TPPA聯(lián)合RPR在梅毒檢測(cè)中的應(yīng)用研究

(開(kāi)封市婦幼保健院，河南 開(kāi)封 475000)

梅毒多為梅毒螺旋體感染導(dǎo)致，若不及時(shí)診治，隨著疾病進(jìn)展，容易導(dǎo)致患者出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹、頭痛、反應(yīng)遲鈍等癥狀，嚴(yán)重影響患者日常生活。因而，梅毒的早期診斷顯得尤為重要。梅毒螺旋體明膠凝集(TPPA)試驗(yàn)是臨床診斷梅毒的重要方法之一，具有敏感性高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，但該方法操作繁瑣，且結(jié)果難以保存，在臨床中單獨(dú)應(yīng)用效果不理想?？焖傺獫{反應(yīng)素(RPR)試驗(yàn)亦是臨床診斷梅毒的常用方法之一，但受操作人員水平、室溫等因素的影響，該方法單用也存在一定誤診率。結(jié)合TPPA和RPR的優(yōu)缺點(diǎn)，考慮二者聯(lián)合或有更高的診斷價(jià)值，本研究對(duì)此進(jìn)行了探討。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選取2020年1月—2020年12月于本院就診的70例疑似一期梅毒患者，其中男18例，女52例；年齡20-49歲，平均(32.58±2.31)歲；體重指數(shù)17.5-26.9，平均(21.65±1.13)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①梅毒疑似病例符合《性傳播疾病臨床診療與防治指南》中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；②肝、腎功能均正常；③依從性較高，可配合完成本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并惡性腫瘤；②伴血液系統(tǒng)疾病患者；③伴神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；④伴代謝性疾病者。

1.2方法 抽取受檢者的空腹外周肘靜脈血4 mL，以3000 r/min速率離心10 min，取上層血清，置于冰凍環(huán)境下保存待檢。TPPA試驗(yàn)：在U型版上將100 μL待測(cè)液稀釋后，滴加致敏和未致敏明膠顆粒，完成后以梅毒檢測(cè)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)振蕩儀(上海旌派儀器有限公司，型號(hào)：JPTYZD-BS)振蕩U型版30 s，而后在15-25℃濕盒內(nèi)孵育24 h后觀察結(jié)果，結(jié)果判定：顆粒聚集在孔底中央、光亮、邊緣光滑即為陰性；顆粒濃集呈邊緣光滑小環(huán)狀即為可疑；顆粒凝集呈多邊形性粗糙大環(huán)狀或顆粒凝集覆蓋整個(gè)孔底，多邊形膜狀，邊緣粗糙即為陽(yáng)性。RPR試驗(yàn)：在23-29℃下，取50 μL待測(cè)液，滴入RPR試劑后，以梅毒檢測(cè)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)振蕩儀轉(zhuǎn)動(dòng)紙卡8 min后，在光線充足的情況下進(jìn)行觀察，結(jié)果判定：若測(cè)試液中出現(xiàn)中等及大的凝塊，且溶液清亮，即判定為陽(yáng)性；可見(jiàn)小的顆粒聚集物即為弱陽(yáng)性；可見(jiàn)細(xì)小粗糙物，且分布不規(guī)則即為可疑反應(yīng)；抗原顆粒均勻分布，且無(wú)塊狀物即為陰性。所有患者均進(jìn)行熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)：先將經(jīng)56℃水浴滅活的待測(cè)液稀釋后，用0.03 mL異硫氰酸熒光素標(biāo)記免疫球蛋白G型梅毒螺旋體抗體，而后在熒光顯微鏡下，先以鎢燈為光源，在暗視野下尋找Nichols螺旋體；然后改用高壓汞燈，經(jīng)濾光片選取紫外光段即可觀看熒光結(jié)果，并以此結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，需注意的是讀片應(yīng)在4 h內(nèi)完成。上述試劑盒均來(lái)自北京現(xiàn)代高達(dá)生物技術(shù)有限責(zé)任公司，相關(guān)操作均嚴(yán)格依照說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1各試驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果情況 經(jīng)熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)檢查顯示，70例疑似梅毒患者中確診為梅毒的54例(77.14%)，非梅毒患者16例(22.86%)。其他見(jiàn)表1。

表1 各試驗(yàn)結(jié)果分析

2.2各試驗(yàn)結(jié)果價(jià)值分析 TPPA與RPR診斷梅毒的靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度接近；TPPA聯(lián)合RPR診斷梅毒的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度最高。見(jiàn)表2。經(jīng)Kappa檢驗(yàn)顯示，TPPA、RPR及二者聯(lián)合試驗(yàn)診斷梅毒的Kappa值分別為0.643、0.658、0.919，一致性均較好。

表2 TPPA、RPR及二者聯(lián)合試驗(yàn)診斷的價(jià)值分析(%)

3 討論

血清學(xué)試驗(yàn)是目前臨床診斷梅毒較為常用的方法，主要包括TPPA、RPR、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等，其中熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)是目前臨床診斷梅毒最敏感的方法，常被作為檢測(cè)“金標(biāo)準(zhǔn)”。但由于該方法操作繁瑣，對(duì)工作人員的技術(shù)要求較高，應(yīng)用受限[1]。因此，探求操作簡(jiǎn)單、可準(zhǔn)確診斷梅毒的檢測(cè)方案至關(guān)重要。

人類對(duì)梅毒尚無(wú)先天免疫性，而免疫球蛋白M和免疫球蛋白G型梅毒螺旋體抗體是在感染梅毒患者中常見(jiàn)的抗體，其中免疫球蛋白M型抗體是最早產(chǎn)生的，在患者感染梅毒時(shí)呈陽(yáng)性，好轉(zhuǎn)時(shí)呈陰性[2]。而疫球蛋白G型梅毒螺旋體抗體雖產(chǎn)生時(shí)間相對(duì)較晚，但存在時(shí)間較長(zhǎng)，因而臨床可通過(guò)檢測(cè)免疫球蛋白M和免疫球蛋白G型梅毒螺旋體抗體在機(jī)體中的表達(dá)判斷患者是否感染梅毒[3-4]。TPPA是利用明膠顆粒與梅毒螺旋體抗體結(jié)合后會(huì)發(fā)生特異性反應(yīng)出現(xiàn)顆粒凝集的原理診斷梅毒。因而，臨床通過(guò)觀察明膠顆粒的凝結(jié)狀態(tài)即可判斷患者的陰陽(yáng)性，結(jié)果較為準(zhǔn)確，且由于其可同時(shí)檢測(cè)出免疫球蛋白M和免疫球蛋白G型梅毒螺旋體抗體，在診斷梅毒方面具有較高的敏感性和特異性[5]。但由于免疫球蛋白G型抗體在梅毒螺旋抗體消失后很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)仍可通過(guò)記憶細(xì)胞作用繼續(xù)產(chǎn)生，使得TPPA診斷有梅毒病史患者誤診率較高[6]。而RPR作為一種利用心磷脂、膽固醇和純化的卵磷脂類脂質(zhì)作抗原，測(cè)定血清中反應(yīng)素，在診斷梅毒方面也有一定價(jià)值[7-8]。但由于反應(yīng)素出現(xiàn)的時(shí)間較晚，加之當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)水痘、肺炎、呼吸道感染時(shí)反應(yīng)素的水平也會(huì)隨之變化，特異性較差[9]。結(jié)合TPPA和RPR的優(yōu)點(diǎn)，或可將TPPA、RPR聯(lián)合檢測(cè)用于梅毒診斷中。而本研究依據(jù)熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)檢查，結(jié)果顯示TPPA與RPR診斷梅毒的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度差異不大；TPPA聯(lián)合RPR診斷梅毒的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度高于二者，且經(jīng)Kappa檢驗(yàn)顯示一致性均較好。說(shuō)明TPPA聯(lián)合RPR試驗(yàn)診斷的梅毒價(jià)值更高。分析原因在于：RPR試驗(yàn)的特異性雖差，但有較高的敏感性，可鑒別患者是否產(chǎn)生梅毒抗原，在TPPA檢查前先行RPR試驗(yàn)，可將有梅毒史健康患者排除，在一定程度提升了TPPA的確診率[10]。

綜上所述，在梅毒檢測(cè)中聯(lián)用TPPA和RPR的價(jià)值較高。