蓍草化學(xué)成分研究

趙晨光，薛金鳳，馬睿驍，梁旭博，杜 錕，司盈盈，馮衛(wèi)生*，薛貴民*

1河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院；2河南省中藥開發(fā)工程技術(shù)研究中心，鄭州450046

蓍屬(Achillea)(菊科)約有200種，廣泛分布于北溫帶，我國產(chǎn)有10種，如今從中分離得到的化合物主要有倍半萜、黃酮、木脂素等[1,2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明該屬植物具有顯著的抗炎[1]、降糖活性[3,4]。蓍草為菊科植物蓍AchilleaalpineL的地上干燥部位，又名一支蒿、高山蓍、千條蜈蚣等。蓍草味苦、酸、性平，歸肺、脾、膀胱經(jīng)。具有解毒利濕、活血化瘀的功能[5]。復(fù)方“蓍草散”能有效的改善潰瘍病的胃酸[6]。在民間蓍草也常用來清熱解毒[7]?！吨腥A本草》中描述蓍草具有不錯的抗炎、解熱鎮(zhèn)痛等活性。主要分布于我國西南的云南，西北的甘肅，華北的河南，山西等地，夏、秋兩季開花時采割[8]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明蓍草中化學(xué)成分具有顯著的抗炎活性，還有抗氧化、抗病毒、解痙攣及治療胃潰瘍等作用[9-12]，但是如今缺少對該植物系統(tǒng)的化學(xué)成分及相關(guān)藥理學(xué)研究?，F(xiàn)僅報道了少量的倍半萜、生物堿以及揮發(fā)油等[13,14]。因此，為了進(jìn)一步了解蓍草的物質(zhì)基礎(chǔ)，提高其資源綜合利用效率，本文對蓍草95%乙醇部位的化學(xué)成分進(jìn)行了分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定，并測試了分離化合物的活性，以期發(fā)現(xiàn)具有抗胃癌作用的先導(dǎo)化合物。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

預(yù)制硅膠薄層G板(10～40 μm青島海洋化工廠)；大孔樹脂Diaion HP-20(日本三菱化學(xué))；ODS(40～60 μm，YMC)；Sephadex LH-20(40～70 μm，Amersham Pharmacia Biotech AB，Uppsala，瑞士)；LC-52型高壓制備液相色譜儀(賽譜銳思(北京)科技有限公司)；Bruker AVANCE 500核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo))Bruker maxis HD型飛行時間質(zhì)譜儀(德國Bruker公司)；SCIEX Qtrap 5500質(zhì)譜儀(美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)，所用分析純和色譜純試劑為天津恒興和天津四友精細(xì)化學(xué)有限公司生產(chǎn)。顯色劑：10%濃硫酸乙醇，同時結(jié)合紫外燈(254 nm)觀察。

2020年5月15日購買自于云南省昆明市，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)董誠明教授鑒定為AchilleaalpineL的地上干燥部位，標(biāo)本(20200515)收藏于河南中醫(yī)藥大學(xué)天然產(chǎn)物研究室。

1.2 實驗方法

1.2.1 提取分離

蓍草(800 g)用95%乙醇超聲提取，濾過，將提取液減壓濃縮得浸膏50 g。將所得浸膏用甲醇溶解，與大孔樹脂材料(Diaion HP-20)進(jìn)行拌樣(1∶1)，然后裝載于大孔樹脂填料上方，依次用10%、30%、60%、75%、95%的乙醇/水梯度洗脫，一共得到5個餾分，分別為Fr.1～Fr.5。對這五個餾分進(jìn)行分析液相分析，根據(jù)液相結(jié)果，將Fr.3與Fr.4合并，并命名為A1組分。將A1組分過Sephadex LH-20處理，以甲醇為流動相得3個組分(A1-1、A1-2、A1-3)。將組分A1-2進(jìn)行ODS色譜柱處理，用甲醇/水梯度洗脫得到15個餾分(A1-2-1～A1-2-15)。組分A1-2-7經(jīng)半制備液相(54%乙腈/水)得到化合物2(tR=24.1 min，4.8 mg)。組分A1-2-9經(jīng)半制備液相(56%乙腈/水)得到化合物3(tR=32.5 min，5.7 mg)。組分A1-2-7以40%→90%乙腈梯度洗脫經(jīng)半制備液相制備得到化合物1(tR=41.2 min，2.4 mg)和4(tR=48.6 min，3.7 mg)。組分A1-2-11經(jīng)半制備液相70%乙腈/水等度洗脫制備得化合物5(tR=35.0 min，5.7 mg)和6(tR=40.2 min，1.8 mg)。將A1-3組分進(jìn)行ODS色譜柱處理，用10%→100%甲醇/水梯度洗脫得到20個餾分依次為A1-3-1至A1-3-20。組分A1-3-11經(jīng)半制備液相(10%→80%乙腈/水)得到化合物7(tR=43.2 min，2.6 mg)。組分A1-3-13經(jīng)半制備液相(20%→80%乙腈/水)得到化合物8(tR=45.2 min，1.8 mg)。組分A1-3-16以60%→100%乙腈/水為流動相經(jīng)半制備液相制備得到化合物9(tR=29.1 min，5.4 mg)和10(tR=35.2 min，4.7 mg)。組分A1-3-17經(jīng)半制備液相(65%→100%乙腈/水)制備得到化合物11(tR=35.6 min，4.2 mg)。組分A1-3-14經(jīng)半制備液相采用70%甲醇等度洗脫制備得化合物12(tR=30.5 min，2.4 mg)。

將Fr.2命名為A2組分，將A2組分進(jìn)行Sephadex LH-20處理，經(jīng)合并共得到5個組分(A2-1～A2-5)。其中組分A2-3進(jìn)行ODS色譜柱處理，用10%→100%甲醇/水梯度洗脫，共得到17個組分(A2-3-1～A2-3-17)。組分A2-3-7經(jīng)半制備液相制備(35%甲醇/水)得到化合物13(tR=20.2 min，8.2 mg)。組分A2-3-8經(jīng)半制備液相以20%→85%甲醇/水梯度洗脫得到化合物14(tR=30.0 min，12.7 mg)。組分A2-3-3經(jīng)半制備液相制備(10%→70%甲醇/水)得到化合物15(tR=29.2 min，7.9 mg)。組分A2-3-12經(jīng)半制備液相以35%乙腈/水等度洗脫得到化合物16(tR=35.3 min，9.0 mg)。

1.2.2 細(xì)胞毒活性篩選

分別取對數(shù)生長期的四種不同的人胃癌細(xì)胞MGC-803、MKN-45、HGC-27和AGS細(xì)胞，用0.25%胰酶消化離心后用完全培養(yǎng)基稀釋，用細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)后，調(diào)整細(xì)胞密度為5.0×103個/孔，然后每孔190 μL接種于96孔培養(yǎng)板中，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，加入配置好的化合物1～11和陽性藥5-氟尿嘧啶溶液繼續(xù)培養(yǎng)48 h。然后每孔再加入配置好的MTT溶液(濃度為5 mg/mL)，置于CO2培養(yǎng)箱37 ℃孵育，孵育4 h后棄去培養(yǎng)液。最后每孔加入150 μL DMSO，振蕩10 min，用酶標(biāo)儀檢測。在570 nm檢測波長(參比波長：630 nm)下測定每個孔的OD值，計算不同濃度的藥物對細(xì)胞的抑制率，實驗重復(fù)3次。抑制率的計算公式為：抑制率=(1-OD加藥組/OD空白組)× l00%。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1～16的化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～16的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structures of compounds 1-16

化合物1黃色油狀(甲醇)，易溶于甲醇、氯仿。HR-ESI-MS測定其準(zhǔn)分子離子峰為m/z182.154 1 [M+H]+(Calcd for C11H20NO,182.154 5)，結(jié)合13C NMR譜圖分析，確定其分子式為C11H19NO，不飽和度為3。其紫外吸收為UV(MeOH)λmax262 nm(3.49)。IR光譜顯示該化合物含有-NH2吸收峰(3 397 cm-1)以及酰胺羰基(1 634 cm-1)的伸縮振動吸收峰。根據(jù)蓍草中已報道化學(xué)成分，其結(jié)構(gòu)中含有氮原子，推測其應(yīng)為酰胺類結(jié)構(gòu)[15]。1H NMR圖譜可以明顯看出1個甲基氫信號δH0.89(3H，t)；2組烯氫信號δH：6.25(1H，d，J=15.0 Hz)，7.22(1H，dd，J=15.0，10.5 Hz，H-3)和δH6.17(1H，dd，J=15.0，10.5 Hz)，6.06(1H，m)(表1)，根據(jù)其偶合常數(shù)以及查閱相關(guān)文獻(xiàn)[15]可以判斷出有兩個共軛的反式雙鍵。13C NMR圖譜顯示其含有11個碳信號，結(jié)合HSQC譜圖其分別歸屬為4個次甲基(皆為烯碳δC118.7、143.0、129.0、142.7)，5個亞甲基(δC22.6、31.5、24.8、28.7、33.1)，1個甲基(δC14.2)，1個酰胺羰基(δC165.9)信號(表1)。該化合物結(jié)構(gòu)可進(jìn)一步由HMBC譜圖確定。在HMBC譜(圖2)中，顯示H-2(δH6.25，1H，d，J=15.0 Hz)與C-1(δC165.9)，C-3(δC143.0)，C-4(δC129.0)相關(guān)，H-3(δH7.22)和C-5(δC142.7)、C-4(δC129.0)、C-2(δC118.7)、C-1(δC165.9)，H-4(δH6.17)和C-3、C-2相關(guān)，H-5(δH6.06)和C-4，C-3相關(guān)說明兩個雙鍵相連且與羰基共軛。H-6(δH2.14)與C-5，C-6(δC33.1)，H-7(δH1.44)與C-5，以及H-5(δH6.06)與C-6，C-7(δC28.7)存在HMBC相關(guān)，說明6與7位是5位相連的亞甲基信號。H-11(δH0.89)位甲基信號與亞甲基碳C-10(δC22.6)和C-9(δC31.5)相關(guān)，H-9(δH1.31)與亞甲基碳C-8(δC24.8)和C-10，H-8(δH1.67)與C-7和C-8存在HMBC相關(guān)信號，確定C-6至C-11位為6個碳連接形成的飽和碳鏈。根據(jù)以上結(jié)果，最終確定新化合物1為一個6個飽和碳鏈與兩個共軛雙鍵相連形成酰胺類化學(xué)成分，結(jié)構(gòu)如圖2所示。該化合物命名為(2E,4E)-N-(2-methylbutyl)deca-2,4-dienamide?；衔?的詳細(xì)結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)原始圖譜可從本刊官網(wǎng)免費(fèi)下載(www.trcw.ac.cn)。

表1 化合物1的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)(500和125 MHz，CDCl3)Table 1 1H NMR and 13C NMR spectroscopic data for compound 1 (500 and 125 MHz,CDCl3)

圖2 化合物1的結(jié)構(gòu)及關(guān)鍵HMBC相關(guān)信號Fig.2 The structure and key HMBC correlations of compound 1

化合物2白色晶體(甲醇)；ESI-MS：m/z224.20[M+H]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.75(1H，J=15.0 Hz，H-2)，7.18(1H，dd，J=15.0，10.0 Hz，H-3)，6.12(1H，dd，J=15.0，10.0 Hz，H-4)，6.07(1H，dt，J=14.0，7.5 Hz，H-5)，2.14(2H，dd，J=14.0，7.0 Hz，H-6)，1.41(2H，dd，J=14.0，7.0 Hz，H-7)，1.30(4H，m，H-8，H-9)，0.86(3H，t，J=6.5 Hz，H-10)，3.16(2H，t，J=6.5 Hz，H-1′)，1.79(1H，tt，J=13.5，6.5 Hz，H-2′)，0.92(6H，t，J=6.5 Hz，H-3′，H-4′)，5.52(1H，br s，-NH)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：166.4(C-1)，121.6(C-2)，143.5(C-3)，128.6(C-4)，141.7(C-5)，32.8(C-6)，31.5(C-7)，28.3(C-8)，22.2(C-9)，14.0(C-10)，47.0(C-1′)，28.7(C-2′)，20.1(C-3′)，20.1(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報道一致，故鑒定化合物2為墻草堿。

化合物3白色晶體(甲醇)；EI-MS：m/z221.18[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.75(1H，d，J=15.0 Hz，H-2)，7.19(1H，dd，J=15.0，10.5 Hz，H-3)，6.15(1H，dd，J=15.0，10.5 Hz，H-4)，6.08(1H，m，H-5)，2.28～2.10(4H，m，H-6，H-7)，5.36(1H，dd，J=16.0，7.0 Hz，H-8)，5.50(1H，m，H-9)，1.60(3H，d，J=6.0 Hz，H-10)，3.17(2H，t，J=6.5 Hz，H-1′)，1.79(1H，tt，J=13.5，6.5 Hz，H-2′)，0.92(6H，t，J=6.5 Hz，H-3′，H-4′)，5.52(1H，brs，-NH)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：166.4(C-1)，122.1(C-2)，141.3(C-3)，128.6(C-4)，142.4(C-5)，32.9(C-6)，26.3(C-7)，129.3(C-8)，124.8(C-9)，12.9(C-10)，47.0(C-1′)，28.37(C-2′)，20.2(C-3′)，20.2(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報道一致，故鑒定化合物3為(E,E,Z)-2,4,8-decatrienoicacid isobutylamide-8,9-dehydropellitorine。

化合物4無色油狀(甲醇)；EI-MS：m/z237.20[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.74(1H，d，J=15.0 Hz，H-2)，7.19(1H，dd，J=14.5，10.0 Hz，H-3)，6.10(1H，dd，J=15.5，10.0 Hz，H-4)，6.06(1H，dd，J=15.0,7.5 Hz，H-5)，2.29(2H，m，H-6)，1.40(2H，m，H-7)，1.29(4H，m，H-8，H-9)，0.89(3H，t，J=10.0 Hz,H-10)，3.15(1H，m，H-1′)，3.26(1H，m，H-1′)，1.59(1H，m，H-2′)，0.92(3H，d，J=6.5 Hz,H-3′)，1.15(2H，m，H-4′)，0.91(3H，dd，J=7.5,6.5 Hz,H-5′)，5.43(1H，br s，-NH)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：166.6(C-1)，121.8(C-2)，141.5(C-3)，128.3(C-4)，143.4(C-5)，33.1(C-6)，28.6(C-7)，31.5(C-8)，22.6(C-9)，14.2(C-10)，45.3(C-1′)，35.2(C-2′)，27.1(C-3′)，11.4(C-4′)，17.3(C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報道一致，故鑒定化合物4為N-2′-methylbutyl-(E,E)2,4-decadienam。

化合物5黃色油狀(甲醇)；EI-MS：m/z308.23[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：2.28(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，1.59(2H，m，H-3)，1.28(6H，m，H-4，H-5，H-6)，1.59(2H，m，H-7)，2.50(2H，t，J=7.5 Hz，H-8)，6.05(1H，d，J=15.5 Hz，H-10)，7.10(1H，m，H-11)，6.17(1H，m，H-12)，6.14(1H，m，H-13)，2.14(2H，dd，J=12.5，7.5 Hz，H-14)，1.34(2H，m，H-15)，1.28(4H，m，H-16，H-17)，0.87(3H，t，J=7.0 Hz，H-18)，3.64(3H，s，-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：174.4(C-1)，34.2(C-2)，25.0(C-3)，29.1(C-4)，29.2(C-5)，29.2(C-6)，24.3(C-7)，40.7(C-8)，201.3(C-9)，128.1(C-10)，143.0(C-11)，129.1(C-12)，145.6(C-13)，33.2(C-14)，28.7(C-15)，31.6(C-16)，22.6(C-17)，14.1(C-18)，51.6(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報道一致，故鑒定化合物5為methyl(E,E)10,12-9-oxooctadeca-10,12-dienoate。

化合物6黃色油狀(甲醇)；EI-MS：m/z308.23[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：2.29(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，1.61(2H，m，H-3)，1.31(6H，m，H-4，H-5，H-6)，1.61(2H，m，H-7)，2.52(2H，t，J=7.5 Hz，H-8)，6.07(1H，d，J=15.5 Hz，H-10)，7.13(1H，dd，J=15.5，6.5 Hz，H-11)，6.17(4H，m，H-12，H-13)，2.17(2H，dd，J=12.5，7.0 Hz，H-14)，1.46(2H，m，H-15)，1.31(4H，m，H-16，H-17)，0.89(3H，t，J=7.0 Hz,H-18)，3.66(3H，s，-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：174.4(C-1)，34.2(C-2)，25.0(C-3)，29.1(C-4)，29.2(C-5)，29.3(C-6)，24.5(C-7)，40.6(C-8)，201.2(C-9)，128.0(C-10)，143.1(C-11)，129.0(C-12)，145.8(C-13)，33.2(C-14)，28.5(C-15)，31.5(C-16)，22.6(C-17)，14.1(C-18)，51.6(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報道一致，故鑒定化合物6為(S)-14-(E,E)-10,12-methyl-14-hydroxy-9-oxo-octadeca-10,12-dienoate。

化合物7淡黃色油狀物(甲醇)；EI-MS：m/z229.15[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.80(1H，d，J=15.0 Hz，H-2)，7.18(1H，dd，J=15.0，11.0 Hz，H-3)，6.20(1H，dd，J=15.0，11.0 Hz，H-4)，6.07(1H，dt,J=15.0,7.0 Hz，H-5)，2.39(4H，m，H-6，H-7)，1.98(3H，s，H-11)，3.15(2H，m，H-1′)，1.80(1H，m，H-2′)，0.93(6H，d，J=7.0 Hz,H-3′，H-4′)，5.49(1H，br s，-NH)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：166.2(C-1)，123.3(C-2)，140.6(C-3)，129.9(C-4)，139.2(C-5)，31.4(C-6)，19.0(C-7)，77.0(C-8)，65.6(C-9)，65.2(C-10)，68.4(C-11)，47.1(C-1′)，28.8(C-2′)，20.3(C-3′)，20.3(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報道一致，故鑒定化合物7為(E,E)-2,4-undecadiene-8,10-diynnoic acid isobutylamide。

化合物8粉色羽狀(甲醇)；EI-MS：m/z287.19[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.69(1H，d，J=15.0 Hz，H-2)，7.19(1H，dd，J=15.0，9.5 Hz，H-3)，6.10(1H，dd，J=15.0,9.5 Hz,H-4)，6.06(1H，dt，J=15.0,7.0 Hz,H-5)，2.13(2H，m，H-6)，1.39(2H，m，H-7)，1.28(4H，m，H-8，H-9)，0.88(3H，t，J=7.0 Hz,H-10)，3.56(2H，q，J=7.0 Hz,H-1′)，2.76(2H，t，J=7.0 Hz，H-2′)，7.02(2H，d，J=8.0 Hz，H-4′，H-8′)，6.80(2H，d，J=8.0 Hz，H-5′，H-7′)，5.54(1H，brs，-NH)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：166.6(C-1)，121.9(C-2)，143.7(C-3)，128.1(C-4)，143.7(C-5)，32.9(C-6)，28.5(C-7)，31.4(C-8)，22.5(C-9)，14.0(C-10)，41.0(C-1′)，34.8(C-2′)，130.4(C-3′)，129.8(C-4′)，115.6(C-5′)，154.8(C-6′)，115.6(C-7′)，129.8(C-8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報道一致，故鑒定化合物8為(E,E)-2,4-decadienoic acid p-hydroxyphenethylamide。

化合物9黃色油狀(甲醇)；EI-MS：m/z378.20[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：6.63(2H，s，H-3，H-5)，6.59(1H，d，J=15.0 Hz，H-7)，6.23(1H，d，J=15.0 Hz，H-8)，4.75(2H，m，H-9)，2.48(2H，d，J=7.0 Hz，H-2′)，2.30(1H，m，H-3′)，0.98(6H，d，J=7.0 Hz，H-4′，H-5′)，2.24(2H，d，J=7.0 Hz，H-2′′)，2.27(1H，m，H-3′′)，1.07(6H，d，J=6.5 Hz，H-4′′，H-5′′)，3.82(s，6H，-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：134.7(C-1)，152.4(C-2)，103.5(C-3)，128.9(C-4)，103.4(C-5)，152.4(C-6)，134.1(C-7)，123.8(C-8)，64.8(C-9)，170.9(C-1′)，43.2(C-2′)，25.9(C-3′)，22.5(C-4′)，22.5(C-5′)，173.1(C-1′′)，43.6(C-2′′)，26.2(C-3′′)，22.6(C-4′′)，22.6(C-5′′)。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報道基本一致，故鑒定化合物9為sinapyl alcohol diisovalerate。

化合物10黃色油狀(甲醇)；EI-MS：m/z310.25[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：2.30(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，1.17～1.12(10H，m，H-3，H-4，H-5，H-6，H-7)，2.18(2H，m，H-8)，5.45(1H，dt，J=11.0，7.5 Hz，H-9)，5.97(1H，t，J=11.0 Hz，H-10)，6.48(1H，dd，J=15.0，11.0 Hz，H-11)，5.66(1H，dd，J=15.0，7.0 Hz，H-12)，4.16(1H，q，J=7.0 Hz，H-13)，1.17～1.12(8H，m，H-14，H-15，H-16，H-17)，0.89(3H，t，J=7.0 Hz,H-18)，3.66(3H，s，-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：174.3(C-1)，37.3(C-2)，25.3(C-3)，29.0(C-4)，29.1(C-5)，29.3(C-6)，24.9(C-7)，34.1(C-8)，125.9(C-9)，133.1(C-10)，135.1(C-11)，127.7(C-12)，72.9(C-13)，27.8(C-14)，29.3(C-15)，31.5(C-16)，22.5(C-17)，14.0(C-18)，51.44(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[21]，故鑒定化合物10為(S)-13-hydroxyoctadeca-(Z,E)-9,11-dienoic acid。

化合物11無色油狀(甲醇)；EI-MS：m/z301.20[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.67(1H，d，J=15.0 Hz，H-2)，7.18(1H，dd，J=15.0，9.5 Hz，H-3)，6.11(1H，dd，J=15.0，9.5 Hz，H-4)，6.06(1H，dd，J=15.0，6.0 Hz，H-5)，2.14(2H，dd，J=13.5，7.0 Hz，H-6)，1.41(2H，dd，J=14.0，7.0 Hz，H-7)，1.28(4H，m，H-8，H-9)，0.88(3H，t，J=7.0 Hz，H-10)，5.40(1H，br s，-NH)，3.56(2H，dd，J=13.0，7.0 Hz，H-1′)，2.79(2H，t，J=7.0 Hz，H-2′)，7.11(2H，d，J=8.5 Hz，H-4′，H-8′)，6.85(2H，d，J=8.5 Hz，H-5′，H-7′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：166.9(C-1)，121.4(C-2)，143.0(C-3)，128.2(C-4)，144.7(C-5)，34.1(C-6)，28.6(C-7)，31.5(C-8)，22.6(C-9)，14.2(C-10)，41.2(C-1′)，33.8(C-2′)，130.2(C-3′)，130.8(C-4′)，114.2(C-5′)，151.2(C-6′)，114.2(C-7′)，130.8(C-8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報道一致，故鑒定化合物11為(E,E)-2,4-decadienamide acid p-methoxyphenethylamide。

化合物12黃色油狀(甲醇)；EI-MS：m/z257.20[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：6.13(1H，d，J=15.0 Hz，H-2)，6.88(1H，dd，J=15.0，4.5 Hz，H-3)，4.36(1H，m，H-4)，3.78(1H，m，H-5)，1.49(1H，m，H-6)，1.50(1H，m，H-7)，1.33(1H，m，H-7)，1.32(2H，m，H-8)，1.33(2H，m，H-9)，0.91(3H，m，H-10)，3.19(2H，t，J=6.5 Hz，H-1′)，1.83(1H，m，H-2′)，0.96(6H，t，J=6.5 Hz，H-3′，H-4′)，5.50(1H，br s，NH)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：165.4(C-1)，125.2(C-2)，141.1(C-3)，74.2(C-4)，74.5(C-5)，32.1(C-6)，25.7(C-7)，31.9(C-8)，22.7(C-9)，14.1(C-10)，47.1(C-1′)，28.3(C-2′)，20.3(C-3′)，20.3(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報道一致，故鑒定化合物12為erythro-N-isobutyl-4,5-dihydroxy-2-(E)-decenamide。

化合物13淡黃色粉末(甲醇)；EI-MS：m/z368.11[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：2.15(2H，m，H-2)，5.07(1H，dd，J=9.0，5.5 Hz，H-3)，3.65(1H，m，H-4)，3.94(1H，dd，J=5.5，3.0 Hz，H-5)，1.82(1H，dd，J=12.5，9.5 Hz，H-6)，1.99(1H，dd，J=13.5，3.0 Hz，H-6)，7.09(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.03(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6′)，6.83(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，7.44(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，6.16(1H，d，J=16.0 Hz，H-8′)，3.62(s，3H，-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：75.7(C-1)，37.6(C-2)，72.4(C-3)，72.0(C-4)，69.9(C-5)，38.4(C-6)，175.7(C-7)，127.5(C-1′)，116.8(C-2′)，146.8(C-3′)，149.5(C-4′)，115.2(C-5′)，124.1(C-6′)，145.4(C-7′)，115.2(C-8′)，169.0(C-9′)，56.5(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]報道一致，故鑒定化合物13為3-O-阿魏酰-奎寧酸。

化合物14白色針晶(甲醇)；EI-MS：m/z180.04[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：7.06(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.00(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6)，6.77(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，7.49(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，6.27(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：129.3(C-1)，116.4(C-2)，146.5(C-3)，147.9(C-4)，121.7(C-5)，123.1(C-6)，141.5(C-7)，114.6(C-8)，176.2(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]報道一致，故鑒定化合物14為肉桂酸。

化合物15淡黃色粉末(甲醇)；EI-MS：m/z354.09[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：2.00(2H，m，H-2)，5.08(1H，dd，J=9.0，5.5 Hz，H-3)，3.57(1H，m，H-4)，3.93(1H，m，H-5)，1.98(1H，m，H-6)，1.79(1H，m，H-6)，7.04(1H，d，J=1.5 Hz，H-2′)，6.98(1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6′)，6.77(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，7.43(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，6.16(1H，d，J=16.0 Hz，H-8′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：72.3(C-1)，37.7(C-2)，71.3(C-3)，71.1(C-4)，68.9(C-5)，38.7(C-6)，175.6(C-7)，121.8(C-1′)，114.8(C-2′)，148.8(C-3′)，146.0(C-4′)，116.2(C-5′)，126.1(C-6′)，145.4(C-7′)，115.2(C-8′)，166.3(C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]報道一致，故鑒定化合物15為綠原酸。

化合物16淡黃色粉末(甲醇)；EI-MS：m/z530.14[M]+；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：2.24(2H，m，H-2)，4.97(1H，dd，J=6.5，3.0 Hz，H-3)，4.14(1H，m，H-4)，5.27(1H，m，H-5)，2.00(1H，m，H-6)，1.89(1H，m，H-6)，7.04(2H，d，J=1.5 Hz，H-2′，H-2′′)，6.99(2H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6′，H-6′′)，6.76(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′，H-5′′)，7.51(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，6.26(1H，d，J=16.0 Hz，H-8′)，7.42(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′′)，6.13(1H，d，J=16.0 Hz，H-8′′)，3.66(3H，s，-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：74.5(C-1)，37.9(C-2)，72.3(C-3)，71.0(C-4)，72.0(C-5)，36.5(C-6)，177.6(C-7)，127.8(C-1′)，115.8(C-2′)，146.7(C-3′)，149.0(C-4′)，116.4(C-5′)，123.1(C-6′)，147.4(C-7′)，115.5(C-8′)，168.3(C-9′)，127.6(C-1′′)，115.8(C-2′′)，146.8(C-3′′)，149.3(C-4′′)，116.2(C-5′′)，123.1(C-6′′)，145.8(C-7′′)，115.6(C-8′′)，169.2(C-9′′)，56.1(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[27]，故鑒定化合物16為3-O-咖啡酰-5-O-阿魏酰奎寧酸。

2.2 體外細(xì)胞毒活性篩選

對蓍草95%乙醇提取物分離得到化合物1～11在不同人胃癌細(xì)胞株MGC-803、MKN-45、HGC-27和AGS進(jìn)行活性篩選。結(jié)果顯示在50 μM時，化合物2、5與9對MGC-803抑制率依次為38.7%、34.7%、31.5%(陽性藥5-氟尿嘧啶10 μM：抑制率為43.72%)，統(tǒng)計學(xué)分析顯示P<0.05，與空白組對比具有顯著差異，表明化合物2、5與9對MGC-803細(xì)胞株具有一定的抑制活性?；衔?～11在50 μM時對MKN-45、HGC-27和AGS胃癌細(xì)胞未顯示出明顯的抑制活性(見表2)。

表2 化合物1～11對HGC-27、MGC-803、AGS及MKN-45的細(xì)胞毒活性Table 2 Cytotoxicity of compounds 1-11 on HGC-27,MGC-803,AGS and MKN-45 cell lines s,n =3)

3 結(jié)論

通過對蓍草進(jìn)行提取分離，共得到16個單體化合物，其中化合物1是一個新的酰胺類化合物，化合物4～6、9、10、12、13、16均為首次從蓍屬植物中分離得到，化合物8、11為首次從蓍草中分離得到。對這些化合物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選(胃癌細(xì)胞株MGC-803、MKN-45、HGC-27和AGS)發(fā)現(xiàn)不同結(jié)構(gòu)類型的化合物2、5與9對MGC-803胃癌細(xì)胞株有選擇抑制活性，這為發(fā)現(xiàn)具有選擇性抗胃癌作用的先導(dǎo)化合物提供了思路。在蓍草的文獻(xiàn)報道中，對其化學(xué)成分的報道較少，藥理研究主要為抗炎活性，但對細(xì)胞毒活性鮮有報道[1,14]。我們首次對其含有的主要化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分離及抗腫瘤活性的篩選，部分化合物顯示出一定的胃癌細(xì)胞抑制活性，為更好地開發(fā)利用該植物，豐富該植物化學(xué)成分的種類以及探究其有效活性成分奠定了一定的理論基礎(chǔ)。