上皮性卵巢癌組織中XIAP、HIF-1a表達(dá)及臨床意義

朱麗娟 王愛(ài)華 段曉艷 李 淵

在我國(guó)，上皮性卵巢癌發(fā)病率非常高，是女性生殖系統(tǒng)腫瘤最常見(jiàn)的卵巢癌類(lèi)型，其死亡率最高，5年生存率非常低，不足20%[1]。在患病早期，由于其缺乏高特異性的腫瘤標(biāo)志物和早期診斷的特異性臨床癥狀，故難以發(fā)現(xiàn)或診斷。目前，對(duì)于該病的發(fā)病機(jī)制各種理論并不統(tǒng)一，但都認(rèn)為可以從分子或基因水平研究細(xì)胞周期的相關(guān)調(diào)控機(jī)制對(duì)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程的作用。X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白(X-linked apoptotic suppressor proteins,XIAP)對(duì)內(nèi)源性天冬氨酸蛋白酶具有較強(qiáng)的抑制性，并具有明顯的特征性。文獻(xiàn)[2]提示XIAP可在乳腺癌、甲狀腺癌、肺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程發(fā)揮作用，并與化療耐藥具有密切關(guān)系。相關(guān)的研究指出[3]在缺氧的微環(huán)境下，惡性腫瘤是通過(guò)乏氧誘導(dǎo)因子-1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)來(lái)改善腫瘤內(nèi)細(xì)胞代謝的，同時(shí)還能夠促進(jìn)腫瘤內(nèi)部新的血管的生成，進(jìn)而對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)具有加速作用，其中HIF-1a是HIF-1最重要的亞型單位之一。本研究探討了上皮性卵巢癌組織中XIAP、HIF-1a表達(dá)及臨床意義，旨在為卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制提供新的思路，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院在2017年1月至2020年2月期間保存的上皮性卵巢癌標(biāo)本92例作為研究對(duì)象，均經(jīng)病理學(xué)確診且術(shù)前未接受過(guò)放療、化療等抗腫瘤的治療，所有臨床病理資料保存完整。排除合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤、合并有免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病、急慢性感染者等等。同時(shí)選取良性卵巢腫瘤60例(34例黏液性囊腺瘤、26例漿液性囊腺瘤)，正常卵巢44例(因?qū)m頸癌或內(nèi)膜癌手術(shù)切除的，經(jīng)病理證實(shí)為正常卵巢組織)作為對(duì)照，各組在一般資料上進(jìn)行比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組一般資料比較(例，%)

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

本次研究采用免疫組化染色法對(duì)XIAP、HIF-1a表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，具體操作：將上皮性卵巢癌標(biāo)本組織用甲醛固定后，采用石蠟包埋，并行常規(guī)連續(xù)切片后烤片，然后采用二甲苯及梯度乙醇脫蠟至水化并3次PBS沖洗；EDTA修復(fù)抗原；3%過(guò)氧化氫孵育10 min封閉過(guò)氧化物酶， 3次PBS沖洗；滴加山羊血清溫育30 min，分別滴加X(jué)IAP、HIF-1a二抗，室溫2 h孵育；PBS沖洗后滴加生物素標(biāo)記的二抗，溫育30 min，PBS沖洗，DAB溶液顯色；蘇木精復(fù)染；封片觀察[4]。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

XIAP在細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核均有表達(dá)，表現(xiàn)為淡藍(lán)色背景下棕褐色染色團(tuán)塊或顆粒；HIF-1a主要在細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，表現(xiàn)為淡藍(lán)色背景下棕褐色染色顆?；驁F(tuán)塊。染色結(jié)果評(píng)價(jià)采用半定量評(píng)分，染色范圍為：0分為陽(yáng)性細(xì)胞比例≤5%，1分為陽(yáng)性細(xì)胞比例范圍>5%～25%，2分為陽(yáng)性細(xì)胞比例范圍>25%～50%，3分為陽(yáng)性細(xì)胞比例范圍>50%～75%，4分為陽(yáng)性細(xì)胞比例范圍>75%；染色強(qiáng)度為：0分無(wú)著色，1分黃色，2分棕黃色，3分棕褐色。陽(yáng)性表達(dá)為染色范圍和染色強(qiáng)度得分之積≥4分[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究涉及的數(shù)據(jù)采用SPSS22.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其中計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，當(dāng)P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組織XIAP、HIF-1a表達(dá)比較

上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a陽(yáng)性表達(dá)率分別為81.52%和68.48%，明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢(P<0.05)；良性卵巢腫瘤和正常卵巢XIAP、HIF-1a陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組織XIAP、HIF-1a表達(dá)比較(例，%)

2.2 XIAP、HIF-1a表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理關(guān)系

FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者XIAP、HIF-1a陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 XIAP、HIF-1a表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理關(guān)系(例，%)

2.3 相關(guān)性分析

上皮性卵巢癌組織XIAP與HIF-1a表達(dá)呈正相關(guān)(γs=0.340，P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 相關(guān)性分析

3 討論

上皮性卵巢癌是卵巢腫瘤最常見(jiàn)的病理類(lèi)型，但是在臨床上，早期該病無(wú)明顯的臨床表征，很難及時(shí)確診，以至有超過(guò)80%的患者在被確診時(shí)，就已經(jīng)有腹腔內(nèi)種植、淋巴轉(zhuǎn)移或處于中晚期階段了，這也是該病高死亡率的最主要原因[6]。有臨床研究人員發(fā)現(xiàn)[7]上皮性卵巢癌可根據(jù)患者的分級(jí)或分期不同，給予不同的手術(shù)方案，由此可見(jiàn)，提高上皮性卵巢癌早期診斷和評(píng)估疾病進(jìn)展準(zhǔn)確率對(duì)提高治療效果具有非常重要的指導(dǎo)意義。

目前，針對(duì)上皮性卵巢癌的診斷臨床上主要有影像學(xué)檢查(B超等)聯(lián)合血清標(biāo)志物(CA125等)，但其結(jié)果不明顯，特異性較低，無(wú)法準(zhǔn)確地確定腫瘤的分期。XIAP在惡性腫瘤組織的成人與胎兒的所有組織中均有高表達(dá)，與腫瘤的進(jìn)展、化療耐藥及預(yù)后不佳均相關(guān)[8]；HIF-1a能夠?qū)?xì)胞凋亡、血管新生及糖酵解進(jìn)行調(diào)控[9]。各組織XIAP、HIF-1a表達(dá)比較結(jié)果形式上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a陽(yáng)性表達(dá)率分別為81.52%和68.48%，明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢；良性卵巢腫瘤和正常卵巢XIAP、HIF-1a陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果證實(shí)上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a存在較高的陽(yáng)性表達(dá)率，XIAP、HIF-1a具有成為診斷上皮性卵巢癌重要指標(biāo)的潛力。

本研究結(jié)果顯示FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者XIAP陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，該結(jié)果提示XIAP參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程，XIAP的表達(dá)與惡性腫瘤的惡性程度有關(guān)。XIAP是IAP家族的重要成員之一，它被認(rèn)為是家族中功能最強(qiáng)和最具有特征性的Caspase抑制因子，可與凋亡效應(yīng)因子caspase-3，caspase-7及啟動(dòng)因子caspase-9結(jié)合的凋亡抑制蛋白，進(jìn)而參與上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[10-11]。

本研究結(jié)果顯示FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者HIF-1a陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，該結(jié)果也提示HIF-1a的表達(dá)與惡性腫瘤的惡性程度有關(guān)，其參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。HIF-1a是人體參與細(xì)胞內(nèi)氧代謝的重要調(diào)節(jié)因子，有氧環(huán)境下HIF-1可經(jīng)羥基化后結(jié)合泛肽連接酶，進(jìn)而通過(guò)自身泛肽化從而降解；在缺氧環(huán)境下HIF-1是無(wú)法被羥基化，所以體內(nèi)HIF-1濃度會(huì)升高。有研究結(jié)果表明當(dāng)HIF-1含量升高時(shí)，其可能參與了惡性腫瘤相適應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄，從而形成新生血管和維持腫瘤細(xì)胞的能量代謝[12]。有文獻(xiàn)也指出[13]當(dāng)缺氧時(shí)，抑制了HIF-1的表達(dá)可作為腫瘤治療的新方法。在腫瘤迅速增長(zhǎng)的過(guò)程中，患者會(huì)出現(xiàn)因惡性腫瘤細(xì)胞快速增殖進(jìn)而誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)部缺氧的現(xiàn)象，在多種腫瘤患者中均發(fā)現(xiàn)HIF-1的高表達(dá)，因此可以推測(cè)HIF-1參與了腫瘤的浸潤(rùn)、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移等病理生理過(guò)程。

相關(guān)性分析上皮性卵巢癌組織XIAP與HIF-1a的表達(dá)呈正相關(guān)，主要是因?yàn)镠IF-1a能夠并對(duì)細(xì)胞凋亡、血管新生及糖酵解有良好的調(diào)控作用；在正常條件下，HIF-1a能夠與基因產(chǎn)物pYHL結(jié)合并被降解，其半衰期僅為數(shù)分鐘，但在pVHL和缺氧環(huán)境下HIF-1a會(huì)快速上升[14-16];而XIAP是細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)器，通過(guò)BIR1結(jié)構(gòu)域的linker區(qū)調(diào)節(jié)Caspase相關(guān)因子，進(jìn)而通過(guò)多種信號(hào)途徑參與抑制內(nèi)源性或外源性凋亡誘導(dǎo)信號(hào)引起的細(xì)胞凋亡，因此XIAP與HIF-1a均通過(guò)調(diào)節(jié)惡性腫瘤細(xì)胞的凋亡來(lái)影響上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展。

總之，在上皮性卵巢癌患者的組織中XIAP、HIF-1a表達(dá)上調(diào)，與FIGO分期有關(guān)，兩者間表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系。