MiR-217在子癇前期患者血清和胎盤組織中的表達(dá)及臨床意義

楊 靜，曹 靜，趙亞寧，賈 健，楊永康

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院產(chǎn)一科，陜西 咸陽 712000)

子癇前期(preeclampsia，PE)指妊娠20周后出現(xiàn)新發(fā)高血壓、蛋白尿或其他終末器官損害，是妊娠過程中的主要并發(fā)癥，全球約4%～5%的妊娠會受其影響，可導(dǎo)致胎兒早產(chǎn)和母親長期心血管疾病，給母子健康帶來巨大負(fù)擔(dān)[1,2]。目前，關(guān)于PE的研究取得了重大進(jìn)展，但其潛在發(fā)病機(jī)制仍不清楚。子癇前期涉及多種遺傳、結(jié)構(gòu)、血管生成和代謝途徑，包括螺旋動脈重塑、胎盤氧合、母體-胎兒界面的氧化還原和免疫耐受、血管生成和抗血管生成因子的平衡等[3]。對于PE的預(yù)防和治療仍需要尋找新的生物標(biāo)志物，以提高診療的便捷性和準(zhǔn)確性。微小RNA(micorRNA，miRNA)是一類短鏈非編碼RNA分子，長度約為22個核苷酸，參與基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)[4]。研究表明，體內(nèi)miRNA機(jī)制失活可導(dǎo)致胎盤畸形[5]，體外胎盤外植體中敲除miRNA會導(dǎo)致滋養(yǎng)層細(xì)胞異常增殖[6]，可見miRNA在胎盤發(fā)育中起關(guān)鍵作用。此外，靈長類動物特異性19號染色體miRNA簇的成員在PE患者中表達(dá)顯著失調(diào)，是PE的潛在生物標(biāo)志物[7]。分析比較PE患者的miRNA表達(dá)譜，可以評估m(xù)iRNA作為PE治療新方案的潛在靶點。因此，本研究旨在分析PE患者和正常妊娠婦女血液和胎盤組織中miR-217的表達(dá)差異，評價其臨床意義，為臨床診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2020年1月至2021年12月在我院擇期剖宮產(chǎn)結(jié)束分娩的32例PE患者和24例正常妊娠者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：未進(jìn)入產(chǎn)程；剖宮產(chǎn)結(jié)束分娩；無妊娠合并癥；PE的診斷參照子癇診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并糖尿病、慢性高血壓等基礎(chǔ)疾?。缓喜⒇氀?、血小板降低或其他血液系統(tǒng)疾?。患韧哪X血管病史等。

1.2 研究方法

1.2.1血清收集

清晨空腹采集所有受試者外周靜脈血4mL，室溫自然凝固30min后，3 000r/min快速離心10min取上層血清待檢測。

1.2.2胎盤組織收集

正常妊娠婦女和PE患者胎盤娩出后5min內(nèi)，在其母體面中央避開鈣化區(qū)，剪去1cm×1cm×1cm的組織塊，生理鹽水吸去血跡，吸干表面水分，將組織塊剪碎放入凍存管中，-80℃保存。所有器具及耗材均經(jīng)過高溫烘干處理，凍存管用0.1‰ DEPC水浸泡后放入烤箱，去除RNA酶。

1.2.3血壓測量

利用醫(yī)院電子血壓計(OMRONHEM-7012)準(zhǔn)確測量受試者的收縮壓和舒張壓，每天早上九點安靜狀態(tài)下測量并詳細(xì)記錄。

1.2.4miR-217檢測

采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈技術(shù)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測研究對象血清和胎盤組織中的miR-217表達(dá)。采用RNA提取試劑盒(SolarBio，中國北京)提取血清和胎盤組織中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Thermo Fisher Scientific，美國)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用qRT-PCR儀(Bio-Rad，美國)對miR-217表達(dá)水平進(jìn)行分析，包括40個循環(huán)，95℃ 30s，95℃ 5s以及60℃ 30 s。單基因相對表達(dá)水平用2-△△CT法計算。以U6為內(nèi)部參照，引物信息為miR-217正向F：5′-TCGGCAGGGTACTGCATCAGGAA-3，反向R：5′-CT-CAACTGGTGTCGTGGA-3′；U6正向F：5′-CTC-GCTTCGGCAGCACA-3′，反向R：5′-AACGCTTCACGAATTTG-3′

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般臨床資料的比較

兩組患者的年齡和孕周間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。子癇前期組患者的收縮壓、舒張壓、尿蛋白平均含量均顯著高于正常妊娠組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t值分別是2.193、3.932、4.024，P<0.05)，詳見表1。

表1 兩組患者一般臨床資料的比較

2.2 兩組血清和胎盤組織中miR-217的表達(dá)水平

利用RT-PCR法分析兩組患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達(dá)量，結(jié)果顯示子癇前期組患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達(dá)水平都顯著高于正常妊娠組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t值分別是3.225、2.813，P<0.05)，見圖1。這表明miR-217在子癇前期組表達(dá)上調(diào)，可能與疾病進(jìn)展有關(guān)。

圖1 兩組患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達(dá)量

2.3 子癇前期患者血清miR-217表達(dá)量與收縮壓和舒張壓的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示(圖2)，子癇前期患者血清miR-217相對表達(dá)水平與收縮壓和舒張壓均呈正相關(guān)(r值分別是0.703和0.720，P<0.01)，表明子癇前期患者血清中miR-217相對表達(dá)水平與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。

圖2 子癇前期患者血清中miR-217相對表達(dá)量與收縮壓和舒張壓的相關(guān)性

2.4 子癇前期患者胎盤組織中miR-217表達(dá)量與收縮壓和舒張壓的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示(圖3)，子癇前期患者胎盤組織中miR-217相對表達(dá)水平與收縮壓和舒張壓均呈正相關(guān)(r值分別是0.731和0.822，P<0.05)。相比血清miR-217，患者胎盤組織中miR-217相對表達(dá)水平與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性更大。

圖3 子癇前期患者胎盤組織中miR-217相對表達(dá)量與收縮壓和舒張壓的相關(guān)性

3 討論

3.1 MiR-217表達(dá)水平與子癇前期患者的疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)

子癇前期是一種復(fù)雜的綜合征，每年造成約16%～18%的孕產(chǎn)婦死亡和約40%的胎兒和新生兒死亡[1]。子癇前期是一種全身性疾病，伴有全身內(nèi)皮功能障礙和多器官衰竭，影響母嬰健康。孕婦血壓是診斷子癇前期及其嚴(yán)重性的重要參考，因此本研究將舒張壓和收縮壓作為子癇前期診斷參考，評估患者血清和胎盤組織中miR-217表達(dá)水平與血壓相關(guān)性。研究發(fā)現(xiàn)，miR-217在子癇前期患者血清和胎盤組織中的相對表達(dá)水平較高，且與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。

3.2 MiRNA與子癇前期的相關(guān)研究

MiRNA不翻譯蛋白質(zhì)，但可以調(diào)節(jié)基因表達(dá)，miRNA調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)在許多病理生理過程中發(fā)揮重要作用，如細(xì)胞增殖和黏附、血管生成和免疫細(xì)胞發(fā)育等[9]。相關(guān)研究表明，妊娠期間miRNA可能影響和調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲和遷移、調(diào)節(jié)血管生成和抗血管生成因子的表達(dá)以及間充質(zhì)干細(xì)胞功能[10]。此外，心腦血管疾病相關(guān)的miRNAs在子癇前期者的妊娠中失調(diào)，可能在心臟對妊娠和妊娠高血壓的適應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[11]。Huang等人發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，miRNA-181a-5p在PE者的胎盤中過度表達(dá)，且可通過抑制金屬蛋白酶2、9的活性觸發(fā)抗增殖，抑制細(xì)胞周期進(jìn)展，誘導(dǎo)凋亡，抑制滋養(yǎng)層侵襲[12]。Brkic等人研究了miRNA-218-5p在PE發(fā)生中的作用，發(fā)現(xiàn)其在絨毛外滋養(yǎng)層中高表達(dá)，而在PE胎盤中顯著下調(diào)，認(rèn)為miRNA-218-5p的下調(diào)可能促進(jìn)PE的發(fā)生[13]。Hu等人報道，miRNA-144-3p在PE胎盤中的表達(dá)降低，且與環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，Cox-2)的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；Cox-2作為前列腺素合成的限速酶，可能在PE的發(fā)生中起重要作用[14]。綜上，miRNA在PE進(jìn)展中的作用已有一定研究基礎(chǔ)，但尚未見miR-217與PE的相關(guān)報道。

3.3 MiR-217在心血管疾病發(fā)展中的作用

MiR-217可促進(jìn)血管內(nèi)皮功能障礙，增加血壓，加劇動脈粥樣硬化。Yebenes等人研究發(fā)現(xiàn)，miR-217的過度表達(dá)可誘導(dǎo)動脈粥樣硬化載脂蛋白E中的一氧化氮生成降低，加劇大鼠的動脈粥樣硬化程度；內(nèi)皮細(xì)胞中miR-217表達(dá)增加可導(dǎo)致冠狀動脈疾病發(fā)展和左心室心功能改變，誘導(dǎo)心臟舒張和收縮功能障礙[15]。多巴胺D2受體(dopamine D2 receptor，D2R)表達(dá)降低與高血壓有關(guān)，而miR-217的表達(dá)直接受D2R的調(diào)控[16]。鑒于上述研究成果，本研究探索了miR-217在PE患者血清和胎盤組織中的表達(dá)水平與疾病相關(guān)性。結(jié)果顯示，PE患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達(dá)水平均顯著高于正常妊娠組，說明miR-217的表達(dá)上調(diào)可能與PE疾病有關(guān)。此外，PE患者血清和胎盤組織中miR-217相對表達(dá)水平與其收縮壓和舒張壓均呈正相關(guān)，提示miR-217相對表達(dá)水平可能與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。

本研究不足之處主要為樣本量偏小，且前期研究僅發(fā)現(xiàn)miR-217在子癇前期患者胎盤組織和血清中表達(dá)上調(diào)，并未對其作用分子機(jī)制進(jìn)行深入研究，后續(xù)研究將進(jìn)一步重點探討。綜上所述，miR-217在PE患者胎盤組織和血清中呈高表達(dá)，且與收縮壓和舒張壓呈正相關(guān)。