不同天然基質(zhì)對(duì)條斑紫菜絲狀體培養(yǎng)的影響*

尚浩江，周 偉，胡傳明**，申 欣，朱朋昌，李 帥

(1.江蘇海洋大學(xué)，江蘇省海洋生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇連云港 222000；2.江蘇省海洋水產(chǎn)研究所，江蘇南通 226007；3.上海海洋大學(xué)，上海 201306)

條斑紫菜(Neopyropiayezoensis)是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)紅藻，主產(chǎn)于江蘇海區(qū)，此外山東與遼寧海區(qū)也有少量分布。2020-2021生產(chǎn)年度，條斑紫菜育苗面積達(dá)8×105m2，海上栽培面積4.1×104hm2，干紫菜產(chǎn)量5.6×109枚(數(shù)據(jù)由江蘇省紫菜協(xié)會(huì)提供)，條斑紫菜產(chǎn)業(yè)是我國(guó)長(zhǎng)江以北人工栽培海藻中最具經(jīng)濟(jì)價(jià)值的產(chǎn)業(yè)[1]。長(zhǎng)期以來(lái)?xiàng)l斑紫菜種苗培育效率滯后于栽培面積的快速發(fā)展，每年均會(huì)出現(xiàn)部分地區(qū)種苗供應(yīng)緊張的情況，導(dǎo)致種苗培育面積無(wú)序發(fā)展，育苗面積與栽培面積比逐年增加，育苗企業(yè)虧損面擴(kuò)大，不利于紫菜產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定。紫菜的種苗培育技術(shù)急需向機(jī)械化、智能化方向發(fā)展以提高育苗效率，而其中種苗培養(yǎng)基質(zhì)的篩選，以及突破貝殼基質(zhì)的制約因素而開發(fā)新型基質(zhì)，是解決工廠化育苗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

1953-1954年，日本藻類學(xué)家黑木宗尚和我國(guó)藻類學(xué)家曾呈奎幾乎同時(shí)完成了甘紫菜(Neopyropiatenera，曾用名Porphyratenera)生活史的研究，為紫菜的人工育苗打下理論基礎(chǔ)[2]，此后曾有自由絲狀體(Free-living conchocelis)采苗[3]、單孢子采苗[4]、紫菜葉狀體細(xì)胞酶法采苗[5]等無(wú)基質(zhì)育苗技術(shù)出現(xiàn)，均因采苗量達(dá)不到生產(chǎn)要求而未被市場(chǎng)接受。目前紫菜種苗產(chǎn)業(yè)仍采用基質(zhì)培養(yǎng)技術(shù)，且貝殼是唯一的培養(yǎng)基質(zhì)，天然貝殼由95%-99%的碳酸鈣(方解石、文石、球霰石及非晶態(tài))和1%-5%的蛋白質(zhì)(糖蛋白、多糖、幾丁質(zhì)和脂質(zhì)等)構(gòu)成[6]，種苗以貝殼絲狀體(Shell conchocelis[7])形式生長(zhǎng)于貝殼內(nèi)層。這與貝殼絲狀體的特殊生長(zhǎng)方式有關(guān)，紫菜果孢子附著于貝殼內(nèi)層表面，萌發(fā)形成絲狀體后鉆入貝殼生長(zhǎng)[8]，而硅藻、藍(lán)藻等雜藻不能鉆入貝殼，因此生產(chǎn)培養(yǎng)中可通過(guò)簡(jiǎn)單的清洗貝殼表面加以純化，從而可以大規(guī)模培養(yǎng)貝殼絲狀體。相反，懸浮培養(yǎng)的自由絲狀體常因雜藻而導(dǎo)致污染難以去除[9]。此外，貝殼絲狀體生長(zhǎng)于貝殼內(nèi)層表面一定深度，受光較為均勻，可以大量同步形成“雙分”，保障了短期內(nèi)大規(guī)模采苗的要求。

文蛤(Meretrixmeretrix)、牡蠣、三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)和扇貝的貝殼是4種廣泛應(yīng)用的紫菜種苗培養(yǎng)基質(zhì)，適宜紫菜絲狀體生長(zhǎng)且較易獲取[10]。Heo等[11]研究認(rèn)為牡蠣殼的紫菜絲狀體接種效率高于扇貝殼和文蛤殼。除貝殼外，也有研究表明蛋殼可作為紫菜種苗培養(yǎng)的基質(zhì)[12]。但目前對(duì)紫菜種苗培養(yǎng)技術(shù)研究主要聚焦于培養(yǎng)的環(huán)境因子上，如光照強(qiáng)度、光周期與培養(yǎng)水溫等[13-15]，以及黃斑病[16,17]等病害防治方面，未見對(duì)貝殼培育性能的系統(tǒng)性研究。因此，本研究選取不同基質(zhì)材料，如文蛤、近江牡蠣(Ostrearivularis)殼、三角帆蚌殼、蝦夷扇貝殼(Patinopectenyessoensis)殼、海月蛤(Placunaplacenta)殼、雞蛋殼、珍珠等生物合成基質(zhì)，以及方解石原石、霰石原石、幾丁質(zhì)碎片與殼聚糖薄膜等與貝殼成分相關(guān)的非生物基質(zhì)，擬通過(guò)比較分析，研究多種基質(zhì)對(duì)條斑紫菜貝殼絲狀體著生、生長(zhǎng)與殼孢子放散的影響，篩選最適培養(yǎng)基質(zhì)，為貝殼替代基質(zhì)的研究打下科學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

條斑紫菜自由絲狀體取自國(guó)家級(jí)紫菜種質(zhì)庫(kù)Y-9101品系，文蛤殼、近江牡蠣殼、三角帆蚌殼、蝦夷扇貝殼由如東華通水產(chǎn)品有限公司提供，海月蛤殼、雞蛋殼、珍珠、方解石原石、霰石原石從市場(chǎng)購(gòu)買，幾丁質(zhì)(Lot.G7TDKRJ)由東京化成工業(yè)株式會(huì)社生產(chǎn)，高黏度殼聚糖(Lot.C11029612)由上海麥克林生化科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 儀器

光照培養(yǎng)箱(MGZ-120B-3，上海丙林電子科技有限公司)；生物顯微鏡[E800，尼康儀器(上海)有限公司]；光譜閃爍照度計(jì)(SFIM-300，杭州遠(yuǎn)方光電信息股份有限公司)；掃描電子顯微鏡(JSM-6510，日本電子株式會(huì)社)。

1.3 方法

1.3.1 絲狀體接種與培養(yǎng)

將文蛤殼、近江牡蠣殼、三角帆蚌殼、蝦夷扇貝殼、海月蛤殼、雞蛋殼、珍珠、方解石原石和霰石原石清洗干凈，其中雞蛋殼放入有效氯含量5%(m∶V)的84消毒液中浸泡12 h，使雞蛋殼乳突層與蛋殼內(nèi)側(cè)的殼膜層纖維分離[18]，用鑷子將殼膜層清除干凈。殼聚糖加入2%(V∶V)乙酸配置成5%(V∶V)殼聚糖溶液，將5%殼聚糖溶液倒入培養(yǎng)皿自然晾干形成殼聚糖薄膜，沖洗至pH中性。將條斑紫菜自由絲狀體打碎成40-60 μm小段，分別接種于上述培養(yǎng)基質(zhì)上，接種密度為150 ind./cm2，將每種貝殼各3枚、雞蛋殼碎片3枚(每枚約10 cm2)、珍珠5粒放入培養(yǎng)盒培養(yǎng)，共設(shè)置4組平行。將方解石原石、霰石原石各3塊、殼聚糖薄膜3張、碎片狀幾丁質(zhì)1 g放入培養(yǎng)盒中共同培養(yǎng)，設(shè)置培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度(12.5±1.0) μmol/(m2·s)，培養(yǎng)溫度16℃，海水鹽度27‰，光照周期12D∶12L。

1.3.2 著生密度與著生效率的測(cè)量

接種后每周用生物顯微鏡觀察絲狀體著生情況，接種6周后貝殼等基質(zhì)表面藻斑肉眼清晰可見，統(tǒng)計(jì)藻斑數(shù)量，計(jì)算著生密度(著生密度=藻斑數(shù)/貝殼面積)，從而計(jì)算出著生效率(著生效率=著生密度/接種密度×100%)。

1.3.3 貝殼絲狀體長(zhǎng)度的測(cè)量

接種2周起通過(guò)測(cè)量藻斑直徑計(jì)算水平生長(zhǎng)面積(藻斑近似圓形)，至藻斑生長(zhǎng)交連到一起時(shí)停止測(cè)量。分別于第55天與第100天將貝殼等基質(zhì)沿著藻斑中心處縱切，采用掃描電鏡測(cè)量絲狀體縱向生長(zhǎng)長(zhǎng)度。

1.3.4 貝殼絲狀體殼孢子放散測(cè)量

為了研究不同培養(yǎng)基質(zhì)中貝殼絲狀體殼孢子的放散水平，接種120 d后，分別取每種貝殼基質(zhì)各1枚、珍珠5粒、雞蛋殼碎片1枚(約10 cm2)，置于50 mL海水中培養(yǎng)，設(shè)置4組平行。培養(yǎng)溫度16℃，光照條件為7:00-12:30光強(qiáng)(31.3±1) μmol/(m2·s)，12:30-18:30光強(qiáng)(6.3±1.0) μmol/(m2·s)，18:30至次日7:00黑暗。連續(xù)20 d測(cè)定單位面積培養(yǎng)基質(zhì)的日放散量[19]，每天中午鏡檢殼孢子放散量后，清洗貝殼并更換海水。通過(guò)測(cè)量各種基質(zhì)的接種面積(珍珠接種面積近似半球形)，計(jì)算不同基質(zhì)中殼孢子的日放散效率[殼孢子的日放散效率=殼孢子的日放散量/基質(zhì)接種面積，spores/(cm2·d)]。

1.3.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 7 (GraphPad Software Inc.，美國(guó))進(jìn)行處理。數(shù)據(jù)顯著性分析采用SPSS 22 (IBM，美國(guó))進(jìn)行單因素方差分析，設(shè)置顯著水平P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 條斑紫菜絲狀體著生情況及其不同培養(yǎng)基質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)

未發(fā)現(xiàn)條斑紫菜絲狀體在方解石原石、霰石原石上著生。幾丁質(zhì)碎片面積為1-12 mm2，浸入海水后逐漸軟化，表面未發(fā)現(xiàn)絲狀體附著。條斑紫菜絲狀體一端附著于殼聚糖薄膜表面，呈自由絲狀體樣向外生長(zhǎng)，并未鉆入薄膜內(nèi)部，藻絲有少量單側(cè)分枝，且分枝處無(wú)明顯隆起[圖1(a)]。而條斑紫菜絲狀體著生于文蛤殼等5種貝殼基質(zhì)以及雞蛋殼和珍珠基質(zhì)上，并向外生長(zhǎng)與向內(nèi)鉆入生長(zhǎng)，其中向外生長(zhǎng)呈自由絲狀體樣，與殼聚糖薄膜表面生長(zhǎng)的絲狀體無(wú)異；向內(nèi)鉆入基質(zhì)中，主分枝多于2條，向四周呈輻射生長(zhǎng)，側(cè)枝多呈對(duì)生，且多出現(xiàn)不定形隆起。在貝殼基質(zhì)和珍珠基質(zhì)中，條斑紫菜絲狀體著生后先于基質(zhì)表層生長(zhǎng)后鉆入內(nèi)部[圖1:(b)-(g)]，而在雞蛋殼中，絲狀體著生后即鉆入內(nèi)部，呈彌散狀[圖1(h)]。

圖1 條斑紫菜貝殼絲狀體著生于不同培養(yǎng)基質(zhì)的顯微圖

通過(guò)掃描電鏡對(duì)基質(zhì)縱切面結(jié)構(gòu)和絲狀體在基質(zhì)中生長(zhǎng)的痕跡進(jìn)行觀測(cè)，三角帆蚌殼、文蛤殼和珍珠外層由排列密集且整齊的細(xì)小文石多邊形板片相互疊加構(gòu)成[圖2:(a)-(d)]。這3種基質(zhì)剪切時(shí)斷裂面整齊。近江牡蠣殼、蝦夷扇貝殼和海月蛤殼由許多細(xì)長(zhǎng)的菱形方解石板條層層疊加構(gòu)成，切面在水平方向呈細(xì)條狀紋路[圖2:(e)-(f)]，剪切時(shí)易產(chǎn)生多層滑動(dòng)斷裂。條斑紫菜貝殼絲狀體在這6種基質(zhì)內(nèi)大多集中在基質(zhì)的表層，且更容易發(fā)育為孢子囊枝，下層的貝殼絲狀體數(shù)量較少，且呈營(yíng)養(yǎng)藻絲形態(tài)縱向生長(zhǎng)。雞蛋殼主要分為兩層結(jié)構(gòu)，分別是蛋殼內(nèi)側(cè)的乳突層和蛋殼外側(cè)的柵欄層，乳突層厚度約為100 μm，蛋殼厚度約為300-400 μm [圖2(g)]。兩層結(jié)構(gòu)的表層均分布大量貝殼絲狀體，且藻斑內(nèi)外發(fā)生重疊，顯示絲狀體穿透蛋殼生長(zhǎng)。

圖2 不同條斑紫菜貝殼絲狀體培養(yǎng)基質(zhì)切面掃描電鏡圖

2.2 不同培養(yǎng)基質(zhì)中條斑紫菜貝殼絲狀體的著生效率

絲狀體在近江牡蠣殼與雞蛋殼上著生效率最大，分別為(4.5±0.6)%、(4.2±0.6)%(P≥0.05)，其次為蝦夷扇貝殼與三角帆蚌殼，在珍珠基質(zhì)上的著生效率最低，為(1.7±0.6)%(圖3)。

S：蝦夷扇貝殼;H：三角帆蚌殼;M：近江牡蠣殼;D：雞蛋殼;Z：珍珠;W：文蛤殼;J：海月蛤殼。相同小寫字母表示不同組間差異未達(dá)顯著水平(P≥0.05)

2.3 不同培養(yǎng)基質(zhì)中條斑紫菜貝殼絲狀體的分布

接種兩周后絲狀體開始鉆入基質(zhì)中并形成貝殼絲狀體。在三角帆蚌、海月蛤、近江牡蠣、蝦夷扇貝和文蛤等貝殼基質(zhì)中貝殼絲狀體于第4周水平生長(zhǎng)速率最快，生長(zhǎng)速率均超過(guò)1 000 μm/周，第6至第10周水平生長(zhǎng)速率較慢，平均生長(zhǎng)速率為321-429 μm/周。蛋殼基質(zhì)中，貝殼絲狀體在第3至第9周的平均水平生長(zhǎng)速率為297 μm/周，第10周生長(zhǎng)速率最快，達(dá)768 μm/周。珍珠基質(zhì)中，貝殼絲狀體在第3至第8周水平生長(zhǎng)速率較慢，平均為317 μm/周，第9周生長(zhǎng)速率最快，達(dá)736 μm/周。在三角帆蚌殼、近江牡蠣殼和文蛤殼中，貝殼絲狀體前10周的平均水平生長(zhǎng)速率為63.5 μm/d (P≥0.05)；其次為蝦夷扇貝殼，為(59.5±10.6) μm/d；雞蛋殼中貝殼絲狀體的水平生長(zhǎng)速率最慢，為(39.9±6.9) μm/d(圖4)。

營(yíng)養(yǎng)藻絲階段，貝殼絲狀體在雞蛋殼中鉆入的深度最深，達(dá)(267.4±60.1) μm，其次為三角帆蚌殼與海月蛤殼，分別為(82.1±35.1) μm、(75.9±37.3) μm，而在近江牡蠣殼、蝦夷扇貝殼、文蛤殼以及珍珠中的鉆入深度基本相同(P≥0.05)(圖4)。

第13周，貝殼絲狀體由營(yíng)養(yǎng)藻絲發(fā)育為孢子囊枝后繼續(xù)生長(zhǎng)，孢子囊枝在雞蛋殼中的鉆入深度最深，穿透蛋殼生長(zhǎng)，達(dá)(334.9±15.0) μm；其次為蝦夷扇貝殼，鉆入深度為(168.5±44.8) μm；孢子囊枝在三角帆蚌殼、海月蛤殼、近江牡蠣殼、文蛤殼和珍珠中的鉆入深度基本一致，為(113.9±27.9) μm(P≥0.05)(圖4)。

S：蝦夷扇貝殼;H：三角帆蚌殼;M：近江牡蠣殼;D：雞蛋殼;Z：珍珠;W：文蛤殼;J：海月蛤殼。相同小寫字母表示不同組間差異未達(dá)顯著水平(P≥0.05)

2.4 不同培養(yǎng)基質(zhì)對(duì)條斑紫菜殼孢子放散的影響

貝殼絲狀體殼孢子前6 d平均日放散量均較低，后14 d平均日放散量差異較大，其中文蛤殼基質(zhì)殼孢子日放散量最大，達(dá)624 spores/(cm2·d)，其次為雞蛋殼和海月蛤殼，分別達(dá)360 spores/(cm2·d)、223 spores/(cm2·d)，三角帆蚌殼基質(zhì)殼孢子日放散量最小，為41 spores/(cm2·d) (圖5)。

S：蝦夷扇貝殼；H：三角帆蚌殼；M：近江牡蠣殼；D：雞蛋殼；Z：珍珠；W：文蛤殼；J：海月蛤殼

3 討論

紫菜種苗可采用平鋪或吊掛的方式培養(yǎng)，由于不同貝殼的成分、結(jié)構(gòu)以及質(zhì)地有差別，導(dǎo)致貝殼絲狀體的生長(zhǎng)與殼孢子放散量存在較大的差異。本研究中文蛤殼、近江牡蠣殼、三角帆蚌殼、蝦夷扇貝殼、海月蛤殼、雞蛋殼和珍珠等7種絲狀體培養(yǎng)基質(zhì)均為常見的天然材料，主要成分均為碳酸鈣，以及少量幾丁質(zhì)和蛋白質(zhì)，貝殼絲狀體在7種基質(zhì)中的生長(zhǎng)及發(fā)育水平差異明顯，可能與培養(yǎng)基質(zhì)的結(jié)構(gòu)、碳酸鈣結(jié)晶方式、晶體排列方式和有機(jī)成分等因素有關(guān)。Oaki等[20]對(duì)雞蛋殼、貝殼珍珠層、海綿骨骼、珊瑚和有孔蟲等5種不同生物礦物材料的納米結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其均由納米晶粒聚合形成。從基質(zhì)的結(jié)構(gòu)及結(jié)晶方式來(lái)看，文蛤殼和三角帆蚌殼內(nèi)側(cè)的珍珠層均由文石晶體組成[21]；珍珠外側(cè)的珍珠層也是由文石晶體組成；蝦夷扇貝殼的內(nèi)層由文石晶體組成，厚度為250-300 μm[22]；牡蠣殼的內(nèi)層由方解石晶體形態(tài)構(gòu)成[23]；雞蛋殼主要分為乳突層和柵欄層，其中的碳酸鈣主要以方解石形態(tài)存在[24]；而海月蛤殼為99%細(xì)長(zhǎng)的菱形方解石條板構(gòu)成的單葉微結(jié)構(gòu)。從晶體排列方式來(lái)看，Cain等[25]測(cè)得雞蛋殼中柵欄層的方解石晶體有著一致的取向性，晶體軸和蛋殼表面的垂直方向有16°-28°的傾斜角度，但是乳突層的晶體取向則是隨機(jī)的；蝦夷扇貝殼內(nèi)層的方解石晶體具有相同的傾斜角度；海月蛤殼具有獨(dú)特的透光性，可見光總透射率高達(dá)80%，這是因?yàn)槠涿總€(gè)方解石板條衍射為單晶[26]。本研究中雞蛋殼、蝦夷扇貝殼、近江牡蠣殼和海月蛤殼的培養(yǎng)層為方解石結(jié)晶形式，文蛤殼、珍珠和三角帆蚌殼屬于文石結(jié)晶形式。絲狀體在這兩種結(jié)晶形式的天然基質(zhì)中均能發(fā)育為貝殼絲狀體。

三角帆蚌、文蛤、牡蠣與蝦夷扇貝的貝殼常用于紫菜育苗產(chǎn)業(yè)，這4種貝殼基質(zhì)的結(jié)構(gòu)及硬度均有所差異(表1)。本研究顯示，在上述4種貝殼中，貝殼絲狀體在三角帆蚌、文蛤與近江牡蠣的貝殼中水平生長(zhǎng)速率高于蝦夷扇貝殼，生長(zhǎng)深度低于蝦夷扇貝(P≥0.05)。文蛤殼中孢子放散水平顯著高于其他3種貝殼，三角帆蚌殼最低，因此條斑紫菜殼孢子放散水平不能由水平生長(zhǎng)速率和生長(zhǎng)深度直接反映，還可能與培養(yǎng)基質(zhì)的硬度等物理量有關(guān)。

表1 紫菜育苗產(chǎn)業(yè)常用貝殼結(jié)構(gòu)及硬度

貝殼因其面積小、內(nèi)表面不平整的特點(diǎn)，導(dǎo)致紫菜種苗培育過(guò)程中清洗、鋪擺工序耗費(fèi)大量人力與時(shí)間，且其易翻覆，降低了采苗效率，因此具有較高平整度與組裝水平的貝殼替代基質(zhì)是未來(lái)紫菜種苗基質(zhì)發(fā)展的方向。本研究選取了與貝殼內(nèi)層相同晶體結(jié)構(gòu)的方解石原石、霰石原石，以及與貝殼內(nèi)層具有共同成分的殼聚糖薄膜、幾丁質(zhì)碎片進(jìn)行同步培養(yǎng)，未發(fā)現(xiàn)條斑紫菜絲狀體生長(zhǎng)于其中，僅在殼聚糖薄膜表面著生，并向外以自由絲狀體形態(tài)生長(zhǎng)，與鉆入生物合成基質(zhì)的貝殼絲狀體形態(tài)有明顯差異。從生物合成基質(zhì)的有機(jī)成分分析，文蛤殼的有機(jī)質(zhì)成分主要為幾丁質(zhì)、富含丙氨酸的不可溶蛋白質(zhì)、富含甘氨酸和天冬氨酸等酸性氨基酸的可溶性蛋白等；牡蠣殼中含有幾丁質(zhì)、糖蛋白、珍珠蛋白、天冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸和甘氨酸等[34-37]；三角帆蚌殼和珍珠的珍珠層文石結(jié)晶間的有機(jī)質(zhì)主要是幾丁質(zhì)纖維和類絲素蛋白，還含有甘氨酸和丙氨酸等[37]；雞蛋殼中的有機(jī)質(zhì)主要為蛋白質(zhì)、糖蛋白、蛋白多糖[38]，這些天然生物基質(zhì)中均含有1%-5%的有機(jī)成分[39-43]，因此紫菜絲狀體的著生與貝殼絲狀體的形成可能與基質(zhì)中的有機(jī)成分有關(guān)。

4 結(jié)論

條斑紫菜絲狀體可在生物合成基質(zhì)與殼聚糖薄膜表面著生并向外呈自由絲狀體樣生長(zhǎng)，向內(nèi)只在生物合成基質(zhì)中形成貝殼絲狀體，并發(fā)育至放散殼孢子，未發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)于殼聚糖薄膜內(nèi)，且未在方解石原石、霰石原石與幾丁質(zhì)碎片內(nèi)部著生。貝殼絲狀體在近江牡蠣殼與雞蛋殼中著生效率最高，分別達(dá)(4.5±0.6)%、(4.2±0.6)%；在三角帆蚌、近江牡蠣和文蛤貝殼中水平生長(zhǎng)速率最大，平均為63.5 μm/d(P≥0.05)；在雞蛋殼中縱向生長(zhǎng)最深，達(dá)(334.9±15.0) μm；在文蛤貝殼中的殼孢子放散量最高，其次為雞蛋殼。因此，除了常用于紫菜育苗生產(chǎn)的文蛤殼、近江牡蠣殼、三角帆蚌殼與扇貝殼外，雞蛋殼較為適宜貝殼絲狀體的著生、生長(zhǎng)與殼孢子放散。