血清甲胎蛋白、甲胎蛋白異質(zhì)體、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3聯(lián)合診斷肝細(xì)胞肝癌的臨床價(jià)值

李 輝 趙 娟 徐沛演 張成芳 譚麗娟 劉美三

1.廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院內(nèi)科，廣東廣州 510800；2.廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510800；3.廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院感染性疾病科，廣東廣州 510800；4.廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院腫瘤科，廣東廣州 510800

肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）為臨床常見惡性疾病[1]。研究顯示，HCC 發(fā)病隱匿，進(jìn)展快，易轉(zhuǎn)移，多數(shù)患者確診即為中晚期，已喪失最佳手術(shù)時(shí)機(jī)，故早期診斷HCC 極為重要[2]。腫瘤標(biāo)志物（tumor markers，TM）檢測盡管取材方便，簡便易行，但單一指標(biāo)檢測敏感性、特異性相對較低，臨床常易出現(xiàn)漏診、錯(cuò)診[3]。血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）、甲胎蛋白異質(zhì)體（Alpha-fetoprotein-L3，AFP-L3）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3，GPC3）為診斷HCC的重要TM，對于準(zhǔn)確診斷HCC 具有重要價(jià)值，但單一TM 診斷效能相對較低，臨床多行2 種或多種TM 聯(lián)合診斷，以提高TM 的診斷效能。本研究探討AFP、AFP-L3、GPC3 聯(lián)合診斷HCC 的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年4月至2021年3月廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院診斷的136 例疑似HCC 患者納入HCC 組，129 例肝臟良性疾病患者納入良性組，選取同期廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院診治的140 例肝炎肝硬化患者納入對照組。HCC 組中，男86 例，女50 例；年齡29～78歲，平均（53.74±5.53）歲；中國肝癌的分期方案（China liver cance staging，CNLC）分期：Ⅰa 期14 例，Ⅰb 期19例，Ⅱa 期24 例，Ⅱb 期46 例，Ⅲa 期33 例；Child 分級(jí)：A 級(jí)104 例，B 級(jí)32 例； 美國東部腫瘤協(xié)作組（Eastern Cooperative Oncology Group，ECOG） 評分0～2 分，平均（1.18±0.13）分。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》[4]標(biāo)準(zhǔn)；②患者對本研究知情同意；③患者卡氏（Karnofsky，KPS）評分＞60 分。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有放化療史者；②轉(zhuǎn)移性肝癌者；③腫瘤已轉(zhuǎn)移者；④合并其他惡性腫瘤者；⑤依從性差者。良性組中，男81例，女48 例；年齡29～76 歲，平均（53.81±5.55）歲。對照組中，男89 例，女51 例；年齡28～78 歲，平均（53.95±5.60）歲。三組患者的性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

HCC 組、良性組患者均于入院后第2 天抽取患者5 ml 清晨空腹靜脈血，置于促凝管內(nèi)，以離心機(jī)離心5 min，離心半徑：8 cm；離心速度：3000 r/min，分離血清并保存于-20℃冰箱內(nèi)待檢。AFP 以化學(xué)發(fā)光法檢測；AFP-L3 以微量離心柱法檢測；GPC3 以酶聯(lián)免疫法檢測。上述檢測均嚴(yán)格按照試劑盒規(guī)定步驟進(jìn)行。對照組患者以上述方法檢測AFP、AFP-L3、GPC3 水平。比較三組患者的各項(xiàng)檢測結(jié)果。陽性預(yù)測值=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陽性）例數(shù)×100%；陰性預(yù)測值=真陰性例數(shù)/（真陰性+假陰性）例數(shù)×100%；靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陰性）例數(shù)×100%；特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）例數(shù)×100%；準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)系數(shù)法，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者血清AFP、AFP-L3、GPC3 水平的比較

HCC 組患者的血清AFP、AFP-L3、GPC3 水平均高于良性組、對照組，良性組患者的血清AFP、AFPL3、GPC3 水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 三組患者血清AFP、AFP-L3、GPC3 水平的比較（±s）

表1 三組患者血清AFP、AFP-L3、GPC3 水平的比較（±s）

注 與HCC 組比較，aP＜0.05； 與良性組比較，bP＜0.05；AFP： 甲胎蛋白；AFP-L3：甲胎蛋白異質(zhì)體；GPC3：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3；HCC：肝細(xì)胞肝癌

組別 例數(shù) AFP（μg/L） AFP-L3（%） GPC3（μg/L）HCC 組良性組對照組F 值P 值136 129 140 140.86±16.31 101.89±11.87a 16.52±1.85ab 4127.678＜0.001 16.09±1.74 12.64±1.33a 7.07±0.73ab 1622.252＜0.001 10.19±1.21 2.73±0.30a 1.08±0.13ab 6113.744＜0.001

2.2 AFP、AFP-L3、GPC3 單獨(dú)、聯(lián)合診斷HCC 的診斷效能

對HCC 組所有患者進(jìn)行診斷效能分析，AFP、AFP-L3、GPC3 聯(lián)合診斷HCC 的靈敏度、特異度、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值、準(zhǔn)確度均高于AFP、AFP-L3、GPC3 單獨(dú)及兩兩聯(lián)合診斷（表3）。

表3 AFP、AFP-L3、GPC3 單獨(dú)、聯(lián)合診斷HCC 的診斷效能[%（n/N）]

3 討論

影像學(xué)檢查及肝組織病理活檢是診斷HCC 的重要方法[5]。影像學(xué)檢查可明確診斷體積較大的HCC 病灶。但對于初發(fā)微小病灶，影像學(xué)檢查卻并無優(yōu)勢[6]。肝組織病理活檢是診斷HCC 的金標(biāo)準(zhǔn)，該方法診斷HCC 盡管具有較高的診斷符合率，但難以取材，無法進(jìn)行普查[7]。

TM 是腫瘤發(fā)生、進(jìn)展過程中產(chǎn)生的標(biāo)志性物質(zhì)，在腫瘤篩查及早期診斷中具有重要價(jià)值[8]。研究顯示，血清TM 檢測有助于HCC 的診斷[9]。AFP 為人胚胎期即存在的糖蛋白，出生后其水平常降低至常態(tài)。通常，成人肝細(xì)胞不分泌AFP，故其血清AFP 水平相對較低，多不高于20 ng/ml[10]。肝細(xì)胞癌變時(shí)，未分化的肝細(xì)胞可表達(dá)大量AFP，且隨著癌變程度加重，AFP 表達(dá)程度也逐漸升高，導(dǎo)致血清AFP 水平升高，因此檢測血清AFP 可掌握HCC 發(fā)生進(jìn)展[11]。資料顯示，盡管血清AFP 可用于HCC 的診斷，但因良性肝病、妊娠期女性AFP 也存在程度不同升高，故其臨床診斷率相對較低，且部分晚期HCC 患者AFP 水平并無特異性改變，臨床診斷較為困難[12]。郭鴻雁等[13]研究顯示，HCC 患者的血清AFP 高于肝臟良性疾病患者及正常人，且其AFP 診斷HCC 的敏感度（71.3%）、特異度（77.7%）偏低。

肝病患者多存在蛋白糖基化異常，生成多種具有腫瘤特異性的糖鏈結(jié)構(gòu)[14]。AFP-L3 為肝臟分泌的AFP 異質(zhì)體，既往常用于評價(jià)早期血管浸潤及腫瘤轉(zhuǎn)移，因其血清水平與腫瘤惡化程度成正相關(guān)，故近年來多用于早期HCC 的臨床診斷[15]。曾繁利等[16-18]證明，與正常人群及肝臟良性疾病相比較，HCC 患者的AFP-L3 水平顯著升高，且AFP-L3 單獨(dú)診斷HCC 的敏感度為76%，特異度為93%。

GPC-3 為磷脂酰肌醇蛋白聚糖，可經(jīng)Yes 相關(guān)蛋白、生長因子及Wnt 通道調(diào)控HCC 的發(fā)生及進(jìn)展[19]。GPC-3 高表達(dá)可誘導(dǎo)生成Wnt-frizzled 復(fù)合物，進(jìn)而激活下游β-catenin，促進(jìn)HCC 發(fā)展。GPC-3 可結(jié)合成纖維細(xì)胞生長因子，誘導(dǎo)后者結(jié)合其相關(guān)受體促進(jìn)HCC 增殖[20]。研究顯示，GPC-3 在肝炎肝硬化患者及正常人血清中表達(dá)不顯著，但高表達(dá)于HCC 患者，故其可作為診斷HCC 的TM[21]。與AFP、AFP-L3 相似，GPC-3 診斷HCC 的敏感度也相對偏低[22]。王艷等[23]研究顯示，GPC3 診斷HCC 的靈敏度為69.5%。

本研究結(jié)果顯示，HCC 組患者的血清AFP、AFPL3、GPC3 水平均高于良性組、對照組，良性組患者的血清AFP、AFP-L3、GPC3 水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AFP、AFP-L3、GPC3 聯(lián)合診斷HCC 的靈敏度、特異度、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值、 準(zhǔn)確度均高于AFP、AFP-L3、GPC3 單獨(dú)及兩兩聯(lián)合診斷，提示AFP、AFP-L3、GPC3 是反映HCC 的重要指標(biāo)，三者聯(lián)合診斷HCC 可獲得更好的試驗(yàn)評估結(jié)果。

綜上所述，血清AFP、AFP-L3、GPC3 與HCC 關(guān)系密切，檢測其水平有助于HCC 的臨床診斷，且三者聯(lián)合檢測可顯著提高HCC 的診斷率，更大程度避免誤診、漏診。