白芷微型飲片制備工藝優(yōu)化△

李麗，張超，張凡，賈天柱，高慧

遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600

中藥飲片的炮制歷史悠久，“飲片”一詞最早出現(xiàn)在南宋著名學(xué)者周密的《武林舊事》中：“熟藥圓散，生藥飲片”，并一直沿用至今[1]。飲片有廣義、狹義之分。廣義飲片是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，將中藥材凈制、切制或炮炙成一定規(guī)格，供中醫(yī)臨床調(diào)劑及中成藥生產(chǎn)的配方原料。狹義飲片是指切制成一定形狀的、專供湯劑用的配方原料[2]。湯劑是中醫(yī)臨床用藥的最主要形式，專供湯劑用的狹義中藥飲片是中醫(yī)臨床處方藥，最能體現(xiàn)中醫(yī)用藥辨證施治的特點(diǎn)。但是長(zhǎng)久以來(lái)，作為中藥應(yīng)用于臨床的最終形式，飲片一直以粗放、傳統(tǒng)的形式呈現(xiàn)，存在調(diào)劑困難、煎煮費(fèi)時(shí)費(fèi)力、不易攜帶等問題，人們不斷地對(duì)傳統(tǒng)中藥飲片進(jìn)行改革，出現(xiàn)了中藥配方顆粒、破壁飲片等形式，在解決傳統(tǒng)飲片問題的同時(shí)，又帶來(lái)了等效性、調(diào)配折算等問題[3]。針對(duì)上述問題，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)賈天柱教授提出了“微型飲片”的概念，其是一種新型飲片，從“形”上進(jìn)行改進(jìn)，將傳統(tǒng)飲片化大為小，提高飲片有效成分的煎出率、流動(dòng)性，具備“規(guī)格劃一、流動(dòng)可調(diào)”的特點(diǎn)，便于智能調(diào)劑和煎煮，且最大限度地保留傳統(tǒng)飲片的特色[4]。

本研究以藥食同源藥材白芷為研究對(duì)象，對(duì)其微型飲片的切制工藝進(jìn)行優(yōu)化。白芷為傘形科植物白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.或杭白芷A.dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）Shan et Yuan 的干燥根，味辛，性溫，歸胃、大腸、肺經(jīng)，具有解表散寒、祛風(fēng)止痛、宣通鼻竅、燥濕止帶、消腫排膿的功效，常用于感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞流涕、鼻鼽、鼻淵、牙痛、帶下、瘡瘍腫痛等疾病[5]?，F(xiàn)代研究表明，白芷中主要含有歐前胡素、異歐前胡素等香豆素類及揮發(fā)油成分，其中，歐前胡素具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗過敏、抗腫瘤等藥理作用[6?9]。

臨床一般使用白芷飲片規(guī)格為厚片，厚度為2～4 mm[10]。本研究選擇白芷藥材，分別按照傳統(tǒng)飲片、微型飲片的規(guī)格，制備傳統(tǒng)白芷飲片與微型飲片，比較兩者在煎膏率和煎液中歐前胡素含量的差異，證明微型飲片入煎劑的優(yōu)勢(shì)，并進(jìn)一步優(yōu)選白芷微型飲片制備工藝。

1 材料

1.1 儀器

E2695 型液相色譜泵、2998 型光電二極管檢測(cè)器（PDA，美國(guó)Waters公司）；FA1004B 型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；AE240 型分析天平（瑞士Mettler?Toledo 公司）；Q 型超純水儀（美國(guó)Millipore 公司）；KQ?250DB 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DZKW?D?2 型電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；WGL?125B 型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；170319 型細(xì)集料流動(dòng)時(shí)間測(cè)定儀（紹興市上虞越達(dá)儀器廠）；DHF?200型粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）。

1.2 試藥

對(duì)照品歐前胡素（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110826?200307，純度＞98%）；乙腈、甲醇均為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

白芷藥材購(gòu)于河北安國(guó)藥材市場(chǎng)（批號(hào)：202008?1），經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)翟延君教授鑒定為白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.的干燥根，歐前胡素的含量符合《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）2020 年版不得少于0.08%的規(guī)定。自行切制白芷傳統(tǒng)飲片、微型飲片，見圖1。

圖1 白芷藥材、傳統(tǒng)飲片、微型飲片

2 方法與結(jié)果

2.1 歐前胡素含量測(cè)定

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取歐前胡素對(duì)照品適量，置于5 mL量瓶中，用乙腈稀釋并定容，配制成質(zhì)量濃度為0.582 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品粉末（過三號(hào)篩）約0.4 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇45 mL，超聲處理（300 W，50 kHz）1 h，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.3 色譜條件 ECOSIL C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：28 ℃；流速：0.8 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流動(dòng)相：乙腈?水（65∶35）；進(jìn)樣量20 μL。色譜圖見圖2。

圖2 歐前胡素對(duì)照品及供試品高效液相色譜圖

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0、1.000 0、2.000 0、4.000 0 mL，分別置于10 mL 量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，即得系列質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，在2.1.3項(xiàng)下色譜條件下每個(gè)質(zhì)量濃度對(duì)照品進(jìn)樣3次，每次20 μL。以對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），建立回歸方程：Y=1×108X+125 755（r=0.999 6），在0.003 637 5～0.232 800 0 mg·mL-1線性關(guān)系良好。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液按2.1.3 項(xiàng)下方法操作，連續(xù)進(jìn)樣6 次，每次進(jìn)樣量為20 μL，記錄待測(cè)物峰面積，結(jié)果歐前胡素峰面積的RSD為0.95%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一白芷樣品粉末6份，按照2.1.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按2.1.3 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果歐前胡素含量的RSD為0.83%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取白芷供試品溶液適量，室溫放置，分別于0、2、4、8、12、24 h，按2.1.3 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄各自峰面積，結(jié)果歐前胡素峰面積的RSD 為1.16%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的白芷樣品粉末6份，每份約0.2 g，精密稱定，分別精密加入歐前胡素對(duì)照品1 mL，對(duì)照品溶液的濃度為0.380 6 mg·mL-1，按照2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按2.1.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見表1。

表1 歐前胡素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2 傳統(tǒng)飲片與微型飲片煎膏率的測(cè)定

分別取白芷傳統(tǒng)飲片、微型飲片樣品各5 g，精密稱定，加10 倍量冷水浸泡40 min，直火加熱，水沸后改用文火煎煮30 min，濾過，藥液備用；藥渣加8 倍量水，繼續(xù)煎煮，水沸后改用文火煎煮20 min，濾過，合并2 次藥液，定容至100 mL 量瓶中，混勻。精密量取上述煎煮液50 mL 置于質(zhì)量恒定的蒸發(fā)皿中，于沸水浴上濃縮至干，然后置于烘干箱中105 ℃烘至質(zhì)量恒定，記錄煎膏質(zhì)量并按公式（1）計(jì)算煎膏率[11]。結(jié)果顯示，白芷微型飲片的煎膏率高于傳統(tǒng)飲片的煎膏率。

2.3 飲片制備成品率的測(cè)定

白芷藥材低溫干燥，控制含水量＜8%。取干燥后飲片100 g，清水悶潤(rùn)至軟后進(jìn)行切制，樣品干燥后，控制含水量＜8%，稱定成品飲片的質(zhì)量并按公式（2）計(jì)算成品率[11?12]。

2.4 飲片的流動(dòng)性考察

飲片流動(dòng)時(shí)間越短，摩擦力越小、流動(dòng)性越好。每次稱取白芷微型飲片100 g，采用細(xì)集料流動(dòng)時(shí)間測(cè)定儀，記錄打開閥門到樣品全部流出測(cè)定儀的時(shí)間，即為樣品的流動(dòng)時(shí)間，每個(gè)樣品測(cè)定10次[13?14]。

2.5 飲片切制工藝優(yōu)選

2.5.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法 根據(jù)實(shí)驗(yàn)前期文獻(xiàn)調(diào)研及初步預(yù)試驗(yàn)研究，確定烘制時(shí)間（A）、飲片粒徑（B）、干燥溫度（C）為考察因素，每個(gè)因素設(shè)定3個(gè)水平，不考慮交互作用，選用L9（34）正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，進(jìn)行微型飲片炮制工藝的優(yōu)化，白芷微型飲片制備工藝正交試驗(yàn)因素水平見表2。

表2 白芷微型飲片制備工藝正交試驗(yàn)因素水平

本試驗(yàn)的結(jié)果采用綜合評(píng)分法進(jìn)行評(píng)價(jià)，根據(jù)各指標(biāo)在微型飲片制備工藝及成品質(zhì)量的貢獻(xiàn)大小設(shè)計(jì)權(quán)重。各組試驗(yàn)以成品率最高的計(jì)為10 分，其相應(yīng)計(jì)分為E×10/最高成品率值；以煎膏率最高者計(jì)為30 分，相應(yīng)計(jì)分為F×30/最高煎膏率；以有效成分歐前胡素含量的最高值計(jì)為30 分，其他各組相應(yīng)計(jì)分為G×30/歐前胡素最高含量；以流動(dòng)時(shí)間最快得分計(jì)為30 分，其相應(yīng)計(jì)分為30×流動(dòng)時(shí)間最快值/H。按公式（3）計(jì)算綜合評(píng)分（P）。

其中，E為成品率，F(xiàn)為煎膏率，G為活性成分歐前胡素的含量，H為流動(dòng)時(shí)間。

2.5.2 正交試驗(yàn)結(jié)果 按照正交設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)，白芷微型飲片制備工藝正交試驗(yàn)安排及試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4。

表3 白芷微型飲片制備工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表4 白芷微型飲片制備工藝方差分析結(jié)果

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可知，影響綜合得分因素依次為B＞A＞C，即粒徑大?。竞嬷茣r(shí)間＞干燥溫度，其中，A、B對(duì)白芷微型飲片的制備工藝的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而C 對(duì)白芷微型飲片的制備工藝的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可確定白芷微型飲片的制備工藝為A2B1C2，即白芷切制成1～2 mm 的小方塊，在60 ℃條件下烘制10 h。

2.5.3 最佳工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 稱取3 份生白芷樣品各100 g，以最佳工藝方法切制，并按2.1～2.4 項(xiàng)下方法測(cè)定白芷微型飲片中的歐前胡素含量、煎膏率、成品率及流動(dòng)時(shí)間。結(jié)果見表5。

表5 白芷微型飲片制備工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，3份樣品中成品率、煎膏率、歐前胡素含量均較高且流動(dòng)時(shí)間較短，表明該工藝切實(shí)可行。

2.6 傳統(tǒng)飲片與微型飲片揮發(fā)油得率及水煎液中歐前胡素含量的測(cè)定

精密吸取2.2項(xiàng)下煎煮液50 mL，水浴揮干，加入90%甲醇25 mL，使之溶解，0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，按照2.1.3 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。按照《中國(guó)藥典》2020 年版（四部）附錄2204揮發(fā)油提取方法（甲法）操作提取白芷飲片揮發(fā)油，并按公式（4）計(jì)算揮發(fā)油得率[15]。結(jié)果顯示，微型飲片與傳統(tǒng)飲片揮發(fā)油得率相差不大，微型飲片水煎液中歐前胡素含量高于傳統(tǒng)飲片。

3 討論

中藥臨床多用湯劑[16]，因此，本實(shí)驗(yàn)采用水煎煮法比較有效成分在水煎液中的含量及其煎膏率，最大程度保證與臨床煎藥習(xí)慣相契合，提高臨床用藥的針對(duì)性?！吨袊?guó)藥典》2020年版中將歐前胡素作為白芷藥材指標(biāo)性成分，因此，本研究對(duì)比了白芷飲片水煎液中的歐前胡素的含量及煎膏率。結(jié)果表明，微型飲片的有效成分煎出率和煎膏率均顯著增加，即微型飲片較傳統(tǒng)飲片粒徑小，同質(zhì)量飲片與提取溶劑的接觸面積增大，有效成分提取更完全，從而大大提高了水煎液煎出率。同時(shí)，因?yàn)槲⑿惋嬈h(yuǎn)比細(xì)粉粗，依然可以保持中藥固有的藥效學(xué)基礎(chǔ)，充分體現(xiàn)了微型飲片的合理性與可行性[17]。本研究亦對(duì)比了微型飲片與傳統(tǒng)飲片所含揮發(fā)油含量差異，采用《中國(guó)藥典》2020年版揮發(fā)油提取方法（甲法），結(jié)果表明，兩者含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即微型飲片并未因飲片粒徑小而造成揮發(fā)性成分含量的降低。

本研究中對(duì)飲片中有效成分歐前胡素的含量進(jìn)行測(cè)定，采用的《中國(guó)藥典》2020 年版規(guī)定的提取方法，即用甲醇超聲提取，所測(cè)飲片中歐前胡素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.12%，同時(shí)，也對(duì)水煎液中歐前胡素的含量進(jìn)行測(cè)定，僅為0.005 2%，推測(cè)是由于歐前胡素水溶性較差所致。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，白芷微型飲片的流動(dòng)性明顯優(yōu)于傳統(tǒng)飲片，可以提高調(diào)劑人員工作效率，為患者和醫(yī)護(hù)人員節(jié)省更多的時(shí)間，更有利于相關(guān)調(diào)劑設(shè)備的研發(fā)。同時(shí)，本研究通過正交試驗(yàn)的方法對(duì)白芷微型飲片的最佳制備工藝進(jìn)行驗(yàn)證，也證明了該工藝確實(shí)可行，可用于工業(yè)化生產(chǎn)的需求。

微型飲片作為一種新型飲片，還需要制訂相關(guān)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，未來(lái)將進(jìn)一步對(duì)微型飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥理、藥效等方面與傳統(tǒng)飲片進(jìn)行對(duì)比研究，從而為微型飲片的安全性及臨床應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支持，以促進(jìn)中藥飲片行業(yè)的蓬勃發(fā)展。