核糖核酸5′端NAD+帽子修飾研究進(jìn)展

董海嬌 楊曉玉 莫蓓莘 陳雪梅 崔潔

（1. 深圳大學(xué)生命與海洋科學(xué)學(xué)院，深圳 518037；2. 深圳大學(xué)光電工程學(xué)院 光電子器件與系統(tǒng)（教育部/廣東?。┲攸c(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，深圳 518060；3. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院，泰安 271018；4. 美國(guó)加利福尼亞大學(xué)河濱分校整合基因組學(xué)研究中心/植物科學(xué)系，美國(guó)加州河濱 92521）

核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）分子同時(shí)具有信息分子和調(diào)控分子的雙重身份，在生命活動(dòng)的各個(gè)方面發(fā)揮著重要作用。它種類繁多，主要包括經(jīng)典的信使RNA（messenger RNA，mRNA）、核糖體RNA（ribosomal RNA，rRNA）和轉(zhuǎn)運(yùn)RNA（transport RNA，tRNA），以及近年來(lái)陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)和報(bào)道的、具有基因表達(dá)調(diào)控作用的微小RNA（microRNA，miRNA）和具有免疫和防御功能的小干擾RNA（small interference RNA，siRNA）等［1-2］。隨著技術(shù)的更新和研究的深入，RNA在不同生物學(xué)過(guò)程中的功能和作用機(jī)制逐漸被揭示。

RNA功能的發(fā)揮主要由其自身序列和結(jié)構(gòu)特征所決定，同時(shí)基于共價(jià)化學(xué)修飾的表觀轉(zhuǎn)錄組（epitranscriptome）調(diào)控也發(fā)揮了重要的作用［3］。目前，在RNA分子上已鑒定到超過(guò)170種化學(xué)修飾，它們發(fā)生在長(zhǎng)鏈分子內(nèi)部或者兩端，且多見于tRNA和rRNA上［4］。mRNA分子內(nèi)部常見的堿基修飾有N6-腺苷酸甲基化（N6-methyladenosine，m6A）、5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine，m5C）和假尿苷（pseudouridine，Ψ）化等，它們?cè)趍RNA的穩(wěn)定性、內(nèi)含子剪切、輸出、翻譯等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用［5］。其中，mRNA的m6A修飾是近年的研究熱點(diǎn)，該過(guò)程的異常會(huì)導(dǎo)致動(dòng)植物發(fā)育異常和疾病的出現(xiàn)，如胚胎發(fā)育遲緩和腫瘤等［6-7］。

7-甲基鳥嘌呤（7-methylguanosine，m7G）是真核生物mRNA 5′端特有的、經(jīng)典的加帽修飾，參與調(diào)控mRNA的穩(wěn)定性、加工、運(yùn)輸和翻譯等生物學(xué)過(guò)程，具有重要的生物學(xué)意義［8-9］。不同于真核生物，傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為原核生物mRNA 5′端以三磷酸RNA（pppRNA）為主，沒有類似m7G的帽子結(jié)構(gòu)［10］。但是2009年，研究人員利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（liquid chromatograph mass spectrometer，LC-MS）對(duì)細(xì)菌RNA的5′端進(jìn)行分析，鑒定到兩種新的共價(jià)修飾，即煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+）和輔酶A衍生物（dephosphocoenzyme A，DP-CoA），并且NAD+帽子修飾的RNA（NAD-RNA）占比更高［11-12］。隨后，人們陸續(xù)在酵母、小鼠、人源細(xì)胞、擬南芥等真核生物中也發(fā)現(xiàn)了NAD-RNA［13-14］，暗 示RNA的NAD+加 帽 是 一種非常保守的修飾機(jī)制。近年來(lái)，研究人員整合酶處理捕獲和高通量測(cè)序技術(shù)（NAD captureSeq），實(shí)現(xiàn)了全轉(zhuǎn)錄組水平的NAD-RNA鑒定［15-16］，為隨后NAD-RNA生物學(xué)功能及NAD+修飾代謝通路的研究奠定基礎(chǔ)。

NAD+又稱輔酶Ⅰ，是生物體內(nèi)多種脫氫酶的輔酶，可把代謝過(guò)程中由脫氫酶催化產(chǎn)生的氫離子傳遞給黃素蛋白，從而將三羧酸循環(huán)和呼吸鏈反應(yīng)串聯(lián)起來(lái)［17-18］。而NAD+作為一種全新的RNA 5′端修飾結(jié)構(gòu)，從最初發(fā)現(xiàn)至今僅有十幾年的時(shí)間，特別是在真核生物中，NAD-RNA的鑒定和研究剛剛起步。本文聚焦于NAD-RNA，從其發(fā)現(xiàn)、檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展、生物學(xué)功能及其調(diào)控機(jī)制等方面對(duì)目前該領(lǐng)域取得的最新進(jìn)展進(jìn)行總結(jié)，并對(duì)今后的研究做出展望。

1 NAD-RNA的發(fā)現(xiàn)及其檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展

NAD-RNA最早發(fā)現(xiàn)于大腸桿菌（Escherichia coli）和委內(nèi)瑞拉鏈霉菌（Streptomyces venezuelae）體內(nèi)。2009年，研究人員利用分子排阻色譜（size-exclusion chromatography）分離E. coli和S. venezuelae的大分子RNA片段，然后以核酸酶P1將其消化為小分子片段，通過(guò)高分辨率LC-MS對(duì)這些小分子片段進(jìn)行分析，首次檢測(cè)到了位于RNA 5′端的NAD+帽子修飾［11］。Grudzien-Nogalska等［19］在此基礎(chǔ)上提出通過(guò)兩步法來(lái)檢測(cè)NAD-RNA的含量，即“NAD-capQ”（NAD cap detection and quantitation）法，主要包括NAD-RNA的核酸酶P1處理和游離的NAD+含量的比色法檢測(cè)。目前，NAD-capQ已成功應(yīng)用于大腸桿菌、酵母、人源細(xì)胞HEK293T和擬南芥中NADRNA的定量檢測(cè)［14，19］。最近，Wang等［13］結(jié)合offline HPLC（high performance liquid chromatography，高效液相色譜）和LC-MS/MS開發(fā)了可富集定量各種RNA帽子結(jié)構(gòu)的CapQuant檢測(cè)法，并在登革熱病毒、大腸桿菌、酵母、小鼠肝臟和腎臟以及人源B淋巴細(xì)胞的mRNA中鑒定到包括m7G、NAD+在內(nèi)的26種帽子修飾，也表明NAD+同m7G一樣存在于mRNA的5′端。

NAD+及其代謝衍生物可參與生物體內(nèi)多種基礎(chǔ)的生理活動(dòng)，在調(diào)控細(xì)胞氧化還原穩(wěn)態(tài)、蛋白翻譯后修飾以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，其含量異?？蓪?dǎo)致多種疾病的發(fā)生［20-21］。NADRNA是否參與上述過(guò)程，或者與其它未知的代謝和調(diào)控途徑有關(guān)呢？為了解答上述問(wèn)題，研究人員開發(fā)了NAD captureSeq，利用腺苷二磷酸核糖環(huán)化酶（adenosine diphosphate-ribosylcyclase，ADPRC）在炔醇存在條件下催化RNA 5′端NAD+發(fā)生轉(zhuǎn)糖基化反應(yīng)生成炔烴RNA（alkyne-RNA），隨后通過(guò)銅催化的炔疊氮化物環(huán)加成（a copper-catalysed azide-alkyne cycloaddition，CuAAC）反應(yīng)將alkyne-RNA轉(zhuǎn)化為生物素標(biāo)記的RNA（biotin-RNA）（圖1-A），最后借助鏈霉親和素磁珠分離biotin-RNA并進(jìn)行高通量測(cè)序，實(shí)現(xiàn)了在全基因組水平上對(duì)E. coli體內(nèi)NADRNA的分析和鑒定［15］，結(jié)果表明，E. coli中NADRNA大多為特異的調(diào)控類小RNA（small RNA，sRNA）和mRNA［15］。隨后，研究人員利用NAD captureSeq先后在酵母、人源細(xì)胞、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）和擬南芥中鑒定NAD+加帽修飾的RNA［14，22-24］；與E. coli的研究結(jié)果類似，這些物種中的NAD-RNA主要是mRNA，另有少量的非編碼RNA，表明NAD+是一種普遍存在的RNA修飾類型，且與m7G一樣主要修飾mRNA，但可轉(zhuǎn)錄生成NAD-RNA的基因數(shù)目要少于轉(zhuǎn)錄生成m7G-RNA的基因數(shù)目。對(duì)大腸桿菌、酵母、小鼠和擬南芥中NAD-RNA生成基因的GO（gene ontology）分析結(jié)果顯示，這些基因編碼的蛋白主要涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄相關(guān)過(guò)程、蛋白翻譯及非生物脅迫響應(yīng)如冷、熱、旱、鹽、ABA、營(yíng)養(yǎng)缺失等［14-15，24-29］。

圖1 NAD-RNA的CuAAC（A）和SPAAC（B）反應(yīng)示意圖Fig. 1 Schematic diagram of CuAAC（A）and SPAAC（B）reactions of NAD-RNA

盡管NAD captureSeq為人們鑒定NAD-RNA提供了有力的技術(shù)保障，但其仍存在一些缺陷。首先，在捕獲NAD-RNA的CuAAC反應(yīng)中，二價(jià)銅離子（Cu2+）的存在會(huì)導(dǎo)致一定程度的RNA降解，從而引起鏈霉親和素磁珠富集的RNA片段呈現(xiàn)一定的5′端偏好，這不利于對(duì)NAD-RNA全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本序列信息的了解以及其轉(zhuǎn)錄水平的計(jì)算；此外，該方法存在一定程度的假陽(yáng)性，近期有研究表明CuAAC反應(yīng)對(duì)真核生物m7G-RNA亦存在微弱的轉(zhuǎn)化能力，導(dǎo)致捕獲到的RNA分子中存在一定量的m7G-RNA。為了克服上述問(wèn)題，Hu等［26］在2021年提出了SPAAC-NAD-seq，用以鑒定擬南芥中的NAD-RNA；該方法首先利用anti-m7G抗體特異去除擬南芥mRNA中的m7G-RNA，然后通過(guò)不依賴Cu2+的應(yīng)變促進(jìn)的炔疊氮化物環(huán)加成（strainpromoted azide-alkyne cycloaddition，SPAAC）反 應(yīng)體系（圖1-B），捕獲NAD-RNA并進(jìn)行二代測(cè)序分析。與NAD caputureSeq相比，SPAAC-NAD-seq避免了m7G-RNA和Cu2+的干擾，因此大大提高了NAD-RNA鑒定的準(zhǔn)確性和靈敏度。除此以外，Zhang等［28-31］在2019年和2021年先后利用CuAAC和SPAAC反應(yīng)處理擬南芥和大腸桿菌RNA樣本，然后在NAD-RNA的5′端連接一段合成的RNA標(biāo)簽（tagRNA）作為接頭（adaptor），進(jìn)一步富集含接頭的NAD-RNA并通過(guò)Oxford Nanopore sequencing三代測(cè)序完成對(duì)NAD-RNA轉(zhuǎn)錄本信息的鑒定。相比NAD caputureSeq和SPAAC-NAD-seq，該策略省去了傳統(tǒng)illumina測(cè)序中的RNA片段化、cDNA合成、PCR擴(kuò)增和片段篩選步驟，進(jìn)一步簡(jiǎn)化了NADRNA測(cè)序流程。以上全基因組水平的測(cè)序研究結(jié)果均表明，NAD+加帽修飾主要發(fā)生于部分編碼蛋白的mRNA和部分具有特異調(diào)控功能的sRNA，其中真核生物中NAD+-mRNA主要來(lái)源于核基因，少數(shù)來(lái)源于線粒體基因，并為研究其具體的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。

2 NAD+帽子對(duì)RNA轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的影響

已有研究結(jié)果表明，真核生物中NAD+修飾的基因大多亦可被m7G加帽［14，23］。NAD+帽子是否和m7G一樣，能夠保護(hù)RNA不被降解、招募相關(guān)蛋白參與RNA內(nèi)含子剪切、poly（A）加尾、出核和完成蛋白翻譯等生物學(xué)過(guò)程呢？大腸桿菌中的研究結(jié)果表明，NAD-RNA可以抵抗RNA焦磷酸水解酶（RNA-pyrophosphohydrolase，RppH）對(duì)其5′端的加工，進(jìn)而避免被核糖核酸酶E（ribonuclease E，RNase E）降解［15］；此外，原核生物B.subtilis的NAD+加帽修飾也具有穩(wěn)定RNA的作用，可防止RNase J1介導(dǎo)的5′端到3′端降解的發(fā)生［22］。不同于上述原核生物，真核生物中廣泛存在一類具有脫帽功能的酶DXO蛋白，可以去除哺乳動(dòng)物和擬南芥體內(nèi)RNA的NAD+帽子，產(chǎn)生不穩(wěn)定的5′單磷酸RNA（pRNA），并進(jìn)一步催化將其降解，最終影響體內(nèi)NAD-RNA的水平［23，27］，這表明原核和真核生物中RNA的NAD+加帽修飾可能具有不同的生物學(xué)意義。

高通量測(cè)序如RNA-seq、翻譯組測(cè)序（ribosome profiling）等是研究RNA修飾的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等生物學(xué)過(guò)程的重要手段［7，32］。目前，部分研究小組已經(jīng)開展了人源細(xì)胞HEK293T和擬南芥NAD+加帽修飾對(duì)mRNA加工和翻譯影響的初步研究工作，結(jié)果顯示NAD-RNA可順利完成內(nèi)含子剪切和poly（A）加尾過(guò)程［14，23，26，29］；同時(shí)，進(jìn)一步檢測(cè)到擬南芥的內(nèi)源NAD-RNA富集于多聚核糖體，暗示了NADRNA可能具有蛋白編碼的功能［14］。但是也有不同的研究結(jié)果被報(bào)道。在2017年，有研究人員將NAD+加帽和poly（A）加尾修飾的熒光素酶基因mRNA導(dǎo)入人源細(xì)胞HEK293T中，檢測(cè)熒光素酶含量，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照并無(wú)顯著差異，推測(cè)外源NAD+-mRNA在HEK293T細(xì)胞不具備蛋白翻譯的功能［23，33］。因此，關(guān)于體內(nèi)NAD-RNA是否具有蛋白編碼的能力、是否可以向胞質(zhì)運(yùn)輸以及原核生物和真核生物NADRNA轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的異同等仍有待深入研究。

3 RNA的NAD+加帽和脫帽分子機(jī)制初探

真核生物中基因轉(zhuǎn)錄成NAD -RNA的含量約占相應(yīng)轉(zhuǎn)錄本總含量的1%-6%［14，23，24，33］，且體內(nèi)NAD-RNA總含量也遠(yuǎn)低于m7G-RNA的占比［13］。NAD+加帽和脫帽反應(yīng)的效率直接決定NAD-RNA的含量。不同于m7G-RNA的轉(zhuǎn)錄起始后加帽［34-37］，RNA的NAD+加帽反應(yīng)可能存在兩種模式，即轉(zhuǎn)錄起始和轉(zhuǎn)錄后加帽［33］。（1）轉(zhuǎn)錄起始加帽：在體外條件下或細(xì)菌體內(nèi)，NAD+可作為一種稀有的起始核苷酸（non-canonical initiating nucleotide，NCIN）在細(xì)菌RNA聚合酶（RNA polymerase，RNAP）或真核生物RNAP II作用下，替代ATP作為首位堿基轉(zhuǎn)錄形成NAD-RNA［22，38-39］；相比細(xì)胞核RNAP，真核生物酵母和人的線粒體RNAP（mitochondrial RNAP，mtRNAP）可更加高效地利用NAD+合成NAD-RNA。此外，NAD+加帽的效率也受轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（transcription start site，TSS）序列（+1A）、TSS上游序列（-1R）以及細(xì)胞內(nèi)的NAD+含量等因素影響［38，40］。利用CapZyme-Seq技術(shù)，研究人員分析了E. coli中約16 000個(gè)NAD-RNA基因啟動(dòng)子序列，發(fā)現(xiàn)決定NAD+加帽的啟動(dòng)子的特征序列為H-3R-2R-1A+1S+2W+3W+4，其 中A+1為TSS［41］。（2）轉(zhuǎn)錄后加帽：哺乳動(dòng)物snoRNA（small nucleolar RNA）和 scaRNA（small cajal body RNA）是大多來(lái)源于基因內(nèi)含子的非編碼小RNA［42-44］，Jiao等［23］研究發(fā)現(xiàn)被核酸外切酶加工過(guò)的sno / scaRNA 5′端可被NAD+修飾，暗示哺乳動(dòng)物體內(nèi)可能存在轉(zhuǎn)錄起始后的加帽反應(yīng)。

除了加帽效率，生物體內(nèi)脫帽反應(yīng)也是影響NAD-RNA含量的重要因素。DXO蛋白家族是一類可以清除真核生物體內(nèi)異常帽子修飾RNA的酶［45］，如前所述，也具有清除NAD-RNA的功能。DXO的NAD+脫帽活性最早在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中被檢測(cè)到，可去除體內(nèi)部分NAD-RNA中的NAD+帽子并進(jìn)一步催化降解pRNA［23］，模式植物擬南芥的DXO1蛋白也具有相似的功能［27］；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)擬南芥DXO1功能缺失時(shí)，體內(nèi)的NAD-RNA可被加工成小RNA［27］，暗示NAD-RNA在特定條件下可能通過(guò)小RNA介導(dǎo)的表觀調(diào)控機(jī)制發(fā)揮作用，因此增加了NAD-RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性。Nudix（nucleoside diphosphate linked to another moiety X）是另一類只具有脫帽活性的水解酶蛋白家族，E. coli的Nudix家族成員RppH可以催化三磷酸RNA（pppRNA）生成pRNA，進(jìn)而由RNase E從5′端起始將其降解［10，46］；哺乳動(dòng)物Nudix家族成員Dcp2、Nudt3和Nudt16可催化體內(nèi)m7G-RNA的脫帽反應(yīng)，而Nudt2、Nudt12、Nudt15、Nudt17和Nudt19則 具有體外去m7G帽子的活性［47］。最近的研究結(jié)果表明，Nudix也參與了NAD-RNA的脫帽過(guò)程，但不同于DXO蛋白，它在NAD+的煙酰胺和腺嘌呤之間發(fā)生酶解反應(yīng)，并依賴于核糖核酸酶進(jìn)一步降解脫帽的pRNA，例如，NudC和RppH可分別催化E. coli和B. subtilis體內(nèi)NAD-RNA的脫帽反應(yīng)，生成NMN（nicotinamide mononucleotide）和pRNA［15，22］；小鼠Nudt12靶向與DXO不同的NAD-RNA，主要參與編碼線粒體蛋白的核基因mRNA的NAD+脫帽反應(yīng)［25］；對(duì)哺乳動(dòng)物22個(gè)Nudix成員的脫帽活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)除上述Nudt12外，Nudt16也具有去除RNA 5′端NAD+帽子的功能［48］。此外，真核生物糖基水解酶CD38可在體外反應(yīng)條件下將NAD-RNA分解為成ADP-RNA和煙酰胺，暗示其可能是一類新的NADRNA脫帽酶［49］。然而，目前關(guān)于生物體內(nèi)NADRNA加帽和脫帽等代謝過(guò)程以及調(diào)控途徑的研究仍處于起步階段，有待于在今后的研究中進(jìn)一步挖掘解析。

4 NAD-RNA與生長(zhǎng)發(fā)育和環(huán)境脅迫

生物體內(nèi)NAD-RNA的豐度和種類與生長(zhǎng)發(fā)育階段和環(huán)境因素密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，E. coli指數(shù)和穩(wěn)定生長(zhǎng)期NAD+加帽修飾的RNA有較大差異，除了兩個(gè)時(shí)期共有的79個(gè)基因外，另有50個(gè)指數(shù)生長(zhǎng)期特異表達(dá)的NAD-RNA基因以及150個(gè)穩(wěn)定生長(zhǎng)期特異表達(dá)的NAD-RNA基因［28］；擬南芥幼苗和花中NAD-RNA的豐度以及可轉(zhuǎn)錄生成NAD-RNA的基因亦存在一定的差異［14］，這些結(jié)果暗示基因的NAD+加帽修飾可能具有一定的時(shí)空表達(dá)特異性。與YEPD（yeast extract peptone dextrose）培養(yǎng)基相比，生長(zhǎng)在合成培養(yǎng)基上的酵母體內(nèi)NAD+-mRNA基因種類更多［24］；將人源HEK293T和包皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行熱激（42℃）處理或置于葡萄糖缺失的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，NAD-RNA的含量均顯著提高［25］；擬南芥幼苗NAD-RNA可響應(yīng)脫落酸（abscisic acid，ABA）處理，并且多數(shù)響應(yīng)ABA的NAD-RNA的脫帽過(guò)程不依賴DXO1［27］；對(duì)可轉(zhuǎn)錄成NAD-RNA的基因進(jìn)行GO分析，它們部分富集于非生物脅迫相關(guān)的路徑［14，15，24，26-29］，以上結(jié)果表明NAD-RNA的合成與代謝過(guò)程與外界環(huán)境因素也密切相關(guān)，這可能與NAD+的輔酶特性有關(guān)。

5 總結(jié)與展望

借助于LC-MS和NAD captureSeq等技術(shù)，人們發(fā)現(xiàn)了RNA 5′端的NAD+加帽這一新的修飾類型。NAD+作為一種輔酶，在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中可替代ATP作為起始?jí)A基、通過(guò)RNAP/RNAP II的催化生成NADRNA，并進(jìn)一步完成內(nèi)含子剪切、poly（A）加尾等轉(zhuǎn)錄后加工過(guò)程。不同于經(jīng)典的真核生物m7G帽子，NAD+加帽修飾在原核和真核生物RNA上均可檢測(cè)到，并且該修飾對(duì)RNA在原核和真核生物中穩(wěn)定性的影響存在差異；同時(shí)，真核生物中NAD-RNA的占比遠(yuǎn)低于m7G-RNA。基于此，我們推測(cè)NADRNA的起源進(jìn)化可能要早于m7G-RNA，早期在原核生物中NAD+加帽具有保護(hù)RNA不被降解、維持其穩(wěn)定性的作用；但隨著生物的進(jìn)化，NAD-RNA可能發(fā)生了功能分化，被真核生物識(shí)別為異常RNA，進(jìn)而被DXO等脫帽酶脫帽并進(jìn)一步降解，與此同時(shí)真核生物RNA被特有的m7G帽子所保護(hù)而不被降解并完成后續(xù)一系列的轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后和翻譯等過(guò)程，逐漸替代NAD-RNA占主導(dǎo)地位。

后續(xù)可從以下幾個(gè)方面進(jìn)行研究，來(lái)驗(yàn)證上述猜測(cè)：（1）開展關(guān)于NAD-RNA和m7G-RNA代謝通路重要基因的進(jìn)化分析；（2）鑒定與NAD+加帽、脫帽、識(shí)別等過(guò)程相關(guān)的基因，并通過(guò)這些基因的功能研究解析NAD-RNA的變化對(duì)生物體的影響；（3）NAD-mRNA能否完成正常的蛋白翻譯過(guò)程，與m7G-RNA一樣以蛋白形式發(fā)揮功能？或者直接以RNA形式作為調(diào)控因子發(fā)揮功能？（4）NAD+修飾的非編碼RNA是否具有調(diào)控功能？

除了NAD-RNA，近年來(lái)在生物體內(nèi)還檢測(cè)到了許多其他類型加帽修飾的RNA，比如dpCoA-RNA、FAD-RNA、UDP-Glc-RNA和UDP-GlcNAc-RNA等，它們?cè)隗w內(nèi)的含量也遠(yuǎn)低于m7G-RNA［13］。然而，這些RNA序列信息以及與NAD-RNA、m7G-RNA是否存在著關(guān)聯(lián)仍然未知。相信隨著后續(xù)相關(guān)分析技術(shù)的突破，將會(huì)促進(jìn)該領(lǐng)域相關(guān)研究工作的開展，進(jìn)一步拓展和豐富RNA生物學(xué)基礎(chǔ)理論知識(shí)。