北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量差異性分析

宋 馳，葛 威，鄒佳莉，王 悅，譚娟娟，貢濟(jì)宇

北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量差異性分析

宋 馳，葛 威，鄒佳莉，王 悅，譚娟娟，貢濟(jì)宇*

長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130117

建立北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，比較二者質(zhì)量的差異性。制備北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑各20批，對(duì)醋制前后標(biāo)準(zhǔn)湯劑的pH值及出膏率進(jìn)行考察；建立北柴胡醋制前后標(biāo)準(zhǔn)湯劑HPLC指紋圖譜方法和多指標(biāo)成分含量測(cè)定方法，并結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)二者差異進(jìn)行分析。北柴胡醋制后標(biāo)準(zhǔn)湯劑pH值降低，出膏率降低；建立了北柴胡及其醋制品標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜，分別確定了16個(gè)共有峰，指認(rèn)了其中5個(gè)共有峰；北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑相似度為0.976～0.995，醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑相似度為0.946～0.996。主成分分析將北柴胡及其醋制品標(biāo)準(zhǔn)湯劑歸為2類(lèi)，正交偏最小二乘法-判別分析找出二者共7個(gè)差異色譜峰，分別為峰1、4（柴胡皂苷c）、6、7（柴胡皂苷a）、9（柴胡皂苷b2）、10（柴胡皂苷b1）及13（柴胡皂苷d），為北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑差異化合物。多指標(biāo)成分含量測(cè)定結(jié)果表明北柴胡醋制前后指標(biāo)成分含量具有顯著差異（＜0.05），北柴胡醋制后標(biāo)準(zhǔn)湯劑中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c及柴胡皂苷d含量較低，柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量較高。建立了科學(xué)和實(shí)用的北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，也為北柴胡與其醋制品相關(guān)制劑的鑒別和質(zhì)量控制提供參考。

北柴胡；醋制；標(biāo)準(zhǔn)湯劑；指紋圖譜；正交偏最小二乘法-判別分析；柴胡皂苷；質(zhì)量控制

中藥標(biāo)準(zhǔn)湯劑是以中醫(yī)理論為指導(dǎo)、臨床應(yīng)用為基礎(chǔ)的單味中藥飲片水煎劑，用于標(biāo)準(zhǔn)化不同的臨床用藥形式是否與傳統(tǒng)湯劑一致，亦可作為配方顆粒、經(jīng)典名方等產(chǎn)品的物質(zhì)基準(zhǔn)[1]。建立規(guī)范、高效的標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備工藝，并依照可量化的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，將為中藥應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)化、科學(xué)化提供重要的技術(shù)支持與參考。

北柴胡為傘形科柴胡屬多年生草本植物柴胡DC.的干燥根[2]，又名韭葉柴胡、津柴胡，為大宗藥材。具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽(yáng)氣的功效，主要化學(xué)成分為皂苷類(lèi)、多糖類(lèi)、黃酮類(lèi)、揮發(fā)油、有機(jī)酸及植物甾醇等[3-5]。

現(xiàn)代藥理研究表明，柴胡對(duì)于散熱、消炎、抗腫瘤、抗抑郁、保肝及免疫調(diào)節(jié)等具有良好的治療效果[6-10]。北柴胡有熬制法、酒炒制、蜜制、醋炒、鱉血制、炒制法等炮制方法，其中以醋制最常用，且被《中國(guó)藥典》2020年版收載。

明代李梃《醫(yī)學(xué)入門(mén)》認(rèn)為：醋可引藥入肝，醋柴胡重在養(yǎng)肝柔肝，起到緩和升散、解表退熱之功效，可用于治療腹痛、月經(jīng)不調(diào)等癥[11]，在現(xiàn)有研究中，柴胡入藥煎煮時(shí)，原生柴胡皂苷a、柴胡皂苷d會(huì)轉(zhuǎn)化為次生柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2，柴胡皂苷b2可抗炎、增強(qiáng)免疫、抑制脂肪分解、刺激PGE2合成[12]。

目前，對(duì)北柴胡的研究多集中在不同產(chǎn)地、不同加工方法與藥材質(zhì)量的相關(guān)性，以及對(duì)炮制前后北柴胡飲片的藥效及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，而北柴胡臨床制劑多為湯劑、散劑及顆粒劑，已失去原飲片所具有的顯微與性狀鑒別特征，即無(wú)法從傳統(tǒng)鑒別方法進(jìn)行檢查與鑒別，不利于臨床用藥質(zhì)量的控制。因此，對(duì)北柴胡及醋北柴胡的標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行全面的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)具有重要意義。

本研究收集具有代表性的20批北柴胡飲片，制備北柴胡與醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑各20批，對(duì)醋制前后標(biāo)準(zhǔn)湯劑的pH值及出膏率進(jìn)行考察；建立北柴胡醋制前后標(biāo)準(zhǔn)湯劑HPLC指紋圖譜方法和多指標(biāo)成分含量測(cè)定方法，并結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)二者差異進(jìn)行分析，以期建立科學(xué)和實(shí)用的北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，為北柴胡與其醋制品相關(guān)制劑的鑒別和質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2030高效液相色譜儀，包括DGC-20A型在線(xiàn)脫氣系統(tǒng)，SIL-20A型自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，UV檢測(cè)器，日本島津公司；AB135-S型1/10萬(wàn)電子分析天平、AL204型1/1萬(wàn)分之一電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司；KQ-500E型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；KES-W22CS208H型電陶爐，深圳市康佳智能電器科技有限公司；SCIENTZ-12N型冷凍干燥機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.2 試藥

對(duì)照品柴胡皂苷a（批號(hào)P03M9F50593，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、柴胡皂苷c（批號(hào)P17A8F41958，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、柴胡皂苷d（批號(hào)Z08A8L33357，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、柴胡皂苷b1（批號(hào)58558-08-0，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥97%）及柴胡皂苷b2（批號(hào)58316-41-9，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥95%），均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；乙腈、甲醇、磷酸，色譜級(jí)，賽默飛世爾科技有限公司；氨水，25%～28%，西隴科學(xué)股份有限公司；屈臣氏蒸餾水，廣州屈臣氏食品飲料有限公司。20批北柴胡飲片來(lái)源于河南省南陽(yáng)市（S1～S5）、吉林省伊通縣（S6～S10）、山西省運(yùn)城市（S11～S15）及陜西?。⊿16～S20）共4個(gè)產(chǎn)地，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室蔡廣知副教授鑒定，均來(lái)源于傘形科柴胡屬植物柴胡DC.的干燥根，信息見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 醋北柴胡飲片的制備

參照《中國(guó)藥典》2020年版四部[13]醋炙法（通則0213），取20批北柴胡飲片，加醋（每100 kg柴胡，加20 kg醋）拌勻，悶透3.5 h置炒藥機(jī)內(nèi)炒至表面呈淡棕黃色，微有醋香氣，經(jīng)檢測(cè)北柴胡和醋北柴胡飲片質(zhì)量均符合《中國(guó)藥典》2020年版一部要求。

2.2 北柴胡及醋北柴胡飲片指標(biāo)性成分含量測(cè)定

參照文獻(xiàn)方法[14-15]測(cè)定20批北柴胡及醋北柴胡飲片指標(biāo)性成分含量，結(jié)果見(jiàn)表2。20批北柴胡飲片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為9.02～38.02、0.89～4.95、9.24～35.37、0.11～6.49、2.36～3.39 mg/g，均值分別為28.50、2.66、26.36、3.64、3.01 mg/g。20批醋北柴胡飲片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍分別為5.70～33.09、1.91～3.57、5.90～29.97、1.76～8.04、4.43～6.61 mg/g，均值分別為24.93、2.83、22.69、4.38、5.86 mg/g。

表1 北柴胡飲片樣品信息

Table 1 Information of prepared slices of B. chinense

樣品批號(hào)產(chǎn)地樣品批號(hào)產(chǎn)地樣品批號(hào)產(chǎn)地 S1Chj1-20170811河南省南陽(yáng)市S8Chd3-20171013吉林省伊通縣S15Chj1-20170915山西省運(yùn)城市 S2Chj1-20170812河南省南陽(yáng)市S9Chd3-20171014吉林省伊通縣S1619010041陜西省 S3Chj1-20170813河南省南陽(yáng)市S10Chd3-20171015吉林省伊通縣S1719010042陜西省 S4Chj1-20170814河南省南陽(yáng)市S11Chj1-20170911山西省運(yùn)城市S1819010043陜西省 S5Chj1-20170815河南省南陽(yáng)市S12Chj1-20170912山西省運(yùn)城市S1919010044陜西省 S6Chd3-20171011吉林省伊通縣S13Chj1-20170913山西省運(yùn)城市S2019010045陜西省 S7Chd3-20171012吉林省伊通縣S14Chj1-20170914山西省運(yùn)城市

表2 北柴胡飲片及醋北柴胡飲片中指標(biāo)成分含量

Table 2 Content of index components in prepared slices of B. chinense and vinegar-processed B. chinense

樣品柴胡皂苷a/(mg?g?1)柴胡皂苷c/(mg?g?1)柴胡皂苷d/(mg?g?1)柴胡皂苷b1/(mg?g?1)柴胡皂苷b2/(mg?g?1) 北柴胡醋北柴胡北柴胡醋北柴胡北柴胡醋北柴胡北柴胡醋北柴胡北柴胡醋北柴胡 S131.2631.433.512.7028.1829.570.121.833.355.20 S232.9731.042.942.8229.6328.491.591.973.074.90 S332.9533.094.952.8328.9729.971.221.762.944.43 S431.8031.122.842.7528.7529.390.111.883.344.92 S531.0931.192.752.7027.5229.201.101.883.354.94 S637.7031.112.483.1334.5525.885.635.152.886.25 S738.0230.802.853.2035.3725.542.074.993.186.23 S837.6731.522.723.5732.3226.233.085.062.766.33 S937.5130.702.593.0132.0125.971.557.973.396.36 S1037.6330.732.643.5031.6725.992.868.042.366.46 S1135.0830.563.643.4334.0328.344.435.353.386.16 S1235.2630.462.903.3234.2628.834.607.203.356.47 S1335.1630.993.053.3134.6428.723.165.193.356.25 S1434.7131.193.373.3533.7129.364.727.133.356.61 S1535.1030.852.823.3233.8228.945.265.152.816.05 S169.075.700.901.919.365.905.933.592.536.20 S179.566.220.961.939.996.526.123.672.585.54 S189.435.740.891.939.845.906.493.592.815.15 S199.027.002.241.919.247.516.353.072.716.17 S209.067.082.191.929.307.596.453.162.786.54

2.3 北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備

參照相關(guān)指導(dǎo)原則[16-17]中標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備方法，分別取20批北柴胡飲片100 g，浸泡30 min，武火轉(zhuǎn)文火煎煮2次，第1次加7倍量水煎煮30 min，第2次加6倍量水，煎煮20 min。經(jīng)300目絹布趁熱濾過(guò)，合并2次濾液，進(jìn)行分裝，?20 ℃預(yù)冷凍后，置于冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，即得北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉，編號(hào)為CHD1～CHD20。同法制備醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉，編號(hào)為VCHD1～VCHD20。

2.4 物性參數(shù)測(cè)定

2.4.1 pH值測(cè)定 分別測(cè)定各批次北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑pH值，結(jié)果見(jiàn)表3。20批北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑pH值范圍在7.95～8.27，均值為8.06，北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑顯堿性；20批醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑pH值范圍在6.70～7.87，均值為7.56，北柴胡醋制后標(biāo)準(zhǔn)湯劑pH值降低。

2.4.2 出膏率測(cè)定 出膏率以標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉量計(jì)，按公式出膏率＝標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉質(zhì)量/飲片投料量。北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，20批北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率范圍在12.02%～21.54%，均值為18.14%。20批醋北柴胡出膏率范圍在10.15%～20.45%，均值為17.11%，北柴胡醋制后標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率降低。

表3 北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑pH值和出膏率

Table 3 pH value and ointment rate of CHD and VCHD

樣品pH值出膏率/%樣品pH值出膏率/%樣品pH值出膏率/% CHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHD S18.277.84 20.2120.09 S87.976.70 20.5319.46 S157.977.87 18.7818.45 S28.237.83 20.0020.15 S97.966.70 21.1418.86 S168.117.84 12.48 10.88 S38.167.84 19.9220.45 S107.976.70 20.3519.78 S178.107.85 12.46 10.15 S48.237.84 19.5219.68 S117.957.86 19.2618.07 S188.087.85 12.02 11.04 S58.197.86 20.0219.89 S127.967.85 18.5518.45 S198.097.84 13.25 10.53 S67.976.72 21.5419.38 S137.977.82 19.0517.68 S208.077.83 13.45 10.23 S77.966.71 21.0520.03 S147.967.86 19.1518.86

CHD-北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑 VCHD-醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑，圖2～4及表4、5同

CHD-standard decoction ofVCHD-vinegar-processed, same as figures 2—4 and tables 4, 5

2.5 北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜研究

2.5.1 色譜條件 Thermo Hypersil Gold色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.01%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～10 min，26%乙腈；10～65 min，26%～46%乙腈；65～90 min，46%～70%乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；體積流量1 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成含柴胡皂苷a 0.431 mg/mL、柴胡皂苷c 0.211 mg/mL、柴胡皂苷d 0.512 mg/mL、柴胡皂苷b10.266 mg/mL及柴胡皂苷b20.212 mg/mL的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，備用。

1-柴胡皂苷c 2-柴胡皂苷a 3-柴胡皂苷b2 4-柴胡皂苷b1 5-柴胡皂苷d

2.5.3 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取各北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉1 g，于具塞錐形瓶中，加入含5%濃氨試液的甲醇溶液25 mL，超聲30 min，濾過(guò)，用甲醇20 mL分2次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘?jiān)?0%乙腈水溶液溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加60%乙腈水溶液至刻度，搖勻，0.22 μm微孔濾膜，濾過(guò)，即得。

2.5.4 精密度考察 取CHD1樣品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜方法重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，以7號(hào)峰（柴胡皂苷a）為參照峰，計(jì)算各共有峰與參照峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD值均小于0.21%，相對(duì)峰面積RSD值均小于4.48%，表明儀器的精密度良好。

2.5.5 重復(fù)性考察 取同一批北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉，按“2.4.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算各共有峰與參照峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD值均小于0.74%，相對(duì)峰面積的RSD值均小于4.04%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.5.6 穩(wěn)定性考察 取CHD1樣品溶液，分別于供試品溶液制備后0、4、8、12、24 h，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算各共有峰與參照峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD值均小于0.88%，相對(duì)峰面積的RSD值均小于3.79%，表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.7 指紋圖譜的建立 分別取北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉，按“2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件分別依次進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖信息。采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件（2012版）進(jìn)行評(píng)價(jià)，設(shè)置CHD1號(hào)樣品色譜圖為參照?qǐng)D譜，采用平均數(shù)法，進(jìn)行多點(diǎn)校正和色譜峰匹配，經(jīng)全譜峰匹配后得到北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜（圖2-A）；同法設(shè)置VCHD1號(hào)樣品色譜圖為參照?qǐng)D譜，建立醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜（圖2-B）。建立的北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑的指紋圖譜，分別匹配了16個(gè)共有峰，通過(guò)對(duì)照品比對(duì)（圖1），指認(rèn)了其中5個(gè)共有峰，峰4（柴胡皂苷c）、7（柴胡皂苷a）、9（柴胡皂苷b2）、10（柴胡皂苷b1）及13（柴胡皂苷d）。

圖2 北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑(A) 和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑(B) 指紋圖譜

2.5.8 相似度評(píng)價(jià) 20批北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑（CHD1～CHD20）相似度計(jì)算結(jié)果為0.990、0.989、0.991、0.994、0.989、0.992、0.993、0.995、0.995、0.991、0.989、0.979、0.983、0.984、0.987、0.979、0.976、0.978、0.979、0.978；20批醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑（VCHD1～VCHD20）相似度計(jì)算結(jié)果為0.996、0.996、0.992、0.994、0.995、0.973、0.957、0.958、0.976、0.956、0.987、0.988、0.992、0.985、0.946、0.973、0.973、0.966、0.971、0.967，結(jié)果均大于0.90，表明北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑整體相似性均較好，所建立的指紋圖譜可用于北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量評(píng)價(jià)研究。

2.6 基于指紋圖譜的北柴胡與醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑差異性分析

2.6.1 主成分分析（principal component analysis，PCA） PCA是在盡可能保持原有數(shù)據(jù)信息的前提下，通過(guò)降維處理達(dá)到簡(jiǎn)化指標(biāo)的目的，目前已被廣泛用于中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析中。以北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜中的16個(gè)共有峰峰面積為變量，借助SIMICA 14.0軟件，采用無(wú)監(jiān)督模式法PCA進(jìn)行分析，北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑被分為2組，見(jiàn)圖3，表明北柴胡醋制前后標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量存在一定差異。

2.6.2 正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal partial least square method-discriminant analysis，OPLS-DA） 為進(jìn)一步找出影響北柴胡與醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑差異的主要變量，在PCA聚類(lèi)結(jié)果基礎(chǔ)上，建立有監(jiān)督模式識(shí)別分析法OPLS-DA模型，樣本得分矩陣見(jiàn)圖4-A，模型對(duì)自變量擬合指數(shù)2＝0.961，對(duì)因變量擬合指數(shù)2＝0.962，模型預(yù)測(cè)指數(shù)2＝0.945，說(shuō)明該模型有較好的解釋能力和預(yù)測(cè)能力，可用于區(qū)分北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑。圖4-B為OPLS-DA模型的變量重要性投影值（variable importance in projection，VIP），VIP值的大小代表了各指標(biāo)成分對(duì)模型貢獻(xiàn)率的大小，值越大貢獻(xiàn)越大，表明該色譜峰對(duì)于北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑的分類(lèi)貢獻(xiàn)越大，同時(shí)也是導(dǎo)致北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑相區(qū)分的差異成分。以VIP＞1為界限進(jìn)行篩選，結(jié)合北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑指紋圖譜中的16個(gè)共有峰峰面積檢驗(yàn)分析，結(jié)果共確定7個(gè)差異性色譜峰，分別為峰1、4（柴胡皂苷c）、6、7（柴胡皂苷a）、9（柴胡皂苷b2）、10（柴胡皂苷b1）及13（柴胡皂苷d）。

圖3 PCA得分圖

圖4 OPLS-DA得分圖(A) 和VIP值(B)

2.7 北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑含量測(cè)定研究

2.7.1 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密移取“2.5.2”項(xiàng)下各對(duì)照品溶液適量，稀釋成一系列不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，按照“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)（）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得到5種成分的回歸方程，結(jié)果分別為柴胡皂苷a＝3 153.1－22 544，2＝0.999 6，線(xiàn)性范圍204.67～1228.00 μg/mL；柴胡皂苷c＝2 428.8－1 056.3，2＝0.999 4，線(xiàn)性范圍30.83～185.00 μg/mL；柴胡皂苷d＝3 431.6－4 363.2，2＝0.999 5，線(xiàn)性范圍150.83～905.00 μg/mL；柴胡皂苷b1＝2 576.0－435.47，2＝0.999 5，線(xiàn)性范圍6.65～133.00 μg/mL；柴胡皂苷b2＝2 620.1＋146.96，2＝0.999 3，線(xiàn)性范圍5.30～106.00 μg/mL。

2.7.2 精密度考察 取CHD1樣品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜方法重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2峰面積RSD值分別為0.68%、2.00%、1.98%、2.00%、0.97%，表明儀器的精密度良好。

2.7.3 重復(fù)性考察 取同一批北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉，按“2.5.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量RSD值分別為0.38%、3.07%、0.49%、1.78%、1.12%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.7.4 穩(wěn)定性考察 取CHD1樣品溶液，室溫放置 0、2、4、8、12、24 h。按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2峰面積RSD值分別為1.13%、0.95%、2.81%、1.01%、1.16%，表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7.5 加樣回收率 取已知含量北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉約0.5 g，精密稱(chēng)定，共6份，按1∶1加入對(duì)照品，按“2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2的平均回收率分別為97.63%、96.12%、97.00%、96.17%、96.71%，符合相關(guān)規(guī)定，表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.7.6 北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑指標(biāo)成分的含量測(cè)定 分別取北柴胡和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉，按“2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算柴胡皂苷a，柴胡皂苷c，柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2的含量，結(jié)果見(jiàn)表4，20批北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑的柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為4.90～6.22、0.83～3.80、0.19～0.65、3.34～10.40、20.76～34.99 mg/g，均值分別為5.56、2.16、0.38、7.24、28.09 mg/g。20批醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑的柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍分別在3.21～6.09、0.58～3.38、0.08～0.54、5.31～10.79、21.07～49.67 mg/g，均值分別為4.30、1.67、0.17、8.10、31.81 mg/g。

表4 北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑中指標(biāo)成分含量

Table 4 Multi-index components content of CHD and VCHD

批號(hào)柴胡皂苷a/(mg?g?1)柴胡皂苷c/(mg?g?1)柴胡皂苷d/(mg?g?1)柴胡皂苷b1/(mg?g?1)柴胡皂苷b2/(mg?g?1) CHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHD S15.754.281.731.240.200.133.356.3220.8328.27 S25.633.611.651.160.190.124.266.6620.7621.07 S35.785.631.751.710.200.203.345.3120.8629.74 S46.205.902.242.140.210.204.136.6922.9122.15 S55.645.321.661.570.200.195.276.3120.8028.92 S65.733.591.550.720.470.166.248.1730.8124.13 S75.703.281.990.580.490.147.448.1631.5422.33 S86.223.482.200.620.560.167.776.1734.9923.45 S96.196.092.142.100.550.547.757.1934.8922.62 S105.543.212.000.580.430.146.729.1429.4121.89 S115.973.571.500.980.340.1010.409.2823.0629.76 S125.034.070.831.210.230.107.458.1525.5834.69 S135.513.451.221.170.290.088.378.2729.2428.63 S145.534.181.231.060.290.108.278.1629.4034.99 S155.054.191.350.780.260.107.569.1625.6835.24 S165.283.883.802.830.650.169.8110.7932.8338.86 S174.904.633.513.240.300.208.149.6830.0148.63 S185.193.943.602.910.560.159.459.6832.7839.76 S195.234.893.643.380.580.349.538.9032.7451.37 S205.164.753.603.370.560.159.509.7832.6549.67

2.7.7 北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑指標(biāo)成分含量差異性分析 運(yùn)用GraphPad Prism 8.0.1軟件，采用方差分析分別對(duì)北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑中5種指標(biāo)成分含量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，＜0.05表示差異顯著，結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果顯示，北柴胡醋制前后指標(biāo)成分柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。北柴胡醋制后標(biāo)準(zhǔn)湯劑中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d含量較低，柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2含量較高（＜0.05）。

表5 北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑指標(biāo)成分含量差異性分析(, n = 20)

Table5 Analysis of differences of index components in CHD and VCHD (, n = 20)

樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)/(mg?g?1) 柴胡皂苷a柴胡皂苷c柴胡皂苷d柴胡皂苷b1柴胡皂苷b2 CHD5.562±0.3992.160±0.9390.378±0.1607.238±2.17328.089±5.050 VCHD4.297±0.881*1.668±0.987*0.173±0.103*8.099±1.489*31.809±9.672*

與CHD比較：*＜0.05

*< 0.05CHD

3 討論

3.1 飲片的收集

北柴胡主產(chǎn)區(qū)和道地產(chǎn)區(qū)為陜西省，河北、河南、山西及吉林等地，本實(shí)驗(yàn)收集的20批北柴胡來(lái)源于道地產(chǎn)區(qū)、主產(chǎn)區(qū)及集散地共4個(gè)產(chǎn)地，實(shí)驗(yàn)取材在一定程度上能夠涵蓋藥材市場(chǎng)實(shí)際情況，使本實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)湯劑具有較好的代表性，可用于后續(xù)質(zhì)量評(píng)價(jià)研究。

3.2 指紋圖譜差異性分析

本研究分別建立北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑HPLC指紋圖譜，分別確認(rèn)了16個(gè)共有峰，對(duì)指紋圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，各批次相似度結(jié)果均良好。為進(jìn)一步分析北柴胡與醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑，尋找二者差異性成分，本實(shí)驗(yàn)引入化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，通過(guò)PCA和OPLS-DA分析確定指紋圖譜中7個(gè)具有顯著差異的色譜峰，通過(guò)對(duì)照品指認(rèn)峰4為柴胡皂苷c，峰7為柴胡皂苷a，峰9是柴胡皂苷b2，峰10為柴胡皂苷b1，峰13為柴胡皂苷d，峰1及峰6尚未知，后續(xù)將會(huì)進(jìn)一步采用液質(zhì)聯(lián)用手段對(duì)其進(jìn)行鑒定，以便更好地對(duì)北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行質(zhì)量控制。

3.3 含量測(cè)定差異性分析

北柴胡中皂苷類(lèi)化合物是其主要化學(xué)成分，也是其發(fā)揮藥理藥效最重要的成分[18]。《中國(guó)藥典》、《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)》及各部分地方標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)柴胡藥材多以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d為質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)。中藥飲片是中藥制劑的原料藥，本研究對(duì)北柴胡飲片及醋柴胡飲片進(jìn)行含量測(cè)定分析，北柴胡飲片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質(zhì)量分?jǐn)?shù)均值分別為28.50、2.66、26.36、3.64、3.01 mg/g。醋北柴胡飲片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質(zhì)量分?jǐn)?shù)均值分別為24.93、2.83、22.69、4.38、5.86 mg/g。結(jié)果表明北柴胡飲片醋制后柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量下降，柴胡皂苷c含量無(wú)顯著變化、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量升高。

結(jié)合HPLC指紋圖譜差異分析，北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑中共7個(gè)差異性成分，為進(jìn)一步驗(yàn)證差異性結(jié)果，建立其中5個(gè)化學(xué)成分含量測(cè)定方法，對(duì)醋制前后標(biāo)準(zhǔn)湯劑含量結(jié)果對(duì)比分析研究。結(jié)果表明北柴胡醋制后標(biāo)準(zhǔn)湯劑中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d含量下降，柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2含量升高。

綜上研究表明，柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量在各工藝環(huán)節(jié)（飲片-醋制飲片-標(biāo)準(zhǔn)湯劑）均有變化，分析原因可能是醋制對(duì)各成分的含量存在影響，在質(zhì)量傳遞過(guò)程中醋制北柴胡飲片可能會(huì)增強(qiáng)其有效成分的溶出，研究表明[19-20]柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d的苷元為環(huán)氧醚型，結(jié)構(gòu)中含有13，28-環(huán)氧鍵，屬I(mǎi)型柴胡皂苷，在酸性環(huán)境中控制溫度等條件可使柴胡皂苷c轉(zhuǎn)化為柴胡皂苷h（II型柴胡皂苷）。同時(shí)有研究表明在水煎液中，柴胡皂苷a及柴胡皂苷d結(jié)構(gòu)中13和28號(hào)位的氧醚環(huán)結(jié)構(gòu)易斷裂，柴胡皂苷a、柴胡皂苷d會(huì)轉(zhuǎn)化為柴胡皂苷b1（II型柴胡皂苷）、柴胡皂苷b2（II型柴胡皂苷），柴胡皂苷d結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，會(huì)轉(zhuǎn)化為大量的柴胡皂苷b2，柴胡皂苷a相對(duì)于柴胡皂苷d較穩(wěn)定，但柴胡皂苷a在中性環(huán)境中轉(zhuǎn)化產(chǎn)物主要是羥基柴胡皂苷a，且羥基柴胡皂苷a會(huì)轉(zhuǎn)化為柴胡皂苷b1，這與現(xiàn)有研究結(jié)果相一致[21-22]。

北柴胡醋制后對(duì)二甲苯所致大鼠耳腫脹有拮抗作用[23-24]，同時(shí)能減輕CCl4造成的小鼠肝損傷，降低小鼠體內(nèi)的谷草轉(zhuǎn)氨酶轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶。文獻(xiàn)報(bào)道[25]，柴胡皂苷b2具有同樣藥理活性，此外還具有抗凋亡[26]、抗腫瘤[27]、抗病毒[28]等藥理作用。由本研究結(jié)果推測(cè)，II型柴胡皂苷可能是發(fā)揮藥理作用的重要成分，I型柴胡皂苷向II型柴胡皂苷的轉(zhuǎn)化可能是引起北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑和醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑差異的主要原因之一，建議對(duì)二者質(zhì)量控制時(shí)應(yīng)考慮對(duì)I、II型柴胡皂苷的測(cè)定。

3.4 小結(jié)

中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑作為臨床制劑的標(biāo)準(zhǔn)參照物，為衡量中藥配方顆粒是否與臨床湯劑基本一致的物質(zhì)基準(zhǔn)，用來(lái)標(biāo)準(zhǔn)化不同的臨床用藥形式，保障用藥的準(zhǔn)確性和劑量的一致性，具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

北柴胡與醋柴胡的標(biāo)準(zhǔn)湯劑作為相關(guān)成型制劑與傳統(tǒng)湯劑的中間橋梁，在配方顆粒、中成藥、經(jīng)典名方等制劑生產(chǎn)過(guò)程有著十分重要的地位。本研究從北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑的pH值、出膏率、HPLC指紋圖譜和多指標(biāo)成分含量測(cè)定方法入手，全面對(duì)二者質(zhì)量進(jìn)行分析，建立了科學(xué)和實(shí)用的北柴胡及醋北柴胡標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，為二者相關(guān)制劑的鑒別和質(zhì)量控制提供參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 陳士林. 標(biāo)準(zhǔn)湯劑——提升中藥配方顆粒質(zhì)量的重要橋梁[N]. 中國(guó)醫(yī)藥報(bào), 2021-03-09(003).

[2] 中國(guó)藥典[S]. 一部. 2020: 280.

[3] 夏召弟, 劉霞. 北柴胡化學(xué)成分及質(zhì)量控制方法研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥, 2021, 23(5): 940-949.

[4] 黃海強(qiáng). 柴胡屬植物化學(xué)成分和質(zhì)量控制研究及天目藜蘆化學(xué)成分研究 [D]. 上海: 第二軍醫(yī)大學(xué), 2010.

[5] 陳朝, 伍小燕. 柴胡有效成分提取分離方法的研究進(jìn)展 [J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志, 2011, 15(19): 190-192.

[6] Yu M, Chen H, Liu S H,. Differential expression of genes involved in saikosaponin biosynthesis betweenDC. andWilld [J]., 2020,doi: 10.3389/fgene.2020. 583245.

[7] 李書(shū)啟. 柴胡疏肝散抗氧化活性及其活性成分柚皮苷藥代動(dòng)力學(xué)的研究 [D]. 北京: 北京化工大學(xué), 2010.

[8] 孫婷婷. 北柴胡飲片化學(xué)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 [D]. 長(zhǎng)春: 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué), 2020.

[9] 趙香妍, 劉長(zhǎng)利. 中藥柴胡的研究概況與發(fā)展趨勢(shì) [J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2015, 26(4): 963-966.

[10] Zhang W H, Sun X L, Sui W W,. Quality control of Xiebai San Standard Decoction assisted by network pharmacology strategy [J]., 2020, 83(9): 873-884.

[11] 張偉, 陳萍, 朱蕾. 醋制柴胡炮制經(jīng)驗(yàn)探討 [J]. 基層醫(yī)學(xué)論壇, 2019, 23(17): 114-115.

[12] 李軍, 姜華, 張延萍, 等. 柴胡水煎液中柴胡皂苷a和d的溶出與轉(zhuǎn)化差異 [J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2014, 49(19): 1692-1696.

[13] 中國(guó)藥典[S]. 四部. 2020: 251.

[14] 高文義, 王康宇, 貢濟(jì)宇, 等. 基于化學(xué)模式識(shí)別分析的醋北柴胡HPLC指紋圖譜研究 [J]. 中藥材, 2020(9): 2200-2203.

[15] 馬守芳, 孫江偉, 高曉潔, 等. HPLC-ELSD同時(shí)測(cè)定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷含量 [J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2021, 38(8): 821-826.

[16] 陳士林, 劉安. 《中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑》(第二卷) [J]. 北京: 科學(xué)出版社, 2019: 8.

[17] 竇志華, 許波, 居宇峰, 等. 梔子標(biāo)準(zhǔn)湯劑量值傳遞規(guī)律研究 [J]. 中草藥, 2021, 52(23): 7162-7175.

[18] 許磊, 田稷馨, 宋瑞, 等. 柴胡醋制前后柴胡皂苷a、b2、c、d的LC-MS/MS法測(cè)定及比較 [J]. 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 43(4): 334-340.

[19] Shimizu K, Amagaya S, Ogihara Y. New derivatives of saikosaponins [J]., 1985, 33(8): 3349-3355.

[20] 閔宇航, 王京輝, 范妙璇, 等. 柴胡飲片皂苷類(lèi)成分變化及質(zhì)量控制研究 [J]. 藥物分析雜志, 2014, 34(5): 836-843.

[21] 劉樹(shù)強(qiáng), 王術(shù)玲, 高曉玲, 等. 柴胡水煎過(guò)程中皂苷成分的變化規(guī)律 [J]. 中藥新藥與臨床藥理, 2013, 24(6): 602-606.

[22] 王麗娜, 汪巍, 徐馳, 等. 柴胡醋制前后抗炎作用比較研究 [J]. 中成藥, 2013, 35(5): 1079-1081.

[23] Li Z Y, Sun H M, Xing J,. Chemical and biological comparison of raw and vinegar-baked[J]., 2015, 165: 20-28.

[24] Shin J S, Im H T, Lee K T. Saikosaponin B2suppresses inflammatory responses through IKK/IκBα/NF-κB signaling inactivation in LPS-induced RAW 264.7 macrophages [J]., 2018, 42: 342-353.

[25] 高子涵, 王紅偉, 呂行直, 等. 柴胡皂苷b2通過(guò)抑制線(xiàn)粒體凋亡通路減輕過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的L-02細(xì)胞損傷 [J]. 中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志, 2018, 32(7): 543-549.

[26] Zhao Y, Feng L M, Liu L J,. Saikosaponin b2enhances the hepatotargeting effect of anticancer drugs through inhibition of multidrug resistance-associated drug transporters [J]., 231: 116557-116557.

[27] Lin L T, Chung C Y, Hsu W C,. Saikosaponin b2is a naturally occurring terpenoid that efficiently inhibits hepatitis C virus entry [J]., 2014, 62(3): 541-548.

[28] Lee W P, Lan K L, Liao S X,. Antiviral effect of saikosaponin B2in combination with daclatasvir on NS5A resistance-associated substitutions of hepatitis C virus [J]., 2019, 82(5): 368-374.

Quality difference analysis of standard decoction ofand vinegar-processed

SONG Chi, GE Wei, ZOU Jia-li, WANG Yue, TAN Juan-juan,GONG Ji-yu

College of Pharmacy, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China

To establish the quality evaluation method and investigate the quality differences of standard decoction of Chaihu () (CHD) and vinegar-processed(VCHD).Twenty batches of CHD and VCHD samples were prepared, the extract rates and pH were determined, respectively. Chromatographic fingerprints and multi-index content determination method of CHD and VCHD were generated from thehigh performance liquid chromatography (HPLC) and the quality differences were analyzed using the method of chemometrics and statistics.The extract rates and pH value of VCHD standard decoction was decreased. The fingerprints of the CHD and VCHD were established, a total of 16 common peaks were determined respectively, and five peaks were identified; The similarity of CHD and VCHD were 0.976—0.995 and 0.946—0.996, respectively. A clear classification among CHD and VCHD sample was observed in the score plot of the principal component analysis (PCA), then seven marker compounds were selected and identified by orthogonal partial least square discriminant analysis (OPLS-DA), including peaks 1, 4 (saikosaponin c), peaks 6, 7 (saikosaponin a), peak 9 (saikosaponin b2), peak 10 (saikosaponin b1), and peak 13 (saikosaponin d). Multiple-index content determination results showed that there was significant difference in the content of index components before and after vinegar processing of CHD (< 0.05). The contents of saikosaponin a, saikosaponin c and saikosaponin d were lower. Besides, saikosaponin b1and saikosaponin b2was higher in the standard decoction of VCHD.A scientific and practical quality evaluation method of CHD and VCHD was established, which also provided a reference for the identification and quality control of related preparations ofand its vinegar-processed products.

DC.; vinegar-processing; standard decoction; chromatographic fingerprints; orthogonal partial least squares-discriminant analysis;saikosaponin;quality control

R283.6

A

0253 - 2670(2022)08 - 2331 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.08.009

2021-11-06

國(guó)家中藥標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目（ZYBZH-Y-JL-25）；吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（20210204078YY）

宋 馳（1998—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幏治鰧W(xué)。E-mail: 2697733699@qq.com

貢濟(jì)宇，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥分析學(xué)研究。E-mail: gjy0431@126.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]