Tris-HCl溶液替代原煙堿檢測連續(xù)流動(dòng)分析法緩沖劑效果

張文 周崇健 王躍 饒玉慧 常城

摘 要：新緩沖劑Tris-HCl溶液不與鈣、鎂離子及重金屬離子生成沉淀，對(duì)生物化學(xué)過程干擾小。而原煙堿檢測連續(xù)流動(dòng)分析法緩沖劑中的磷酸氫二鈉易與煙葉中富含的鈣、鎂、重金屬離子液締合生成沉淀。因此，使用Tris-HCl替代磷酸氫二鈉成為煙堿檢測連續(xù)流動(dòng)分析法的緩沖劑將有助于檢測精度的提升。

關(guān)鍵詞：煙堿;連續(xù)流動(dòng)分析法;緩沖劑

煙堿檢測連續(xù)流動(dòng)分析法通常均選用磷酸氫二鈉作為煙堿美拉德反應(yīng)緩沖劑的組成部分。然而，近些年的分析化學(xué)研究結(jié)果表明以磷酸氫二鈉為代表的磷酸鹽類的緩沖劑易與常見的鈣Ca2+離子、鎂Mg2+離子以及重金屬離子締合生成沉淀。在煙堿檢測過程中，煙葉樣品溶液中存在的游離態(tài)重金屬離子穿透透析膜后與磷酸氫二鈉溶液締合生成沉淀，沉淀附著在透析膜上，影響煙堿等物質(zhì)的穿透，造成檢測結(jié)果的漂移，且漂移幅度隨檢測的進(jìn)行持續(xù)增加。因此，本研究致力于驗(yàn)證使用新緩沖劑Tris-HCl替代磷酸氫二鈉的可行性。

1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)針對(duì)“煙堿含量檢測連續(xù)流動(dòng)氰化鉀法”與“煙堿含量檢測連續(xù)流動(dòng)硫氰酸鉀法”分別建立對(duì)比試驗(yàn)。即，對(duì)比一：對(duì)比測試變更緩沖劑對(duì)氰化鉀法的影響;對(duì)比二：對(duì)比測試變更緩沖劑對(duì)硫氰酸鉀法的影響。

試驗(yàn)涉及兩種煙堿檢測法共計(jì)4種處理方案。4種處理方案具體見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 原始數(shù)據(jù)

按照本次試驗(yàn)方案，針對(duì)4種處理方式，各連續(xù)檢測煙葉樣品（青州標(biāo)樣）標(biāo)準(zhǔn)溶液60次，得到4組共計(jì)240個(gè)檢測數(shù)據(jù)。

2.2 變更緩沖劑對(duì)氰化鉀法的影響

使用spss軟件“獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)”分析“處理1”與“處理2”的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，以確認(rèn)使用兩種不同緩沖劑有無顯著性差異：

曼-惠特尼檢驗(yàn)結(jié)果表明，相伴概率為0.006小于顯著性水平，可認(rèn)為拒絕零假設(shè)，使用氰化鉀法的前提下，兩種緩沖劑的處理結(jié)果存在顯著性差異。

2.3 變更緩沖劑對(duì)硫氰酸鉀法的影響

使用spss軟件“獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)”分析“處理3”與“處理4”的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，確認(rèn)使用兩種不同緩沖劑有無顯著性差異：

曼-惠特尼檢驗(yàn)結(jié)果表明，相伴概率為0.004小于顯著性水平，可認(rèn)為拒絕零假設(shè)，使用硫氰酸鉀法的前提下，兩種緩沖劑的處理結(jié)果存在顯著性差異。

2.4 使用新緩沖劑兩種檢測方法有無差異

使用spss軟件“獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)”分析“處理2”與“處理4”的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，曼-惠特尼檢驗(yàn)結(jié)果表明，U=1729.5，W=3559.5，Z的值為-.420，相伴概率為0.674大于顯著性水平（P=0.05），可認(rèn)為接受零假設(shè)，使用Tris-HCl緩沖劑的前提下，兩種檢測法的處理結(jié)果無顯著性差異。

2.5 新緩沖劑對(duì)檢測結(jié)果正確性影響分析

通過“標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)歸一化偏差En值”驗(yàn)證測試結(jié)果的“正確度”，其計(jì)算公式為：

4種處理方式的“正確度”分別為“處理1：0.3498”、“處理2：0.0721”、“處理3：0.3172”、“處理4：0.0699”。其結(jié)果表明：使用“Tris-HCl緩沖劑”的處理2與處理4，其標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)歸一化偏差En值均低于處理1與處理3，說明采用新緩沖劑后，檢測結(jié)構(gòu)的正確度要優(yōu)于原緩沖劑。即，對(duì)于煙堿檢測連續(xù)流動(dòng)分析法，使用“Tris-HCl緩沖劑”效果更優(yōu)。

3 結(jié)論

使用三羥甲基氨基甲烷（C4H11NO3）與鹽酸（HCL）混合配置的緩沖劑可用于煙堿檢測連續(xù)流動(dòng)分析法，且對(duì)反應(yīng)進(jìn)程干擾小，檢測正確性高。

參考文獻(xiàn)：

[1] YCT 160-2002.煙草及煙草制品 總植物堿的測定 連續(xù)流動(dòng)法[S].北京：國家煙草專賣局，2002.

[2] YCT 468-2013.煙草及煙草制品 總植物堿的測定 連續(xù)流動(dòng)（硫氰酸鉀）法[S].北京：國家煙草專賣局，2013.