血清ANA及AMA在自身免疫性肝病患者中的表達(dá)

(鄭州市第一人民醫(yī)院檢驗科，河南 鄭州 450000)

自身免疫性肝病(ALD)主要包括自身免疫性肝炎(AIH)、原發(fā)性膽汁性膽管炎(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)三種類型，不同類型患者的治療方法存在一定差異。AIH以潑尼龍、硫唑嘌呤等糖皮質(zhì)激素藥物治療為主；PBC治療重點為保護(hù)膽管細(xì)胞及肝細(xì)胞，其中熊去氧膽酸為首選藥物；而PSC治療重點在于控制并發(fā)癥及監(jiān)測肝損傷，多用抗生素、熊去氧膽酸、膽汁酸螯合劑等聯(lián)合治療[1]。因此，明確ALD患者類型十分必要?？购丝贵w(ANA)是一組對細(xì)胞核內(nèi)脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、蛋白或這些物質(zhì)的分子復(fù)合物產(chǎn)生的自身抗體，可特征性出現(xiàn)于許多自身免疫性疾病中[2]?？咕€粒體抗體(AMA)是一種無器官特異性及種屬特異性的自身抗體，常用于黃疸及肝病病因的輔助診斷[3]。而ALD是機(jī)體自身免疫異常所引起的一組肝膽損傷性疾病，因此，推測血清ANA、AMA可能對ALD患者類型具有一定診斷價值，本研究對此進(jìn)行了相關(guān)分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集2019年8月—2021年2月本院收治的76例ALD患者臨床資料及31例健康人群體檢資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：ALD診斷符合參考文獻(xiàn)[4]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)肝生化、影像學(xué)、肝穿刺活檢確診；資料完整；ALD患者均為單一疾病分型。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴艾滋病病毒及丙型、戊型肝炎病毒等感染者；合并系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等其他自身免疫性疾病者；有服用肝毒性藥物史者；非酒精性脂肪肝病史者；反復(fù)住院的重復(fù)病例。ALD患者：男23例，女53例；類型：AIH 30例，PBC 22例，PSC 24例；年齡30-58歲，平均(44.13±8.15)歲。健康人群：男11例，女20例；年齡31-57歲，平均(44.27±9.30)歲。

1.2方法 采集納入研究者清晨空腹外周肘靜脈血5 mL，以3500 r/min速率離心10 min，離心半徑10 cm，取血清，采用間接免疫熒光法測定血清ANA、AMA表達(dá)情況。將人喉癌上皮細(xì)胞系(HEp-2)細(xì)胞、猴心肌與肝臟組織及大鼠胃、肝、腎組織的冰凍切片作為抗原，以生物薄片技術(shù)將帶有細(xì)胞與組織的切片組成一個反應(yīng)區(qū)，將每個患者血清平均分為3份，分別以1∶100、1∶320、1∶1000的比例稀釋后與各種組織細(xì)胞薄片中的細(xì)胞反應(yīng)，以室溫孵育30 min，特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，用磷酸鹽緩沖鹽水沖洗3次，浸泡5 min后加入異硫氰酸熒光素標(biāo)記的羊抗人IgG抗體，室溫孵育30 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3次，浸泡5 min后排除多余液體，甘油封片后使用熒光顯微鏡觀察組織、細(xì)胞中是否出現(xiàn)特異性熒光。將組織、細(xì)胞中出現(xiàn)特異性熒光且血清稀釋度≥1∶100判定為檢測結(jié)果為血清ANA、AMA表達(dá)呈陽性。

1.3數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 25.0軟件處理數(shù)據(jù)。繪制受試者工作特征曲線(ROC)并計算曲線下面積(AUC)值，以檢驗血清ANA、AMA陽性表達(dá)對ALD患者不同類型的診斷價值；檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1不同類型ALD患者血清ANA、AMA陽性表達(dá)情況 ALD患者血清ANA、AMA陽性表達(dá)率均高于健康人群，其中AIH患者血清ANA陽性表達(dá)率最高，PBC患者血清AMA陽性表達(dá)率最高。見表1。

表1 不同類型ALD患者血清ANA及AMA陽性表達(dá)情況[n(%)]

2.2血清ANA、AMA陽性表達(dá)對ALD患者不同分型的診斷價值 分別將納入人群AIH、PBC、PSC患病情況作為狀態(tài)變量，將患者血清ANA、AMA陽性表達(dá)情況作為檢驗變量，繪制ROC曲線，結(jié)果顯示，血清ANA、AMA陽性表達(dá)診斷AIH的AUC分別為0.917、0.534，血清ANA陽性表達(dá)對AIH具有一定診斷價值，血清AMA陽性表達(dá)對AIH無診斷價值；血清ANA、AMA陽性表達(dá)診斷PBC的AUC分別為0.643、0.916，血清AMA陽性表達(dá)對PBC具有一定診斷價值，血清ANA陽性表達(dá)對PBC無診斷價值；血清ANA、AMA陽性表達(dá)診斷PSC的AUC分別為0.546、0.526，二者對PSC均無診斷價值。見表2。

表2 血清ANA、AMA陽性表達(dá)對ALD患者不同類型的診斷價值

3 討論

ALD可引發(fā)乏力、嗜睡、黃疸、皮膚瘙癢等癥狀，若未及時治療，疾病可進(jìn)展至肝硬化、肝衰竭，部分患者甚至可進(jìn)展為惡性腫瘤[5]。但ALD類型較多，不同類型的發(fā)病原因不同，治療方法也存在一定差異。因此，臨床需對ALD患者類型進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，以便制定科學(xué)、有效的治療方案。

ALD患者可出現(xiàn)正常免疫耐受機(jī)制的破壞，體內(nèi)可出現(xiàn)多種自身抗體陽性[6]。ANA、AMA均為自身抗體的一種，正常情況下呈陰性，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、原發(fā)性、膽汁性肝硬化等自身免疫性疾病中呈不同程度的陽性表達(dá)。因此，推測血清ANA、AMA可用于診斷ALD患者的疾病類型。本研究結(jié)果顯示，ALD患者血清ANA、AMA陽性表達(dá)率均高于健康人群，其中AIH患者血清ANA陽性表達(dá)率最高，PBC患者血清AMA陽性表達(dá)率最高，PSC患者血清ANA、AMA陽性表達(dá)率均較低。提示血清ANA、AMA陽性表達(dá)對ALD類型具有一定診斷價值。分析原因在于：血清ANA是自身免疫性疾病的重要血清學(xué)指標(biāo)，其陽性表達(dá)可能會與細(xì)胞膜上的蛋白相結(jié)合，啟動細(xì)胞毒性作用，破壞肝細(xì)胞，導(dǎo)致肝臟炎癥性壞死，破壞肝小葉的正常結(jié)構(gòu)，降低肝臟代謝功能，并能促進(jìn)纖維母細(xì)胞增生及合成膠原纖維，導(dǎo)致肝纖維化，從而誘發(fā)AIH[7]。因此，當(dāng)血清ANA陽性表達(dá)率較高時，提示AIH發(fā)生風(fēng)險較高。血清AMA陽性表達(dá)可特異性攻擊肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的線粒體抗原，促進(jìn)膽管上皮細(xì)胞凋亡，而膽管上皮細(xì)胞是固有免疫系統(tǒng)中抵御膽管內(nèi)病原體刺激的第一道防線，當(dāng)其受損時可能會引發(fā)肝臟膽汁代謝障礙，誘發(fā)膽管炎癥；且膽管上皮細(xì)胞凋亡還會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)自身抗原釋放，激活機(jī)體固有免疫系統(tǒng)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌相應(yīng)的細(xì)胞因子進(jìn)一步損傷肝內(nèi)膽管細(xì)胞，從而形成惡性循環(huán)，誘發(fā)PBC[8-9]。因此，當(dāng)血清AMA陽性表達(dá)率較高時，提示PBC發(fā)生風(fēng)險較高。為驗證假說，進(jìn)一步繪制ROC曲線，結(jié)果顯示，血清ANA陽性表達(dá)對AIH具有一定診斷價值，血清AMA陽性表達(dá)對PBC具有一定診斷價值。

綜上所述，血清ANA、AMA在ALD患者中的陽性表達(dá)率較高，其中血清ANA陽性表達(dá)對AIH具有一定診斷價值，血清AMA陽性表達(dá)對PBC具有一定診斷價值，建議臨床可通過檢測ALD患者血清ANA、AMA陽性表達(dá)情況對疾病類型進(jìn)行鑒別診斷。