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    覆盆子果實(shí)中鞣花酸含量變化與影響因素分析

    2022-03-31 09:10:04侯卓妮李宏法梁宗鎖童建全
    智慧農(nóng)業(yè)導(dǎo)刊 2022年4期
    關(guān)鍵詞:花酸茸毛覆盆子

    錢 燦 ,侯卓妮 ,李宏法 ,梁宗鎖 *,童建全

    (1.浙江理工大學(xué) 生命科學(xué)與醫(yī)藥學(xué)院,浙江 杭州 310018;2.浙江省植物次生代謝調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,浙江 杭州 310018;3.淳安漢廣中藥材初加工有限公司,浙江 杭州 311703;4.淳安縣農(nóng)業(yè)局中藥材管理站,浙江 杭州 311799)

    近年來,隨著藥用植物消費(fèi)量的增加,許多野生資源現(xiàn)已瀕臨滅絕。藥用植物作為大健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展的基礎(chǔ),其質(zhì)量的優(yōu)劣和安全直接影響著下游系列產(chǎn)品的質(zhì)量,只有保證藥材的品質(zhì),才能確保藥品的療效[1-3]。

    覆盆子藥材是薔薇科植物華東覆盆子(Rubus chingii Hu)的干燥果實(shí),為藥食同源,使用歷史悠久?,F(xiàn)代藥理學(xué)表明,覆盆子具有顯著的抗腫瘤、抗氧化、降血糖血脂、抗衰老、抗血栓、抗阿爾茨海默病、改善腎臟等作用。在臨床上常用于遺尿尿頻、遺精滑精和陽痿早泄等疾病的治療[4-8]。覆盆子中的主要化學(xué)成分有二萜(苷)、三萜(苷)、黃酮(苷)、甾體、香豆素類、酚酸類等。其中鞣花酸是《中華人民共和國藥典》(2020版,一部)中藥覆盆子中判別質(zhì)量的成分之一,鞣花酸具有抗腫瘤[9-14]、抗氧化、抗過敏、消炎抑菌、調(diào)節(jié)雌激素分泌和抗纖維化等多種生物學(xué)活性[15-19],其含量是衡量覆盆子藥材質(zhì)量優(yōu)劣的重要指標(biāo)。

    目前,關(guān)于覆盆子的研究主要集中在資源調(diào)查、種源分化、成分分離、質(zhì)量控制及藥理作用[20-28]方面,對覆盆子果實(shí)分級分類以及生長環(huán)境對覆盆子鞣花酸含量的影響仍不清楚。本研究通過對不同生長海拔高度、采收時間下獲得的相同種源的覆盆子樣品進(jìn)行分級分類和鞣花酸含量差異分析,為尋找影響覆盆子中鞣花酸含量積累的因素提供有力依據(jù)。

    1 材料與試藥

    1.1 儀器

    Waters ACQUITYTMUPLC超高效液相色譜儀;Waters ACQUITYTMUPLC BEH C18液相色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm);Sartorius BT25S 電子天平;電熱恒溫水浴鍋;LG-01高速中藥粉碎機(jī)。

    1.2 試劑

    鞣花酸對照品購自上海源葉生物科技有限公司(批號為 S24D11G135548,純度≥98%),甲醇、乙腈、甲酸(分析純)。

    1.3 藥材

    覆盆子果實(shí)藥材樣品均為2021年在浙江漢廣集團(tuán)覆盆子種植基地采摘,經(jīng)浙江理工大學(xué)生命科學(xué)與醫(yī)藥學(xué)院梁宗鎖教授鑒定為薔薇科植物掌葉覆盆子的干燥果實(shí),具體見表1、表2。

    表1 覆盆子藥材樣品

    表2 覆盆子藥材批號

    2 方法

    2.1 溶液制備

    2.1.1 對照品溶液的制備

    取鞣花酸對照品適量,精密稱定,加70%甲醇制成每1 mL含5 μg的溶液。

    2.1.2 供試品溶液的制備

    取覆盆子粉末(過四號篩)約0.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇50 mL,稱定重量。水浴鍋60℃加熱回流1 h,放冷,再稱定重量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液1mL,置5 mL量瓶中,用70%甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.2 鞣花酸色譜條件

    柱溫 35℃;流速 0.4 mL/min;進(jìn)樣量 5.0 μL;檢測波長254 nm;流動相為0.1%A甲酸溶液-B乙腈溶液(0~2 min,94%→94%A;2~3 min,94%→84%A;3~8 min,84%→80%A;8~10 min,80%→94%A)。

    理論板數(shù)按鞣花酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。色譜圖如圖1、圖2所示。

    圖1 鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

    圖2 覆盆子樣品色譜圖

    2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

    用鞣花酸對照品配制成 5.0 μg/mL、7.0 μg/mL、10.0 μg/mL、12.0 μg/mL 和 14.0 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用超高效液相色譜法測定,進(jìn)樣量5 μL,測定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo),鞣花酸質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸,繪制鞣花酸含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程,得到回歸方程為y=101 402x-102 299,R2=0.999 2。

    2.4 樣品分析

    精密稱取覆盆子樣品粉末,測定并計(jì)算覆盆子中鞣花酸含量。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 覆盆子分級

    據(jù)《中華人民共和國藥典》(2020版)記載,覆盆子為聚合果,由多數(shù)小核果聚合而成,呈圓錐形或扁圓錐形。表面黃綠色或淡棕色,頂端鈍圓,基部中心凹入。宿萼棕褐色,下有果梗痕。小果易剝落,每個小果呈半月形,背面密被灰白色茸毛,兩側(cè)有明顯的網(wǎng)紋,腹部有突起的棱線。因此,將覆盆子果實(shí)分為果核、果肉、被茸毛3個部位。

    市售覆盆子果實(shí)直徑0.8 cm以上為精品。因此,將覆盆子果實(shí)分為覆盆子果實(shí)直徑0.5~0.8 cm的0.5果和覆盆子果實(shí)直徑0.8 cm以上的0.8果。

    3.1.1 覆盆子果實(shí)不同部位對覆盆子鞣花酸含量的影響

    鞣花酸在覆盆子中的含量見表3:被茸毛>果肉>果核。被茸毛中鞣花酸含量遠(yuǎn)大于果肉和果核,果肉和果核中鞣花酸含量差別不大。因此,在種植、采收時應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注被茸毛的保護(hù)。

    表3 覆盆子果實(shí)不同部位中鞣花酸含量

    3.1.2 覆盆子果實(shí)大小對覆盆子鞣花酸含量的影響

    以浙江省夏同線基地為例,如圖3所示。鞣花酸的積累在不同大小的覆盆子果實(shí)中是有一定區(qū)別的,鞣花酸在果實(shí)直徑0.5~0.8 cm(0.5)中的含量>在果實(shí)直徑0.8cm以上(0.8)中的含量。果實(shí)變大過程中糖分的積累增加,從而使酸性物質(zhì)減少。因此,采收時應(yīng)挑選直徑0.5~0.8 cm的果實(shí),并不是果實(shí)越大越為精品。

    圖3 覆盆子不同果實(shí)直徑的鞣花酸含量

    3.2 覆盆子采收時間對覆盆子鞣花酸含量的影響

    以浙江省龍嶺塘基地0.5果為例,如圖4所示。鞣花酸的積累在采收時間早晚期是有一定區(qū)別的。覆盆子藥材應(yīng)以灰綠色和黃綠色為主,紅棕色越少越好,紅棕色通常為近成熟果實(shí),這種顏色果實(shí)也容易霉變或變質(zhì)。在4-5月采收期內(nèi),采收期早期優(yōu)于晚期,4月末之后鞣花酸含量會逐漸降低。因此,建議應(yīng)在4月中旬覆盆子果實(shí)酸澀時盡早采摘。

    圖4 覆盆子不同采收時間的鞣花酸含量

    3.3 覆盆子生長海拔對覆盆子鞣花酸含量的影響

    以浙江省基地各海拔高度為例,如圖5所示。鞣花酸的積累在海拔高與海拔低地區(qū)是有一定區(qū)別的,高海拔地區(qū)的覆盆子鞣花酸含量高。因此,覆盆子栽培時應(yīng)選擇海拔高的地區(qū)進(jìn)行種植。

    圖5 覆盆子不同生長海拔高度的鞣花酸含量

    4 討論與總結(jié)

    覆盆子在浙江省內(nèi)多地均為主導(dǎo)產(chǎn)業(yè),姚鑫等[29]確定了浙江省掌葉覆盆子青果具有較大的單株種質(zhì)選擇的潛力;毛菊華等[30]分析了華東覆盆子不同藥用部位果實(shí)、根、殘莖的化學(xué)成分含量;付彩群等[31]發(fā)現(xiàn)了浙江產(chǎn)覆盆子的鞣花酸含量顯著高于江西產(chǎn),不同采收期的覆盆子青果的鞣花酸比黃果高,不同種植條件下向陽與背陽覆盆子中鞣花酸含量差異相對較小,但是對覆盆子被茸毛部位、果實(shí)大小、生長海拔、具體采收時間以及浙江具體種植地方面的研究尚少。故本研究對浙江省內(nèi)不同覆盆子果實(shí)部位、大小,不同生長海拔和具體采收時間下的覆盆子鞣花酸含量進(jìn)行UPLC測定,能夠快速準(zhǔn)確地進(jìn)行指標(biāo)成分測定。

    研究發(fā)現(xiàn)覆盆子中鞣花酸含量在被茸毛上積累較多,并非集中在果肉果核上,且果實(shí)直徑為0.5~0.8 cm的覆盆子中鞣花酸含量高,并非市售認(rèn)定的果實(shí)越大越為精品。在浙江省不同的種植基地中,生長海拔高約為630 m、生長采收期在4月中旬采摘的覆盆子中鞣花酸含量高。因此,在覆盆子種植時應(yīng)選擇高生長海拔,采收時應(yīng)注重被茸毛的保護(hù),果實(shí)直徑控制在0.5~0.8 cm,于4月中旬盡早采摘。

    研究建立了鞣花酸含量和覆盆子果實(shí)部位、果實(shí)大小、生長海拔高度和生長采收時間之間的聯(lián)系,從而為建立系統(tǒng)性種植及采收方法并解決產(chǎn)業(yè)發(fā)展技術(shù)瓶頸奠定基礎(chǔ)。

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