IL-1α、EphA2蛋白在腦膜瘤及瘤周水腫組織中的表達(dá)及臨床意義

賀小霞 郭 林 魏麗紅

腦膜瘤作為常見的顱內(nèi)腫瘤，約占所有顱內(nèi)腫瘤類型的20%[1]。大約38%～67%的腦膜瘤表現(xiàn)出不同程度的瘤周水腫(PTBE)[2]。PTBE會(huì)影響顱內(nèi)腦膜瘤的外科手術(shù)治療，并且由于圍手術(shù)期顱內(nèi)壓升高，術(shù)后血腫和神經(jīng)功能缺損的風(fēng)險(xiǎn)增加而導(dǎo)致癲癇發(fā)病率升高[3-4]。因此尋找與PTBE發(fā)生機(jī)制相關(guān)的生物標(biāo)志物是目前的研究熱點(diǎn)。白介素-1α(IL-1α)是主要的警報(bào)蛋白細(xì)胞因子，可觸發(fā)并增強(qiáng)炎癥反應(yīng)[5]。而且越來(lái)越多的研究表明IL-1α參與了癌癥的發(fā)病機(jī)理，在不同類型的癌癥中均發(fā)揮抗腫瘤作用[6]。有研究發(fā)現(xiàn)Ephrin A型受體2(EphA2)的過(guò)表達(dá)與大多數(shù)癌癥的不良預(yù)后相關(guān)[7]。最近，還發(fā)現(xiàn)EphA2受體參與調(diào)節(jié)腫瘤血管生成[8]。但是關(guān)于PTBE與IL-1α、EphA2表達(dá)水平研究較少，相關(guān)機(jī)制尚不清楚。本文通過(guò)探討IL-1α、EphA2在腦膜瘤及瘤周水腫組織中的表達(dá)及臨床意義，旨在為腦膜瘤尋找生物標(biāo)志物進(jìn)一步研究提供研究基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象

選取2018年2月至2020年2月本院收治的腦膜瘤瘤周水腫患者52例。其中男性25例，女性27例，年齡24～71歲，平均(48.31±8.26)歲。①術(shù)前行頭部MRI懷疑腦膜瘤者；②首次在我院行腦膜瘤切除術(shù)；③術(shù)后病理證實(shí)為腦膜瘤[9]；④入組患者或家屬在同意知情書上簽字。 排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重頭部外傷史或其他器官功能障礙者；②合并其他器官或部位存在腫瘤者；③既往有顱內(nèi)腫瘤或其他類型腫瘤病史者。

1.2 樣本準(zhǔn)備

腫瘤組織標(biāo)本取近腫瘤邊緣處，瘤周水腫標(biāo)本取非功能區(qū)組織，生理鹽水清洗后，放入中性4%甲醛溶液固定24 h后石蠟包埋，切片厚4 μm，待檢。

1.3 免疫組化

首先二甲苯脫蠟，剃度乙醇水化后用PBS清洗，每次3 min，重復(fù)3次；將其置入檸檬酸修復(fù)液后在100 ℃ 下加壓修復(fù)2 min；滴加0.3%過(guò)氧化氫液50 μl，室溫孵育15 min，PBS清洗同上；甩干后滴加一抗(其中IL-1α抗體購(gòu)自上海艾博抗貿(mào)易有限公司，工作濃度：1∶50稀釋，EphA2 抗體購(gòu)于美國(guó) Santa Cruz生物技術(shù)公司，工作濃度：1∶300稀釋) 50 μl，4 ℃孵育過(guò)夜，PBS清洗同上；甩干后滴加50 μl二抗，靜置30 min，PBS清洗同上；甩干后滴加DAB顯色液50～100 μl；蒸餾水沖洗，用蘇木精復(fù)染，0.1%鹽酸乙醇分化，PBS再次沖洗返藍(lán)，經(jīng)梯度乙醇脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.4 結(jié)果判定

以IL-1α、EphA2 在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色染色定為陽(yáng)性。用半定量積分法，顯微鏡隨機(jī)選取5個(gè)400倍視野，取平均陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)，以100個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)進(jìn)行表達(dá)強(qiáng)度判定。陰性(-)：陽(yáng)性細(xì)胞<10 %，陽(yáng)性(+)：陽(yáng)性細(xì)胞≥10 %。

1.5 水腫指數(shù)

計(jì)算腫瘤及PTBE 體積[10]。腫瘤體積(VT)=腫瘤最大層面橫徑×直徑×最大高度/2；PTBE體積(VPTBE)=水腫最大層面橫徑×直徑×最大高度/2-腫瘤體積。公式EI=(VPTBE+ VT)/VT，PTBE程度：02為重度水腫。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 IL-1α和EphA2表達(dá)與腦膜瘤患者臨床資料的關(guān)系

IL-1α和EphA2表達(dá)與患者性別、年齡、飲酒、吸煙、腫瘤部位無(wú)相關(guān)性(P<0.05)，見表1。

表1 IL-1α和EphA2表達(dá)與腦膜瘤患者臨床資料的關(guān)系/例

2.2 IL-1α、EphA2在腦膜瘤組織、瘤周水腫組織中的表達(dá)

IL-1α、EphA2在腦膜瘤組織、瘤周水腫組織中的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中腦膜瘤組織IL-1α、EphA2陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于瘤周水腫組織(P<0.05)，結(jié)果見表2。

表2 IL-1α、EphA2在腦膜瘤組織、瘤周水腫組織中的表達(dá)(例，%)

2.3 IL-1α、EphA2在不同程度瘤周水腫組織中的表達(dá)

IL-1α、EphA2在不同程度瘤周水腫組織中陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)， IL-1α、EphA2在瘤周水腫中度以及重度中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于輕度水腫(P<0.05)， IL-1α、EphA2在瘤周水腫重度中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于中度水腫(P<0.05)，見表3。

表3 IL-1α、EphA2在不同程度瘤周水腫組織中的表達(dá)/例

3 討論

腦膜瘤是最常見的非神經(jīng)膠質(zhì)顱內(nèi)腫瘤，根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的分類，腦膜瘤分為三個(gè)組織學(xué)等級(jí)：良性，非典型性和惡性，腦膜瘤大多是良性腫瘤[11-12]。其中有40%～78%的腦膜瘤患者形成PTBE[13]。PTBE的形狀和大小各不相同，可能會(huì)比一般腫瘤大兩到三倍[14]。PTBE的發(fā)生主要與腦血管受壓迫有關(guān)，PTBE也會(huì)進(jìn)一步引起患者顱內(nèi)壓升高，甚至導(dǎo)致術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生[15-16]。PTBE的病理生理學(xué)主要包括如腫瘤大小，組織學(xué)分級(jí)，性激素受體表達(dá)，血管化和生長(zhǎng)因子的表達(dá)等方面[17]。目前有許多關(guān)于PTBE的發(fā)生與年齡、性別、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小、性激素表達(dá)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的相關(guān)性研究，但它們研究結(jié)果往往不一致[18]。

自1940年IL-1α被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，IL-1α的結(jié)構(gòu)和生物活性得到了廣泛研究，并已成為機(jī)體炎癥反應(yīng)和造血過(guò)程中的重要調(diào)節(jié)劑[19]。IL-1α被蛋白酶切割，以N末端和C末端的形式存在[20-21]。IL-1α是作為一種獨(dú)特的細(xì)胞因子，可以定位在細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞膜和細(xì)胞核上[22]。有越來(lái)越多的研究表明IL-1α在癌癥的發(fā)病機(jī)制中起到了重要作用，且在不同類型的癌癥中均發(fā)揮了抗腫瘤作用[23]。本研究發(fā)現(xiàn)腦膜瘤組織的IL-1α陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于瘤周水腫組織。IL-1α在瘤周水腫中度以及重度的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于輕度水腫，IL-1α在瘤周水腫重度的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于中度水腫，說(shuō)明IL-1α與腦膜瘤以及瘤周水腫具有一定的相關(guān)性，與目前關(guān)于IL-1α與癌癥方面的研究具有一致性。

EphA2的過(guò)表達(dá)與大多數(shù)癌癥相關(guān)，包括乳腺癌，卵巢癌和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤等[24]，這些腫瘤的發(fā)生發(fā)展均與血管生成的有關(guān)，其中EphA2受體也在調(diào)節(jié)腫瘤血管生成的過(guò)程中起作用[25]。在腦腫瘤中，如間變性星形細(xì)胞瘤和膠質(zhì)細(xì)胞瘤，主要是在晚期腫瘤中檢測(cè)到EphA2的高表達(dá)[26]。EphA2蛋白在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)失調(diào)可以促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲[27]。本研究發(fā)現(xiàn)腦膜瘤組織中EphA2陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于瘤周水腫組織。EphA2在瘤周水腫組織中中度以及重度的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于輕度水腫， EphA2在瘤周水腫組織中重度的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于中度水腫，說(shuō)明 EphA2過(guò)表達(dá)與腦膜瘤相關(guān)，這與目前的研究結(jié)果一致，還說(shuō)明了EphA2也與瘤周水腫程度相關(guān)，為未來(lái)研究瘤周水腫的危險(xiǎn)因素提供了新思路。

綜上，本研究表明IL-1α 、EphA2水平在腦膜瘤患者中的表達(dá)及與臨床價(jià)值的關(guān)系，對(duì)未來(lái)關(guān)于腦膜瘤患者的研究提供了一定的數(shù)據(jù)參考。但是本研究有一定缺陷，比如缺少大量的樣本數(shù)據(jù)以及中心單一，還需要進(jìn)一步的研究完善。