基于網(wǎng)絡藥理學的益母草治療產(chǎn)后腹痛的潛在分子機制研究

楊 勇，張樂樂，盛菲亞，李 維，陳加容，鄒 亮，楊 林

1成都大學藥學院；2成都大學基礎醫(yī)學院，成都 610106； 3成都大學附屬醫(yī)院藥劑科，成都 610081；4成都大學食品與生物工程學院，成都 610106

產(chǎn)后腹痛，也稱為“宮縮痛”“產(chǎn)后痛”，是指孕婦分娩后1～3日內(nèi)，由于子宮的收縮恢復作用，產(chǎn)婦的腹部會產(chǎn)生類似于經(jīng)期的陣痛[1]。臨床上，西醫(yī)對產(chǎn)后腹痛較嚴重的患者多采用阿片類鎮(zhèn)痛藥物進行干預，如舒芬太尼，然而此類鎮(zhèn)痛藥物多會引起一定程度的不良反應，如興奮嘔吐中樞而造成惡心嘔吐，或使迷走神經(jīng)興奮而導致消化功能失調(diào)[2]。中醫(yī)理論認為，產(chǎn)后腹痛多為氣血運行不暢所致，包括血虛和血瘀兩種證型[3]，中醫(yī)臨床上治療產(chǎn)后腹痛多采用溫經(jīng)祛癖法祛瘀止痛，同時采用補益氣血法補氣活血。

益母草為唇形科植物益母草LeonurusjaponicasHoutt.的新鮮或干燥地上部分，具有活血調(diào)經(jīng)、利水消腫等功效，臨床上常用于血滯經(jīng)閉、痛經(jīng)、水腫等病癥[4]，素有“婦科圣藥”的稱號?！侗静菝审堋分杏涊d其“能總調(diào)胎產(chǎn)諸證，故加益母之名，具有去死胎，安生胎，行瘀血，生新血”的功效?，F(xiàn)代藥理學研究表明[5]，益母草提取物具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化、抑菌等作用。此外，益母草提取物對子宮組織具有雙向調(diào)節(jié)作用，益母草0.5%鹽酸水溶液提取生物堿對小鼠離體子宮具有興奮作用，而益母草氯仿提取生物堿對離體子宮具有抑制作用[6]。益母草注射液中的水蘇堿對子宮的興奮作用，也可能與動物的種屬有關[7]。此外，益母草對產(chǎn)后子宮內(nèi)膜具有止血修復作用，有利于產(chǎn)后子宮恢復[8]。

中藥具有多成分、多靶點、多途徑作用等特點，在整體上對疾病發(fā)揮著治療作用，但其物質(zhì)基礎和作用機制研究薄弱，影響了中藥發(fā)展的現(xiàn)代化進程。網(wǎng)絡藥理學能整體地、系統(tǒng)地研究藥物與疾病之間的作用關系，能對藥效物質(zhì)、作用靶點和通路進行初步的預測，是中藥研究新的方法和手段[9]。本文利用網(wǎng)絡藥理學研究方法，通過有效數(shù)據(jù)的挖掘，預測益母草治療產(chǎn)后腹痛潛在作用靶點及作用機制，并進一步基于藥物流產(chǎn)大鼠模型驗證益母草治療產(chǎn)后腹痛的作用機理，為益母草的臨床應用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料

1.1 數(shù)據(jù)庫

中草藥系統(tǒng)藥理學平臺(TCMSP)數(shù)據(jù)庫(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)；PubChem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)藥物分子靶點預測平臺Swiss Target Prediction(http://www.swisstargetprediction.ch)、Similarity ensemble approach(http://sea.bkslab.org/)；疾病靶點標準化數(shù)據(jù)庫Uniport(https://www.uniprot.org)；疾病數(shù)據(jù)庫GeneCards(https://www.genecards.org/)、OMIM(https://omim.org/)；功能蛋白聯(lián)系網(wǎng)絡數(shù)據(jù)庫STRING(http://string-db.org/cgi/input.pl)；GO富集分析、KEGG富集分析數(shù)據(jù)庫Bioconductor(http://www.bioconductor.org/)、DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)、Cytoscape3.7.2(https://cytoscape.org/)；Rx644.0.0；Win10操作系統(tǒng)。

1.2 實驗動物

SD大鼠，雌性，8～9周齡，體重200～220 g；雄性，8～9周齡，體重250～300 g，購自成都達碩實驗動物有限公司，許可證號scxk(川)2015—030。

1.3 藥物與試劑

益母草膏(批號20190308)，主要成分為益母草，貴州百靈企業(yè)集團制藥股份有限公司。一抗：PGF2αR(批號00563431)、MMP9(批號02376588)、TIMP1(批號02376588)、VEGFA(批號20334270)、VEGFR2(00233460)，艾博抗(上海)貿(mào)易有限公司。二抗：Polink-2plus?Polymer HRP Detection(批號20200411、20200528)，北京博奧森生物技術有限公司。

1.4 儀器

Finesse E+型轉(zhuǎn)輪式切片機、Section Bath型攤片機、SHANDON Exce型包埋機(賽默飛世爾科技中國有限公司)；DM 3000型顯微鏡(Leica公司)；HH500-B1型烘箱(上海博尼化輕裝備有限公司)；HCY-260型4℃孵育箱(海爾股份有限公司)。

2 方法

2.1 網(wǎng)絡藥理學分析

2.1.1 挖掘益母草活性成分及其可能作用的靶點

以“yimucao”為關鍵詞，在TCMSP數(shù)據(jù)庫挖掘益母草中成分，再依據(jù)藥物代謝動力學(ADME-吸收、分布、代謝、排泄)原理，以生物利用度(oral bioavailability，OB)和類藥性(drug-like，DL)為主要參照依據(jù)，設置OB≥30%，DL≥0.18篩選活性成分。此外，結合《中國藥典》和相關文獻，將不滿足上述篩選條件，但具有明顯藥理活性的化合物也納入研究。在TCMSP平臺，篩選出活性成分的相關靶點，最后利用Uniprot數(shù)據(jù)庫記錄Human的相關基因，轉(zhuǎn)換活性成分靶點為對應的Gene symbol；在Pubchem數(shù)據(jù)庫上找出化合物的Canonical SMILES，在Swiss Target Prediction和Similarity ensemble approach平臺上對化合物可能作用的靶點進行預測，并綜合TCMSP上靶點檢索結果，用作下一步分析。

2.1.2 挖掘疾病基因，與益母草活性成分的靶基因作交集處理，并繪制Venn圖

GeneCards疾病數(shù)據(jù)庫擁有廣泛的數(shù)據(jù)來源，整合了Drug bank等多家數(shù)據(jù)庫資源及文獻、實驗數(shù)據(jù)，是目前少數(shù)綜合性疾病數(shù)據(jù)庫之一。OMIM數(shù)據(jù)庫是人類基因和遺傳表型的全面、權威的綱要，每天更新，且可免費獲取。在GeneCards和OMIM數(shù)據(jù)庫上，以“postpartum abdominal pain”為關鍵詞，檢索疾病相關的基因。并將得到的疾病基因與活性成分的靶基因錄入，利用R軟件，繪制Venn圖，得到活性成分與疾病的交集靶點。

2.1.3 構建“藥物-活性成分-疾病-靶點”網(wǎng)絡

利用Cytoscape 3.7.2軟件構建可視化“藥物-活性成分-靶點基因-疾病”網(wǎng)絡，每個節(jié)點分別代表“藥物、活性成分、疾病、交集靶點”，直觀展示各節(jié)點之間的聯(lián)系。

2.1.4 構建蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(PPI網(wǎng)絡)

STRING是已知和預測的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的數(shù)據(jù)庫。將藥物與疾病的交集靶點輸入STRING平臺，定義物種為人，構建益母草抗產(chǎn)后腹痛的蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(PPI網(wǎng)絡)。最低互作評分(minimum required interaction score)設定為0.9。網(wǎng)絡中各節(jié)點度值代表該蛋白在相互作用中的地位，并用柱狀圖直觀表示前30名蛋白及節(jié)點連接數(shù)量，連接數(shù)量的大小可直接代表節(jié)點在網(wǎng)絡中的地位。

2.1.5 利用Cytoscape對PPI網(wǎng)絡進行拓撲分析

將STRING平臺篩選出來的相互作用的蛋白基因輸入Cytoscape軟件BisoGenet插件中，篩選條件為Identifiers下選擇“Homo sapiens(Human)”“Gene identifiers only”，Data Settings下只選擇“Protein Protein Interaction”，點擊“Tools-NetworkAnalyzer-Network Analysis-Analyze Network”，得到第一張拓撲分析圖，數(shù)據(jù)以.csv格式導出，在excel表格中打開，計算“degree”值的2倍中位數(shù)，以此為篩選條件，得到第二張拓撲分析圖，然后打開Cytoscape軟件中CytoNCA插件，Centralities下除“degree(DC)”項不選擇以外，其余幾項均選擇“without weight”，將得到的數(shù)據(jù)以.csv格式導出，在excel表格中計算“degree”“betweenness”“clossness”三項的中位數(shù)，以此為篩選條件，得到第三張拓撲分析圖。

2.1.6 GO富集分析

使用R軟件和Bioconductor加載包，對上述拓撲分析得到的核心靶點進行GO富集分析中的生物過程(biological process，BP)分析，細胞組成(cellular component，CC)分析，分子功能(molecular function，MF)分析，并繪制相應的可視化圖片。

2.1.7 KEGG富集分析

將上述拓撲分析得到的核心靶點導入DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫中，點擊“Functional Annotation”選擇“OFFICE_GENE_SYMBOL”“gene list”，種屬選為“Homo sapiens”，之后選取“pathways”下的“KEGG_PATHWAY”進行KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析。點擊“chart”，將數(shù)據(jù)復制到excel表格中，以由小到大且P≤0.01為篩選條件，選取符合條件的前20的KEGG通路，使用R軟件對其進行可視化處理。

2.2 實驗驗證

2.2.1 模型建立分組及給藥

雌性SD大鼠隨機分為對照組、模型組、益母草膏組，除對照組大鼠以外，其余各組大鼠按文獻方法復制藥物流產(chǎn)大鼠模型[10]，每組6只，造模第二天益母草膏組大鼠灌胃給予益母草膏(3.6 g/kg，相當于臨床劑量的2倍)，對照組、模型組大鼠給予等量生理鹽水，連續(xù)7天，末次給藥后，禁食不禁水12 h，取大鼠子宮，置于4%多聚甲醛溶液中固定。

2.2.2 免疫組化法測PGF2αR、MMP9、TIMP1、VEGFA、VEGFR2蛋白表達

取約為3 mm大小的中段子宮組織，脫水和透明化處理，用石蠟包埋，做成蠟塊，用 Thermo切片機將組織切成4 mm厚的薄片，在溫水中將組織展平后撈在載玻片上，60 ℃烘烤切片2 h；對切片進行免疫組化染色、鏡檢。切片在高倍鏡視野下(200倍)，應用image pro plus 6.0圖像分析系統(tǒng)進行定量平均光密度分析，棕黃色部位為抗原陽性表達部位。

2.2.3 數(shù)據(jù)分析

3 結果

3.1 活性成分篩選

通過TCMSP平臺數(shù)據(jù)挖掘，以OB≥30%，與DL≥0.18為篩選條件，共得到8個成分。根據(jù)2020版《中國藥典》益母草項下含量測定要求，益母草堿和水蘇堿為益母草中主要成分。有文獻報道，益母草堿通過降低全血黏度、改善大鼠的血瘀狀態(tài)，通過縮短子宮出血時間、加強子宮收縮和復舊作用[11]；水蘇堿能減少米非司酮誘導的流產(chǎn)后子宮出血作用[12]。因此益母草堿和水蘇堿也納入下一步考察范圍。最后得到益母草中活性成分共10種，包括花生四烯酸、甘草素、山奈酚、槲皮素、益母草堿等，詳見表1。

表1 益母草活性成分Table 1 Active components of Yimucao

3.2 化合物靶點和疾病靶點的獲取

在PubChem數(shù)據(jù)庫中檢索益母草活性成分Canonical SMILES結構式，輸入Swiss Target Prediction和Similarity ensemble approach平臺，并結合TCMSP數(shù)據(jù)庫中靶點檢索結果，共檢索出601個靶點；接著以“postpartum abdominal pain”為關鍵詞，在OMIM和GeneCards平臺上共檢索出800個產(chǎn)后腹痛相關靶點。利用R軟件，對化合物靶點和疾病靶點繪制Veen圖，得到了144個化合物與疾病交集靶點(見圖1)。

圖1 化合物靶點和疾病靶點Veen圖Fig.1 Veen diagram of component targets and disease targets

3.3 “藥物-活性成分-靶點基因-疾病”網(wǎng)絡繪制

使用Cytoscape 3.7.2軟件繪制“藥物-活性成分-靶點-疾病”調(diào)控網(wǎng)絡，共156個節(jié)點，457條邊。如圖2所示，外圈紅色部分表示144個疾病與活性成分的交集靶點，內(nèi)圈紫色方塊表示的是10個活性成分，黃色圓圈表示的是藥物益母草，淡藍色菱形表示疾病“產(chǎn)后腹痛”。

圖2 “藥物-活性成分-靶點-疾病”調(diào)控網(wǎng)絡Fig.2 “Drug-active components-targets-disease”regulatory network

3.4 關鍵靶點蛋白互作網(wǎng)絡

將前面得到的144個交集靶點輸入STRING數(shù)據(jù)庫，將最低互作評分(minimum required interaction score)設定為0.9，得到一個118個節(jié)點、375條連線的PPI圖。如圖3A所示，利用R軟件對導出的數(shù)據(jù)繪圖，繪制連接數(shù)目處于前30名的柱狀圖。如圖3B所示，其中度值最高的是PIK3R1蛋白，是PI3K-Akt通路調(diào)控網(wǎng)絡中的重要靶點。MMP9、VEGFA等皆處于較靠前的位置，可能是益母草治療產(chǎn)后腹痛的重要作用靶點。

圖3 PPI網(wǎng)絡分析Fig.3 The PPI network analysis注：A：PPI網(wǎng)絡；B：PPI網(wǎng)絡核心節(jié)點。Note:A:The PPI network;B:PPI network core nodes.

3.5 PPI網(wǎng)絡拓撲分析

為進一步研究益母草治療產(chǎn)后腹痛的潛在作用機制，將上述PPI網(wǎng)絡篩選出來的靶點錄入Cytoscape軟件的BisoGenet插件中進行網(wǎng)絡分析，得到第一張有4 163個節(jié)點、100 338條邊的拓撲分析圖。然后以第一張拓撲分析圖中2倍“degree”中位數(shù)值為篩選條件，得到第二張有1 061個節(jié)點、45 805條邊的拓撲分析圖。最后打開Cytoscape軟件中CytoNCA插件，計算“degree”“betweenness”“closeness”三項的中位數(shù)值，并以此為篩選條件，得到第三張包含98個節(jié)點、2 060條邊的拓撲分析圖。分析過程如圖4所示。

圖4 PPI網(wǎng)絡拓撲分析Fig.4 PPI network topology analysis

3.6 GO富集分析

使用R軟件和Bioconductor加載包，對上述拓撲分析得到的98個核心靶點以P≤0.05為篩選條件進行GO富集分析，對前20項進行可視化。如圖5所示，GO生物過程(BP)部分共得到1 151個條目，主要包括固有凋亡信號通路、DNA代謝過程的調(diào)控、細胞內(nèi)受體信號通路、DNA代謝過程的正向調(diào)控、對不正確的蛋白質(zhì)的反應等過程；GO細胞組成(CC)分析共確定97個條目，主要表現(xiàn)在核染色、粘著斑、細胞基質(zhì)連接部位、蛋白質(zhì)-DNA復合物、泛素連接酶復合物等位置；GO分子功能(MF)分析根據(jù)確定122個條目，主要包括與泛素蛋白、泛素樣蛋白、類固醇激素受體、核受體、核激素受體結合等方面。

圖5 GO富集分析氣泡圖Fig.5 The GO enrichment analysis bubble diagram注：A：生物過程(BP)分析；B：細胞組成(CC)分析；C：分子功能(MF)分析。Note:A:biological process (BP)analysis;B:cell composition (CC)analysis;C:molecular function (MF)analysis.

3.7 KEGG富集分析

將上述拓撲分析得到的98個核心靶點導入DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫中，以P≤0.01為篩選條件，得到41條相關通路，按照P值由小到大的順序，選取前20的KEGG通路，使用R軟件對其進行可視化處理。如圖6所示，除了與癌癥相關的通路外，雌激素信號通路、PI3K-Akt信號通路、MAPK信號通路、HIF-1信號通路可能是益母草治療產(chǎn)后腹痛的主要作用途徑。

圖6 KEGG富集分析氣泡圖Fig.6 KEGG enrichment analysis bubble diagram

3.8 實驗驗證

結合PPI網(wǎng)絡核心節(jié)點分析結果和KEGG信號通路富集結果，我們選擇MMP9、TIMP1、VEGFA、VEGFR2蛋白表達水平進行驗證。此外，PGF2α能引起子宮平滑肌過度收縮，血管痙攣，造成子宮缺血、缺氧狀態(tài)而造成腹痛，因此也對PGF2αR蛋白表達水平進行驗證。如圖7所示，與對照組(control，Con)相比，模型組(model，Mod)大鼠子宮中PGF2αR、MMP9蛋白表達水平顯著升高；TIMP1、VEGFA、VEGFR2蛋白表達水平顯著降低。而經(jīng)益母草治療干預后，益母草組(Yimuao，YMC)大鼠子宮組織中PGF2αR、MMP9蛋白表達水平相較于模型組顯著降低；同時TIMP1、VEGFR2蛋白表達水平相較于模型組顯著升高。

圖7 益母草對流產(chǎn)模型大鼠子宮蛋白表達的影響Fig.7 Effect of Yimucao on uterine protein expression in rats with abortion model注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。Note:Compared with control group,*P<0.05,**P<0.01;Compared with model group,#P<0.05,##P<0.01.

4 討論與結論

網(wǎng)絡藥理學能整體且系統(tǒng)地研究藥物與疾病的相互作用關系，能反應中藥多成分、多靶點、多途徑相互作用的特點，是研究藥物治療疾病作用機制的一種新方法和工具。益母草是一種常用的中藥材，具有活血化瘀、祛瘀生新的功效;研究表明，益母草提取物能啟動產(chǎn)后子宮內(nèi)膜止血修復機制，緩解子宮痙攣。產(chǎn)后腹痛是由于產(chǎn)后子宮縮復作用引起的，中醫(yī)認為，產(chǎn)后腹痛是由于產(chǎn)后氣血運行不暢、瘀滯不通，或產(chǎn)后失血過多造成氣血兩虛所致[1]。本文采用網(wǎng)絡藥理學研究方法，對益母草治療產(chǎn)后腹痛的作用靶點及作用機制進行探討，得到益母草10個活性成分及其144個作用于產(chǎn)后腹痛靶點，免疫組化結果顯示益母草可顯著抑制模型大鼠子宮組織中PGF2αR、MMP9蛋白上調(diào)和TIMP1、VEGFR2蛋白下調(diào)，結合GO和KEGG富集結果，提示對雌激素、PI3K-Akt、MAPK、HIF-1信號通路的調(diào)控作用可能是益母草治療產(chǎn)后腹痛的主要作用機理。網(wǎng)絡分析結果顯示，益母草治療產(chǎn)后腹痛可能的主要活性成分為槲皮素、山奈酚、花生四烯酸等。研究表明，槲皮素作可為雌激素受體調(diào)節(jié)劑，與雌激素受體(ER)結合，調(diào)控ER下游許多底物及信號通路[13]，參與調(diào)控子宮收縮，表現(xiàn)出對產(chǎn)后腹痛有調(diào)節(jié)作用。山奈酚是黃酮類化合物，具有多種生物活性，有研究表明[14]，山奈酚能顯著降低兔子動脈血中細胞間黏附分子-1(ICAM-1)、血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)、整合蛋白、單核細胞趨化因子-1(MCP-1)等黏附分子的基因和蛋白水平，說明山奈酚能夠改善血管的瘀滯狀況。花生四烯酸既是炎癥反應的前體物質(zhì)，也直接參與調(diào)節(jié)機體細胞內(nèi)多種酶的活性和離子通道。作用于Ca2+通道，能直接調(diào)控Ca2+在細胞內(nèi)的進出，進而影響組織的收縮與松弛，而子宮的縮復也依賴于子宮組織平滑肌細胞對Ca2+的調(diào)控，因此，山奈酚也對產(chǎn)后腹痛有調(diào)節(jié)作用。

蛋白互作網(wǎng)絡顯示，益母草中活性成分可能是通過PIK3R1、CXCL8、IL6、JUN、VEGFA、NFKB1、IL1B、MMP9等藥物與疾病共有靶點起作用。PIK3R1中文名為“磷脂酰肌醇3激酶”，其在胰島素的代謝作用中起著重要作用，該基因的突變與胰島素抵抗有關[15]。CXCL8即IL-8，是趨化因子中的一員，近年研究發(fā)現(xiàn)，其參與了哺乳動物整個生殖過程，也與某些生殖病理過程有關[16]。VEGFA即血管內(nèi)皮生長因子A，可特異性地作用于內(nèi)皮細胞，并具有多種作用，如增加血管通透性、誘導血管生成、誘導內(nèi)皮細胞生長、促進細胞遷移等[17]。此外，PPI網(wǎng)絡拓撲分析結果顯示，多種凋亡抑制因子、細胞增殖因子等也參與了該過程，如CUL7、AKT1、TP53等。而產(chǎn)后腹痛的一大原因是產(chǎn)后子宮內(nèi)膜損傷，造成大出血或惡露不絕，因此，止血損傷修復機制的啟動對治療產(chǎn)后腹痛尤為重要。

GO注釋結果提示，拓撲后的核心靶點主要參與固有凋亡信號通路、DNA代謝過程的調(diào)控、細胞內(nèi)受體信號通路、DNA代謝過程的正向調(diào)控、對不正確的蛋白質(zhì)的反應、DNA生物合成等生物學過程；定位在細胞核染色、粘著斑、細胞基質(zhì)連接部位、蛋白質(zhì)-DNA復合物、泛素連接酶復合物等位置；并與泛素蛋白、泛素樣蛋白、類固醇激素受體、核受體、核激素受體等結合。KEGG富集分析結果顯示，有41條通路可能參與了益母草度產(chǎn)后腹痛的調(diào)節(jié)，在靠前的20條通路中，除了與癌癥有關的通路以外，雌激素信號通路、PI3K-Akt信號通路、MAPK信號通路、HIF-1信號通路等涉及其中。PI3K-Akt信號通路在調(diào)控各種不同細胞功能，如代謝、生長、增殖、存活、轉(zhuǎn)錄以及蛋白質(zhì)合成方面發(fā)揮重要作用[18]。MAPK存在多種亞族，其中ERK廣泛存在于多種組織中，高度參與細胞的增殖分化調(diào)控[19]。產(chǎn)后子宮是一個缺氧環(huán)境，能激活HIF-1信號通路，調(diào)控葡萄糖代謝、細胞增殖和血管形成[20]。

MMP9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的一員，參與調(diào)節(jié)雌激素信號通路，在血管生成、細胞遷移和傷口愈合等生理過程發(fā)揮作用，在產(chǎn)后子宮復舊的過程中，能促進子宮血管生成和生長。TIMP1是基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子家族的一員，是HIF-1信號通路下游效應分子，能和MMP9形成復合物而抑制MMP9的活性，在產(chǎn)后子宮生理病理過程中起重要作用[21]。VEGFA、VEGFR2是血管內(nèi)皮生長因子的一員，參與子宮內(nèi)膜血管重塑過程，在產(chǎn)后子宮復舊過程中起重要作用[22]。

產(chǎn)后腹痛的主要原因是產(chǎn)后子宮血瘀、強直收縮所致。子宮收縮時，引起血管缺血，組織缺氧，神經(jīng)纖維受壓等而產(chǎn)生類似于痛經(jīng)的疼痛。PGF2α過高能引起子宮平滑肌過度收縮，血管痙攣，造成子宮缺血、缺氧狀態(tài)而造成腹痛[23]。產(chǎn)后子宮組織處于一個損傷修復狀態(tài)，血瘀的產(chǎn)生可能與子宮修復過程中微循環(huán)障礙有關，即子宮內(nèi)膜血管修復再生困難。因此，本研究通過米非司酮和米索前列醇制備藥物流產(chǎn)大鼠模型，該模型能使大鼠處于子宮出血和血瘀狀態(tài)，與產(chǎn)后腹痛的部分臨床癥狀相符合，用益母草膏進行干預，對子宮組織中PGF2αR、MMP9、TIMP1、VEGFA、VEGFR2的蛋白表達進行測定。研究結果表明，益母草可顯著抑制模型大鼠子宮組織中PGF2αR、MMP9蛋白上調(diào)和TIMP1、VEGFR2蛋白下調(diào)。

綜上所述，本研究通過網(wǎng)絡藥理學，分析了益母草治療產(chǎn)后腹痛潛在的作用機制，結果指出益母草治療產(chǎn)后腹痛是通過多成分、多靶點、多途徑的方式發(fā)揮作用。通過進一步檢測益母草對流產(chǎn)模型大鼠子宮組織中相關蛋白表達水平的影響，驗證了部分網(wǎng)絡藥理學的結果，即PI3K-Akt信號通路、雌激素信號通路、MAPK信號通路、HIF-1信號通路可能是益母草治療產(chǎn)后腹痛的主要作用途徑，為進一步研究益母草的藥效及其作用機理提供了可靠的參考。