不同離子濃度、溫度、pH對(duì)拉氏精子活力的影響

吳 晨，駱小年，段友健，曾永聰，繆云亮，韓 峰，羅 超

( 大連海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧 大連116023 )

1 材料與方法

1.1 親魚(yú)來(lái)源

試驗(yàn)魚(yú)取自遼陽(yáng)縣興大養(yǎng)殖場(chǎng)。2020年5月繁殖季節(jié)，挑選身體健康、發(fā)育良好的雄親魚(yú)10尾，體質(zhì)量80.0～100.0 g，體長(zhǎng)10.0～20.0 cm。

1.2 人工催產(chǎn)及精液采集

1.3 精子激活液的配制

參考高體雅羅魚(yú)(Leuciscusidus)精子活力試驗(yàn)的配制方法[13]。以NaCl、KCl、CaCl2、葡萄糖、Tris緩沖劑(C4H11NO3)作為外界因子，將不同晶體配制成不同濃度梯度的離子激活液，所有溶液現(xiàn)配現(xiàn)用，純水作為對(duì)照組，每個(gè)梯度試驗(yàn)3個(gè)平行。NaCl：25、50、75、100、125 mmol/L；KCl：5、25、75、100、150 mmol/L；CaCl2：25、35、50、75、100 mmol/L；葡萄糖：25、50、75、100 mmol/L；Tris緩沖劑：5、10、20、50、100 mmol/L。并在單因子試驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了復(fù)合因子試驗(yàn)：復(fù)合液A[V(Na+100 mmol/L)∶V(K+75 mmol/L)∶V(葡萄糖100 mmol/L)=1∶1∶1]、復(fù)合液B[V(Na+100 mmol/L)∶V(K+75 mmol/L =1∶1)]、復(fù)合液C[V(Na+100 mmol/L)∶V(葡萄糖100 mmol/L)=1∶1]和復(fù)合液D[V(K+75 mmol/L)∶V(葡萄糖100 mmol/L)=1∶1]。

參考不同pH對(duì)烏鱧(Channaargus)精子活力影響的試驗(yàn)方法[15]，采用濃度為0.1 mol/L的NaOH、KH2PO4、H3BO33種溶液配制出不同pH梯度的緩沖液。pH設(shè)置為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0。

1.4 精子活力觀察

R1=(t2-t1)/t1×100%

R2=(t4-t3)/t3×100%

式中，R1為精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間變化率(%)，R2為壽命變化率(%)，t1為對(duì)照組精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間(s)，t2為試驗(yàn)組精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間(s)，t3為對(duì)照組壽命(s)，t4為試驗(yàn)組壽命(s)。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 2010統(tǒng)計(jì)，SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，并使用Duncan法對(duì)多組樣本間進(jìn)行差異顯著性分析，以P=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié) 果

2.1 Na+對(duì)拉氏精子活力的影響

表1 拉氏精子在不同Na+濃度中的活力(n=3)Tab.1 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of Na+

2.2 K+對(duì)拉氏精子活力的影響

表2 拉氏精子在不同K+濃度下的活力(n=3)Tab.2 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of K+

2.3 Ca2+對(duì)拉氏精子活力的影響

表3 拉氏精子在不同Ca2+濃度中的活力(n=3)Tab.3 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of Ca2+

2.4 葡萄糖對(duì)拉氏精子活力的影響

表4 拉氏精子在不同葡萄糖濃度下的活力(n=3)Tab.4 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of glucose

2.5 Tris緩沖劑對(duì)拉氏精子活力的影響

表5 拉氏精子在不同Tris緩沖劑(C4H11NO3)濃度中的活力(n=3)Tab.5 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of Tris buffer

2.6 溫度對(duì)拉氏精子活力的影響

表6 拉氏精子在不同溫度下的活力(n=3)Tab.6 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii atdifferent temperature

2.7 pH對(duì)拉氏精子活力的影響

表7 拉氏精子在不同pH下的活力(n=3)Tab.7 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii atdifferent pH

2.8 幾種因子復(fù)合液對(duì)拉氏精子活力的影響

表8 拉氏精子在幾種因子復(fù)合液下的活力(n=3)Tab.8 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different types of commpound liquids

3 討 論

3.1 Na+、 K+、 Ca2+對(duì)拉氏精子活力的影響

表9 幾種淡水魚(yú)類精子活力最強(qiáng)時(shí)金屬離子濃度Tab.9 Concentration of metal ions at the maximal sperm motility in several freshwater fishes

3.2 Tris緩沖劑對(duì)拉氏精子活力的影響

3.3 葡萄糖對(duì)拉氏精子活力的影響

魚(yú)類精液中的碳水化合物主要是葡萄糖、半乳糖和果糖[31]。鯉(Cyprinuscarpio)精漿的堿性磷酸酶能使來(lái)自血糖的6-磷酸葡萄糖和6-磷酸果糖轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟呛凸?，葡萄糖、果糖在體外受精魚(yú)類的精子中經(jīng)三羧酸循環(huán)可為精子運(yùn)動(dòng)提供能量[32]。適宜濃度的葡萄糖可明顯提高白斑狗魚(yú)(Esoxlucius)[33]、高體雅羅魚(yú)[13]、蛇(Saurogobiodumerili)[34]、薩羅羅非魚(yú)(Sarotherodonmelanotheron)[35]的精子活力。相比之下，適宜葡萄糖濃度下細(xì)鱗斜頜鲴精子活力雖然較高，但對(duì)精子活力提升作用不明顯[27]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，葡萄糖在0～100 mmol/L濃度下，拉氏精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間均無(wú)顯著差異，但在壽命上適宜葡萄糖濃度對(duì)拉氏精子活力有明顯促進(jìn)作用。

3.4 溫度對(duì)拉氏精子活力的影響

3.5 pH對(duì)拉氏精子活力的影響

3.6 幾種因子復(fù)合液對(duì)拉氏精子活力的影響

4 結(jié) 論