋白 -?過陽化酶（SP）法進行免疫組化檢測，以已知陽性前列腺癌組織切片為陽性對照，磷酸鹽緩沖液（PBS）代一抗為陰性對照，按說明書進行免疫組化染色步驟操作。

1.2.2 免疫組化結(jié)果判定 AR陽性著色定位于細胞核，PSA、CgA陽性著色定位于細胞質(zhì)，且陽性表達均為棕黃色顆粒。在400倍光學(xué)顯微鏡下，每張切片隨機觀察10個視野，按陽性細胞所占視野總細胞數(shù)量的百分比進行分級：陽性細胞數(shù) ＜ 1%為陰性(-)；陽性細胞數(shù)1%～10%為弱陽性（+）；陽性細胞11%～50%為中度陽性（++）；陽性細胞≥ 51% 為強陽性（+++）[5‐6]。

1.2.3 病理Gleason評分 根據(jù)2014年國際泌尿病理協(xié)會（ISUP）共識會議前列腺癌分級分組標準[7]進行病理分級，該分級系統(tǒng)將前列腺癌組織分為主要和次要分化程度，分化程度（生長方式）從高分化（1級）到低分化（5級）共分為5級，分別為1～5分，Gleason總分=主要結(jié)構(gòu)類型（級別）+次要結(jié)構(gòu)類型（級別），總分2～10分。1級組Gleason評分≤ 6分，形態(tài)特點僅由單個分離的、形成良好的腺體組成；2級組Gleason評分3+4=7分，形態(tài)特點以形成良好的腺體為主，伴少量形成不良/融合/篩狀腺體；3級組Gleason評分4+3=7分，形態(tài)特點以形成不良/融合/篩狀腺體為主，伴少量形成良好的腺體；4級組Gleason評分4+4=8分，3+5=8分，5+3=8分，形態(tài)特點僅有形成不良/融合/篩狀腺體或以形成良好的腺體為主，伴少量缺乏腺樣分化的成分，或以缺乏腺樣分化的成分為主伴少量形成良好的腺體；5級組Gleason評分4+5=9分，5+4=9分，5+5=10分，形態(tài)特點缺乏腺體形成（或伴壞死），伴/不伴形成不良/融合/篩狀腺體，其中Gleason評分2～4分相當于WHOⅠ級（高分化、低級別癌），Gleason評分5～7分相當于WHOⅡ級（中分化癌），Gleason評分8～10分相當于WHOⅢ級（低分化、高級別癌），但從治療和預(yù)后的角度，Gleason評分可劃分為4組：2～4分，5～6分，7分，8～10分。

1.3 觀察指標 ①前列腺癌Gleason評分結(jié)果。②分析前列腺癌Gleason評分與PSA陽性表達結(jié)果。③分析前列腺癌Gleason評分與AR陽性表達結(jié)果。④前列腺癌Gleason評分與CgA陽性表達結(jié)果。⑤免疫組化染色觀察典型病例前列腺癌組織PSA、AR、CgA陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，雙向有序等級資料以（例）表示，采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman一致性檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計意義。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌Gleason評分 65例前列腺癌患者按照Gleason評分標準分別分為5～6分（1級組）10例，7分（2、3級組）30例，8～10分（4、5級組）25例。

2.2 前列腺癌Gleason評分與PSA陽性表達的相關(guān)性65例前列腺癌患者病理組織標本經(jīng)免疫組化染色顯示，PSA陽性表達率為84.62%（55/65），表達強度以+～++為主，與Gleason評分呈負相關(guān)性（r= -0.627），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 前列腺癌Gleason分級與免疫組化PSA的表達結(jié)果

2.3 前列腺癌Gleason評分與AR陽性表達的相關(guān)性65例前列腺癌患者病理組織標本經(jīng)免疫組化染色顯示，AR陽性表達率為83.08%（54/65），表達強度以+～++為主，與Gleason評分呈負相關(guān)性（r= -0.602），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 前列腺癌Gleason分級與免疫組化AR的表達結(jié)果

2.4 前列腺癌Gleason評分與CgA陽性表達的相關(guān)性65例前列腺癌患者病理組織標本經(jīng)免疫組化染色顯示，CgA陽性表達率為26.15%（17/65），表達強度以-～+為主，與Gleason評分呈正相關(guān)性（r= 0.382），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表 3。

2.5 PSA、AR、CgA蛋白在前列腺癌組織中的陽性表達情況 Gleason評分為8分的患者PSA（+++）標本中可見PSA陽性信號呈棕黃色，定位于腺體上皮細胞胞質(zhì)，陽性細胞≥ 51%，見圖1‐A。Gleason評分為8分的患者AR（+++）標本中可見AR陽性信號呈棕黃色，定位于腺體上皮細胞胞核，陽性細胞≥ 51%，見圖1‐B。Gleason評分為10分的患者CgA（++）陽性信號呈棕黃色，定位于腺體上皮細胞胞質(zhì)，陽性細胞11% ～ 50%，見圖1‐C。

圖1 Gleason評分為8～10分的前列腺癌患者病理組織PSA、AR、CgA免疫組化染色（×200）

3 討論

前列腺癌是發(fā)生于前列腺上皮的惡性腫瘤，好發(fā)于前列腺外周帶，其病灶侵襲性有較大的差異，中高危險性前列腺癌侵襲性較大，病情可在短期內(nèi)迅速進展，需及時進行內(nèi)分泌或手術(shù)等有效治療措施；而低危前列腺癌侵襲性相對較小，對于高齡或生命時間較短的患者而言，可能只需進行常規(guī)隨訪、檢測即可[8]。前列腺癌的Gleason評分是目前前列腺癌最有效的預(yù)后評估標準，對于未接受放化療、前列腺根治術(shù)或其他物理、新輔助治療的患者而言，其可以預(yù)測手術(shù)后局部復(fù)發(fā)以及淋巴結(jié)遠處轉(zhuǎn)移的發(fā)生率[9]。

前列腺組織的腺體上皮由分泌細胞、基底細胞、少量的神經(jīng)內(nèi)分泌細胞及干細胞等組成。PSA由成熟的前列腺腺上皮中已分化的上皮細胞產(chǎn)生，是前列腺分泌細胞在雄性激素刺激下分泌的一種酶，通常定位于前列腺腺泡和導(dǎo)管，具有組織特異性。正常生理情況下，富含PSA的前列腺腺泡內(nèi)容物與淋巴系統(tǒng)之間存在由內(nèi)皮層、基底細胞層和基底膜構(gòu)成的屏障相隔，但當患前列腺癌時，腫瘤細胞異常增殖，使得屏障受到破壞，PSA滲透到血液中，引起血液中PSA升高，而組織中原位PSA含量降低，因而高水平血清PSA往往提示前列腺癌，且Gleason評分越高，危險度越大[10]。本研究結(jié)果顯示，在Gleason評分為5～6分時，PSA陽性表達率為100.00%，均為（++） ～ （+++）表達；Gleason評分為7分時，PSA陽性表達率為100.00%，其中18 例（++） ～ （+++）表達；Gleason 評分為 8～10 分時，PSA陽性表達率60.00%，其中5例表達（++）～（+++），提示PSA陽性表達率及陽性表達強度隨著Gleason評分的升高而減弱，兩者呈負相關(guān)。楊明濤等[11]研究PSA在前列腺癌組織不同分級和分期的表達中發(fā)現(xiàn)，PSA表達與前列腺癌的病理分級有一定相關(guān)性，低分化組的表達比高分化組和中分化組均低；但也有研究認為，PSA表達與Gleason評分無明顯相關(guān)性[12]。本研究認為，在Gleason評分5～6、7分時，分化良好的腺體增多，癌細胞分泌PSA能力強，隨著前列腺癌病理分級的升高，腫瘤組織結(jié)構(gòu)中分化良好腺體減少，則癌細胞分泌PSA的能力下降，PSA表達陽性率及強度與Gleason評分呈負相關(guān)。

前列腺腺癌來源于泌尿生殖道上皮，屬于雄激素依賴性疾病，雄激素生物學(xué)活性是由細胞內(nèi)受體（核受體）介導(dǎo)的，無論睪酮還是雙氧睪酮均以AR為有效配基而發(fā)揮作用，AR在前列腺上皮細胞及間質(zhì)細胞中均有表達[13]。AR屬于甾體激素核受體，是一種雄激素依賴性轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)基因使細胞增殖和分化，其在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，是雄激素代謝和發(fā)揮作用過程的中心環(huán)節(jié)之一[14]。本研究結(jié)果顯示，在Gleason評分為5～6分時，AR陽性表達率為100.00%，均為（++） ～ （+++）表達；Gleason評分7分時，AR陽性表達率為100.00%，其中18例強陽性表達（++） ～ （+++）；Gleason 評分 8～10 分時，AR陽性表達率56.00%，其中6例表達（++） ～ （+++），表明AR陽性表達率及陽性表達強度隨著Gleason評分升高而減弱，兩者呈負相關(guān)。分析其原因為，在早期階段，幾乎所有的前列腺腺癌上皮細胞都存在AR表達，而當發(fā)展到晚期時，前列腺癌細胞自身可合成AR激動劑或雄激素來進一步促進腫瘤生長，從而失去了對AR的表達，因此，隨著Gleason評分增高分化程度降低，AR陽性率下降，這可能與功能性的雄激素受體丟失有關(guān)[15]。國內(nèi)有學(xué)者研究AR在前列腺癌不同分級分組組織中的表達發(fā)現(xiàn)，AR在高分化前列腺癌中高表達[16]，與本研究結(jié)果類似。

CgA是正常神經(jīng)內(nèi)分泌細胞和腫瘤細胞分泌的一種酸性糖蛋白顆粒，正常前列腺組中神經(jīng)內(nèi)分泌細胞較少，但在雄激素缺乏的環(huán)境誘導(dǎo)下可促進癌細胞轉(zhuǎn)化為具有神經(jīng)分泌功能樣功能的癌細胞。近年來，前列腺癌的神經(jīng)內(nèi)分泌轉(zhuǎn)化機制受到關(guān)注，前列腺癌的神經(jīng)內(nèi)分泌轉(zhuǎn)化可表現(xiàn)為未治療的原發(fā)現(xiàn)象或治療后的去勢抵抗性前列腺癌[17]。本研究結(jié)果顯示，在Gleason評分5～6分時，CgA無陽性表達；Gleason評分7分時，CgA陽性表達率16.70%；Gleason評分8～10分時，CgA陽性表達率為48.00%，表明CgA陽性表達率及陽性表達強度隨著Gleason評分升高而增強，兩者呈正相關(guān)。有學(xué)者在前列腺癌穿刺標本及術(shù)后隨訪病例中發(fā)現(xiàn)，CgA表達水平隨著Gleason評分及臨床分期升高而逐漸升高[18]。因此CgA可應(yīng)用于前列腺癌的診斷，可作為前列腺癌治療預(yù)后的判斷指標，隨著前列腺臨床分級和分期增高，CgA陽性表達率明顯提高，前列腺癌的分化程度越低越易出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌分化。未來隨著人們對神經(jīng)內(nèi)分泌分化機制和起源的深入研究，明確可以預(yù)防或逆轉(zhuǎn)神經(jīng)內(nèi)分泌分化的信號通路，將為提高前列腺癌患者的生存率和生活質(zhì)量提供廣泛的前景。

綜上，PSA、AR表達陽性率及強度隨著Gleason評分的升高而減弱，呈負相關(guān)，而CgA表達陽性率及強度隨著Gleason評分升高而增強，呈正相關(guān)，PSA、AR、CgA可用于前列腺癌的診斷和預(yù)后預(yù)測，值得臨床進一步研究。