miR-125b-5p和miR-196a-5p在胃癌根治術(shù)后患者血清中的表達(dá)水平及其與臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系

郭慧敏 張 磊 王麗紅

目前，胃癌作為消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，在我國(guó)癌癥死亡率排第三位[1]。目前胃癌的治療手段主要以手術(shù)為主，化療或放療等方法輔助治療[2]。盡管目前胃癌根治術(shù)是臨床治療的首選，但是患者的生存率依然不高，5年內(nèi)只有50%的患者能夠生存[3]。因此，尋找有效的預(yù)后生物標(biāo)志物，探索其與臨床病理的關(guān)系，可能有助于減少胃癌根治術(shù)后患者的死亡率。微小RNA(miRNA)是一種非編碼的小RNA，可以參與細(xì)胞的增殖、分化等過程，在細(xì)胞生物學(xué)中起到了重要作用[4]。MiRNA作為非侵入性標(biāo)志物，在癌癥的診斷、預(yù)測(cè)等方面也存在一定的優(yōu)勢(shì)[5-6]。已有研究發(fā)現(xiàn)，miR-125b-5p和miR-196a-5p在胃癌患者中均出現(xiàn)表達(dá)失調(diào)[7]，但具體機(jī)制尚不清楚。因此，本文選取血清miR-125b-5p和miR-196a-5p在胃癌根治術(shù)后的患者中的表達(dá)水平作為研究對(duì)象，探討其與臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2017年6月至2018年6月于本院收治的胃癌根治術(shù)后患者169例，年齡29～78歲，平均(59.21±9.21)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《胃癌規(guī)范化診療指南(試行)》[8]中關(guān)于胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者經(jīng)病理檢測(cè)確診為胃癌；②患者均已行胃癌根治術(shù)，且術(shù)前未行化療、放療等治療；③患者的臨床資料及術(shù)后病理資料完整且詳細(xì)；④患者及家屬已簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并出現(xiàn)其他器官功能衰竭；②合并其他惡性腫瘤；③已接受過胃外科手術(shù)患者；④隨訪期間與患者的聯(lián)系中斷。本研究已通過醫(yī)院倫理委員會(huì)通過。

1.2 qPCR檢測(cè)血清 miR-125b-5p和miR-196a-5p水平

采集研究對(duì)象空腹時(shí)外周血3 mL于抗凝管，并于-20 ℃保存待檢。采用RNA提取試劑盒(購(gòu)自蘇州金維智生物有限公司)，按照說明書步驟提取RNA，并使用ABI 7500型熒光定量PCR儀對(duì)其進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)。PCR擴(kuò)增條件為：95 ℃預(yù)變性 10 min，95 ℃ 變性 15 s，60 ℃ 復(fù)性60 s，以上步驟重復(fù) 40個(gè)循環(huán)。使用2-ΔΔCt方法對(duì)miR-125b-5p和miR-196a-5p的相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行計(jì)算。引物送上海生工生物有限公司合成，引物如下：miR-125b-5p：F:5'-CACTCCAGCT-GGGTCCCTGAGACCCTAACT-3'，R:5'-CTCAACTG-GTGTGGTGGA-3'；miR-196a-5p：F:5'-UAGGUAGUUUCAUGUUGUUGGG-3'，R:5'-CCCAACAACAUGAAACUACCUA-3'。

1.3 收集臨床及隨訪資料

收集研究對(duì)象的臨床及病理資料，包括年齡、性別、腫瘤部位、TNM分期(參照AJCC/UICC第7版[9])、浸潤(rùn)深度等具體情況。采用電話等方式對(duì)術(shù)后患者進(jìn)行隨訪，共2年，每三個(gè)月一次，截止時(shí)間為2020年6月20日。觀察患者的生存率，根據(jù)患者是否生存分為生存組(n=80)以及死亡組(n=89)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平與胃癌根治術(shù)后患者的臨床病理資料的關(guān)系

根據(jù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平與年齡、腫瘤部位、組織學(xué)類型、脈管侵潤(rùn)、浸潤(rùn)深度無關(guān)(P均>0.05)，與TNM分期有關(guān)(P均<0.05)，即TNM分期Ⅲ期患者血清miR-125b-5p和miR-196a-5p表達(dá)水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，見表1。

表1 血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平與胃癌根治術(shù)后患者的臨床病理資料的關(guān)系

2.2 血清miR-125b-5p和miR-196a-5p在生存組與死亡組中的表達(dá)水平比較分析

血清miR-125b-5p和miR-196a-5p在死亡組的表達(dá)水平明顯高于生存組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表2。

表2 MiR-125b-5p和miR-196a-5p水平與預(yù)后的關(guān)系

2.3 血清miR-125b-5p和miR-196a-5p表達(dá)水平對(duì)胃癌根治術(shù)后患者的預(yù)后價(jià)值分析

根據(jù)ROC曲線分析可知，血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平評(píng)估胃癌預(yù)后AUC分別為0.708，0.769，聯(lián)合檢測(cè)AUC為0.823，見表3及圖1。

圖1 MiR-125b-5p和miR-196a-5p對(duì)胃癌根治術(shù)后患者的預(yù)后價(jià)值ROC曲線

表3 MiR-125b-5p和miR-196a-5p水平對(duì)胃癌根治術(shù)患者的預(yù)后價(jià)值

2.4 相關(guān)性分析

根據(jù)Spearman相關(guān)性分析法得出，血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平存在相關(guān)性，呈正相關(guān)(γ=0.213，P<0.05)。

3 討論

胃癌是常見的惡性腫瘤，手術(shù)是目前首選治療方法，但依然存在復(fù)發(fā)率高、預(yù)后差等風(fēng)險(xiǎn)，有研究統(tǒng)計(jì)胃癌根治術(shù)后患者5年內(nèi)生存率僅占50% ，雖然術(shù)后的化放療以及分子靶向治療等策略在一定程度上改善了患者的預(yù)后情況，但效果依然不佳[9-10]。因此，在臨床上尋找針對(duì)胃癌根治術(shù)患者預(yù)后相關(guān)的有效的生物標(biāo)志物至關(guān)重要。

MiRNA作為非編碼小RNA，一般由20到25個(gè)核苷酸組成，參與細(xì)胞的增殖分化等過程[11]，由于其作為生物標(biāo)志物時(shí)的高敏感性和非侵入性等優(yōu)勢(shì)成為了多種疾病的優(yōu)先研究對(duì)象[12]。目前已有研究證實(shí)，miRNA在很多癌癥的診斷、預(yù)后預(yù)測(cè)方面都起到了重要作用，比如外周血miRNA-6水平被用于診斷食管癌，miRNA-4水平可用于診斷胃癌[13-14]。目前已有研究發(fā)現(xiàn)血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平在胃癌患者中表達(dá)異常，出現(xiàn)上調(diào)的現(xiàn)象，有作為可診斷胃癌的生物標(biāo)志物的潛力[15]。本研究發(fā)現(xiàn)血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平與胃癌TNM分期有關(guān)，TNM分期Ⅲ期患者血清miR-125b-5p和miR-196a-5p表達(dá)水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期。有研究已證實(shí)TNM分期與胃癌的復(fù)發(fā)時(shí)間有關(guān)，可影響患者的預(yù)后情況[16]。因此，這可以說明血清miR-125b-5p和miR-196a-5p表達(dá)水平與胃癌根治術(shù)后患者的預(yù)后有關(guān)，結(jié)合本研究，血清miR-125b-5p和miR-196a-5p在死亡組的表達(dá)水平明顯高于生存組，進(jìn)一步說明了血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平與胃癌根治術(shù)后的預(yù)后有關(guān)。本研究還根據(jù)ROC曲線分析得出，血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平評(píng)估胃癌根治術(shù)后預(yù)后AUC分別為0.708、0.769，聯(lián)合檢測(cè)AUC為0.823，聯(lián)合檢測(cè)的線下面積最高，說明在選取胃癌的相關(guān)生物標(biāo)志物時(shí)，聯(lián)合檢測(cè)在對(duì)預(yù)后價(jià)值評(píng)估時(shí)具有一定的優(yōu)勢(shì)。

綜上，本研究證實(shí)了血清miR-125b-5p和miR-196a-5p水平與胃癌根治術(shù)患者的病理參數(shù)的關(guān)系以及對(duì)預(yù)后的價(jià)值評(píng)估。然而本研究由于樣本量少以及中心單一等不足可能對(duì)研究結(jié)果存在影響，需要更具前瞻性以及大規(guī)模的研究來進(jìn)一步完善。