高危型HPV陽性患者血清中miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平對宮頸癌發(fā)生的臨床意義

劉 銘 吳坤英 郭寶芝 宋芷霜

宮頸癌(cervical cancer)作為常見的婦科惡性腫瘤，發(fā)病率以及死亡率均占世界癌癥前五，多發(fā)生于發(fā)展中國家[1]。人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV) 持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要危險因素，其中高危型HPV(HPV16和HPV18)與宮頸癌密切相關(guān)[2]。MicroRNA(miRNA)作為非編碼內(nèi)源性小RNA，參與細(xì)胞的增殖、分化以及凋亡等生物過程，有研究報道m(xù)iRNA在惡性腫瘤中起到關(guān)鍵性作用[3]，其中miR-130b-5p和miR-142-5p在宮頸癌中異常表達(dá)，并參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，有望成為宮頸癌的生物性指標(biāo)[4]。但是目前關(guān)于miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平與高危型HPV陽性患者以及對宮頸癌的預(yù)測的相關(guān)研究較少，具體機(jī)制尚不明確。本研究通過對高危型HPV陽性患者的表達(dá)水平的檢測以及對宮頸癌的臨床價值研究，旨在為尋找高危型HPV陽性患者發(fā)生宮頸癌的預(yù)測指標(biāo)提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2017年6月至2019年6月我院收治的高危型HPV陽性宮頸癌患者76例，年齡22～81歲，平均(58.31±9.54)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合《宮頸癌及癌前病變規(guī)范化診療指南(試行)》[5]，經(jīng)病理確診為宮頸癌；②采用第2代雜交捕獲技術(shù)(HC 2)檢測患者高危型HPV，結(jié)果呈陽性；③患者的臨床資料完整；④患者及家屬已簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并患有婦科炎癥患者；②合并其他惡性腫瘤；③合并處于妊娠狀態(tài)患者。另選取同期因良性宮頸病變行手術(shù)切除的高危型HPV陽性患者80例作為對照組。

1.2 血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平檢測

采集患者外周靜脈血5 ml，分離血清，并于-20 ℃保存待檢。采用RNA提取試劑盒，嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書步驟提取樣本RNA，使用ABI 7500型熒光定量 PCR儀進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)。以下為RT-PCR擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃ 變性15 s，60 ℃ 復(fù)性60 s，以上步驟共重復(fù)45個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-130b-5p和miR-142-5p的相對表達(dá)水平。引物送上海生工生物有限公司合成，引物如下：miR-130b-5p：F:5'-CGUGUUCACAGCGGACCUUGAU-3'，R:5'-AUCAAGGUCCGCUGUGAACACG-3'；miR-142-5p：F:5'-AACAAATCG GACTGC TTC TAC-3'，R:5'-AGC CACCATCATCCATAA A-3'。

1.3 高危型HPV檢測方法

通過使用一次性取樣毛刷插入患者宮頸管，并以順時針方向旋轉(zhuǎn) 5 圈后，取出沾有宮頸分泌物的一次性取樣毛刷，將其放置在特定的保存液中待檢。采用HC 2法檢測13種高危型HPV(包括HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-68)。最后檢測結(jié)果通過相對光單位/臨床閾值(Rlu/Co)表示，若化驗(yàn)比值Rlu/Co≥1.0則為陽性，若Rlu/Co<1.0為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 高危型HPV陽性患者發(fā)生宮頸癌的單因素分析

高危型HPV陽性患者發(fā)生宮頸癌與年齡、是否絕經(jīng)、有無分娩史、HPV分型無關(guān)(P均>0.05)，與血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平有關(guān)(P均<0.05)，宮頸癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平顯著高于對照組(P均<0.05)，見表 1。

表1 高危型HPV陽性患者發(fā)生宮頸癌的單因素分析(例

2.2 高危型HPV陽性患者發(fā)生宮頸癌的多因素分析

多因素分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平是影響高危型HPV陽性患者發(fā)生宮頸癌的獨(dú)立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 高危型HPV陽性患者與宮頸癌發(fā)生的多因素分析

2.3 血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平對宮頸癌的診斷價值

根據(jù)ROC曲線分析可知，血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平評估宮頸癌發(fā)生AUC分別為0.737，0.746，聯(lián)合檢測AUC為0.833，見表3及圖1。

表3 血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平以及聯(lián)合檢測對宮頸癌的診斷價值ROC分析結(jié)果

圖1 血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平以及聯(lián)合檢測對宮頸癌的診斷價值ROC曲線

2.4 血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平與宮頸癌患者臨床特征的關(guān)系比較

高危型HPV陽性宮頸癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平與年齡、是否絕經(jīng)、有無分娩史、HPV分型無關(guān)(P均>0.05)，見表4。

表4 血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平與患者臨床特征的關(guān)系

3 討論

宮頸癌作為婦科惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率均高，雖然目前臨床的診斷技術(shù)如宮腔鏡、超聲等在不斷進(jìn)步，但是依然針對的是中晚期的宮頸癌患者，而中晚期患者治療效果往往不佳[6]。HPV是雙鏈DNA病毒，是以含遺傳物質(zhì)的閉環(huán)雙鏈DNA組成核心，72個殼粒組成外圍，形成20面體[7]。根據(jù)生物特性以及致癌性，分為高危型和低危型HPV[8]。高危型HPV以HPV 16、18、31、33等亞型為主，可引起宮頸上皮內(nèi)瘤以及宮頸癌的發(fā)生，低危型HPV是以HPV6、11、44等亞型為主，可引起尖銳濕疣的發(fā)生[9]。高危型HPV持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸癌變的重要原因之一[10]，對高危型HPV患者盡早篩查、治療，可有效減少宮頸癌患者的死亡率，而關(guān)于預(yù)測高危型HPV患者是否發(fā)生宮頸癌的有效生物指標(biāo)，是目前的臨床研究所關(guān)注的熱點(diǎn)。

MiRNA是一類小分子RNA，通過參與調(diào)控靶基因來影響細(xì)胞的增殖、分化以及凋亡等過程[11]，近年來已有研究報道指出miRNA參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及癌變等進(jìn)程[12]，其中也參與了婦科腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[13]，主要是通過靶向mRNA 3'UTR 區(qū)域來對基因表達(dá)量進(jìn)行調(diào)控[14]。目前，關(guān)于miRNA水平的研究已成為腫瘤方向的研究熱點(diǎn)。在宮頸癌的研究中也有miRNA的相關(guān)報道[15]。其中有研究表明miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平與宮頸癌均存在相關(guān)性[16]。有研究稱miR-130b-5p參與了宮頸癌干細(xì)胞的增殖、分化以及凋亡的過程，促進(jìn)了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展[17]。還有miR-142-5p在宮頸癌中的過度表達(dá)增加了宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移以及侵襲能力[18]。結(jié)合本研究發(fā)現(xiàn)高危型HPV陽性患者發(fā)生宮頸癌與年齡、是否絕經(jīng)、有無分娩史、HPV分型無關(guān)，這說明年齡、絕經(jīng)、分娩史以及HPV分型對宮頸癌發(fā)生的影響不顯著，這與目前已有關(guān)于宮頸癌發(fā)生的危險因素的研究一致[17]。本研究還發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平顯著高于對照組。多因素結(jié)果分析顯示血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達(dá)水平是影響高危型HPV陽性患者發(fā)生宮頸癌的獨(dú)立危險因素，進(jìn)一步驗(yàn)證了血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平在宮頸癌患者中出現(xiàn)表達(dá)失調(diào)，也為未來選擇合適的宮頸癌預(yù)測指標(biāo)提供了思路。

本研究還發(fā)現(xiàn)血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平診斷宮頸癌的AUC分別為0.737，0.746，聯(lián)合檢測AUC為0.833，聯(lián)合檢測的線下面積均高于單獨(dú)選擇miR-130b-5p或miR-142-5p水平進(jìn)行評估的預(yù)測價值，這說明了在選擇合適的生物標(biāo)志物進(jìn)行宮頸癌預(yù)測時可以考慮聯(lián)合檢測的方式，其預(yù)測效果可能比單獨(dú)預(yù)測具有一定的優(yōu)勢。

綜上，本研究證實(shí)了血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平對宮頸癌的臨床價值，可作為一種有效預(yù)測宮頸癌的生物標(biāo)志物。然而本研究依然有一定的不足，需要更具前瞻性以及大規(guī)模的研究來進(jìn)一步驗(yàn)證。