上皮性卵巢癌組織中EGFR、EGFR mRNA、LRP和LRP mRNA表達(dá)水平及其臨床意義

劉勻慧 李代紅 程光卉

卵巢癌晚期患者的5年生存率約為30%，患者的晚期生存率與化療耐藥情況以及腫瘤的血管生成情況有著較為密切的聯(lián)系[1]。EGFR屬于一種在膜表面的傳感器，具有一定的酪氨酸激酶活性，在多種人體惡性腫瘤中有表達(dá)情況較高，與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展有著一定的聯(lián)系[2-3]。 LRP是近年來(lái)臨床發(fā)現(xiàn)的能導(dǎo)致鉑類等化療藥物出現(xiàn)耐藥情況的一種多重耐藥(multidrugresistance,MDR)蛋白，能夠有效對(duì)卵巢癌患者身體的化療敏感行進(jìn)行預(yù)測(cè)，屬于一種獨(dú)立預(yù)后的相關(guān)因素[4-5]。本次我院就上皮性卵巢癌EGFR、EGFR mRNA、LRP和LRP mRNA表達(dá)水平及臨床意義進(jìn)行研究。具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年8月至2020年8月在我院婦科經(jīng)過(guò)手術(shù)治療且確證為上皮性卵巢癌的98例患者進(jìn)行研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：①原發(fā)性上皮性卵巢癌者；②自愿簽署研究知情同意書者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不能有效配合研究的患者；②手術(shù)禁忌癥者；③認(rèn)知功能或精神異常者；④合并有心肝肺等重要臟器疾病者；⑤對(duì)麻醉藥物過(guò)敏或手術(shù)不耐受者?；颊吣挲g23～75歲，平均年齡(50.53±16.87)歲。其中75例為漿液性腺癌，12例為粘液性腺癌，7例為子宮內(nèi)膜樣腺癌，2例為透明細(xì)胞癌，2例為惡性Brenner瘤。FIGO手術(shù)病理分期：35例為Ⅰ～Ⅱ期，63例為Ⅲ～Ⅳ期。根據(jù)WHO分級(jí)：6例為高分化，12例為中分化，80例為低分化。術(shù)前所有患者均未進(jìn)行過(guò)放化療。另選擇取同期在我院接受體檢為健康人群的30為女性作為對(duì)照組；年齡21～74歲，平均年齡(49.65±14.87)歲。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 總RNA提取液、RT-PCR試劑盒均由大連寶生物工程公司。通過(guò)Genbank對(duì)EGFR、LRP的基因序列進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)PCGENE軟件對(duì)引物進(jìn)行設(shè)計(jì)。EGFRmRNA上游引物：5'-AACACAGTGGAGCGAATTCCTTT-3'，下游引物：5'-GGAAGTCCATCGACATGTTGCT-3'，擴(kuò)增片斷：262 bp。LRPmRNA上游引物：5'-CACAACTACT-GCGTGATTCTCGAC-3'，下游引物：5'-TGCTCCGACAGCACAT-ACACA-3'，擴(kuò)增片斷152 bp。引物通過(guò)上海生工生物工程公司合成。

1.2.2 總RNA提取 按大連寶生物工程公司的RNA抽提方法對(duì)組織總RNA進(jìn)行提取。通過(guò)經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳法對(duì)提取的RNA完整性進(jìn)行鑒定，通過(guò)紫外分光光度計(jì)對(duì)260 nm與280 nm吸光度值進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)RNA的濃度與純度進(jìn)行計(jì)算。

1.2.3 逆轉(zhuǎn)錄的反應(yīng) 嚴(yán)格按試劑說(shuō)明操作術(shù)進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組EGFR、LRP的表達(dá)情況比較

研究組EGFR、LRP陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表 1。

表1 兩組EGFR、LRP表達(dá)情況比較(例，%)

2.2 研究組EGFR、LRP表達(dá)情況與其臨床病理特征的關(guān)系

研究組不同年齡、不同組織學(xué)分型、不同細(xì)胞學(xué)分級(jí)、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者EGFR mRNA表達(dá)情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Ⅲ～Ⅳ期患者EGFR陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究組不同年齡、不同組織學(xué)分型、不同細(xì)胞學(xué)分級(jí)、不同病理分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者LRP mRNA表達(dá)情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 研究組EGFR、LRP表達(dá)水平與其臨床病理特征的關(guān)系

2.3 EGFR mRNA、LRP mRNA表達(dá)與卵巢癌患者化療療效的關(guān)系

在完成3個(gè)療程后評(píng)定所有患者的化療療效，其中70例患者化療有效，28例患者化療無(wú)效。分析結(jié)果指出，化療有效組EGFR、LRP mRNA表達(dá)水平為(0.80±0.27,0.83±0.29)，明顯低于化療無(wú)效組(1.10±0.21,1.04±0.20),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 EGFR、LRP表達(dá)間的相互關(guān)系

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，EGFR與LRPmRNA表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.751,P<0.01)。

3 討論

EGFR屬于Ⅰ型受體酪氨酸蛋白激酶(RTK)，是C-erbB-1原癌基因的最終表達(dá)產(chǎn)物，在表皮細(xì)胞的遷移、增殖、生存、侵襲中均有較為重要的作用[6]。過(guò)度的EGFR表達(dá)，會(huì)導(dǎo)致分裂增殖信號(hào)持續(xù)傳遞到細(xì)胞內(nèi)，對(duì)細(xì)胞分化的正常狀態(tài)產(chǎn)生干擾，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)異常增殖的情況，出現(xiàn)惡性病變。相關(guān)研究結(jié)果顯示，肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、腦膠質(zhì)瘤等惡性腫瘤患者疾病的發(fā)生與發(fā)展均會(huì)在一定程度出現(xiàn)EGFR高表達(dá)的情況，EGFR的表達(dá)情況與并病情進(jìn)展、身體對(duì)放化的療敏感性以及患者的預(yù)后情況均有著較為密切的聯(lián)系[7-10]。有學(xué)者的研究指出，卵巢癌患者的EGFR處于一個(gè)高表達(dá)狀態(tài)，惡性卵巢腫瘤患者的EGFR表達(dá)情況也明顯高于良性腫瘤患者[11]。

本次研究結(jié)果指出，EGFR在惡性卵巢腫瘤患者的組中的陽(yáng)性表達(dá)率與健康人群相比明顯升高，由此可知EGFR的表達(dá)在卵巢腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中可能有一定的作用；而且隨著臨床期別的提高，EGFR的表達(dá)情況出現(xiàn)逐漸增強(qiáng)，在Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌患者組織中的表達(dá)強(qiáng)度與陽(yáng)性表達(dá)率與Ⅰ～Ⅱ期患者相比明顯升高，由此可知EGFR與卵巢腫瘤的發(fā)展有密切關(guān)系，能夠作為臨床對(duì)惡性卵巢腫瘤病變情況進(jìn)行判斷的有效指標(biāo)，出現(xiàn)EGFR表達(dá)陽(yáng)性的患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞可能具有較強(qiáng)的侵襲性與轉(zhuǎn)移力。EGFR能夠有效對(duì)體內(nèi)因子的水平進(jìn)行調(diào)節(jié)，還會(huì)對(duì)腫瘤血管的生成產(chǎn)生影響。在細(xì)胞存活、增殖、轉(zhuǎn)移、黏附有較為重要的作用。

LRP是一種新發(fā)現(xiàn)的能夠引起腫瘤產(chǎn)生多藥耐藥(MDR)現(xiàn)象的蛋白質(zhì)，對(duì)腫瘤細(xì)胞與烷化劑、鉑類等化療藥物的耐藥情況有介導(dǎo)作用[12-13]。有研究指出，LRP對(duì)卵巢癌化療療效有一定的預(yù)測(cè)作用，且屬于有效研究患者預(yù)后情況的獨(dú)立標(biāo)記指標(biāo)[14-15]。本次研究結(jié)果指出， LRP在卵巢上皮性癌患者中的表達(dá)情況較為恒定，且與正常對(duì)照組相比明顯，由此可知LRP的表達(dá)可能與卵巢細(xì)胞的惡性癌變以及轉(zhuǎn)化有密切的關(guān)系。EGFR的表達(dá)情況與化療藥物的耐藥關(guān)系的研究指出，順鉑、阿霉素、VP-16等作為DNA化療的常用藥物在對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的同時(shí)，能夠有效提高細(xì)胞的EGFR蛋白表達(dá)情況，在化療后效果不佳或出現(xiàn)復(fù)發(fā)的患者EGFR水平與化療效果較好的患者相比明顯升高。EGFR陽(yáng)性表達(dá)的腫瘤細(xì)胞的侵襲性與轉(zhuǎn)移力均較強(qiáng)，且對(duì)放化療不敏感。卵巢腫瘤細(xì)胞中EGFR的過(guò)表達(dá)也能夠提示腫瘤細(xì)胞具有一定程度的耐藥性，但是選擇RTK抑制劑的使用能有效提高EGFR高表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療的敏感性。本次研究結(jié)果指出，EGFR mRNA與 LRPmRNA之間有著高度的相關(guān)性(γ=0.751,P<0.01)，由此可知提示EGFR基因的表達(dá)情況與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的耐藥性之間有著某種內(nèi)在聯(lián)系，這可能是由于EGFR基因會(huì)參與到LRP基因的翻譯與轉(zhuǎn)錄中，能夠有效提高LRP的表達(dá)情況。

綜上所述，對(duì)卵巢上皮性癌中中EGFR、EGFR mRNA、LRP和LRP mRNA表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)對(duì)于化療反應(yīng)的預(yù)測(cè)有著較為重要的意義，通過(guò)早期對(duì)耐藥的患者進(jìn)行識(shí)別，可以有效幫助醫(yī)生對(duì)臨床個(gè)體化的治療方案進(jìn)行選擇。