內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激前列腺癌細(xì)胞通過STAT3信號(hào)途徑促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2極化的研究

毛新志，童宏方，戴和平，淡彬志，朱 梅

（安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽 巢湖 238000）

前列腺癌（prostate cancer，PCa）是美國(guó)男性癌癥死亡相關(guān)的第2 大原因[1]。早期的前列腺癌是一種局限性疾病，可以采用手術(shù)或者放射性治療[2]，而晚期的前列腺癌可以出現(xiàn)肝、肺和骨轉(zhuǎn)移，這是導(dǎo)致患者死亡的主要原因[3]。目前，現(xiàn)有的前列腺癌治療方法尚未有較大突破，因此，迫切需要尋找一種有效的前列腺癌治療方法。腫瘤的生長(zhǎng)依賴于腫瘤微環(huán)境（TME），快速生長(zhǎng)的腫瘤導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境改變，引起腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）[4]。研究表明[5]，ERS 可在各種腫瘤中被激活，且與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。巨噬細(xì)胞是一種高度可塑性細(xì)胞，可被所處環(huán)境激活為抗腫瘤活性的M1 型或促腫瘤活性M2 型巨噬細(xì)胞，在腫瘤微環(huán)境中主要表現(xiàn)為M2 型巨噬細(xì)胞[6]。有報(bào)道顯示[7]，發(fā)生ERS 的腫瘤細(xì)胞可以使巨噬細(xì)胞發(fā)生表型的轉(zhuǎn)變，表明ERS 與腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞的極化有關(guān)系，但其相關(guān)機(jī)制尚不清楚。外泌體是直徑在30～150 nm 的分泌型囊泡，可被多種細(xì)胞分泌，其內(nèi)含多種遺傳物質(zhì)。腫瘤來源的外泌體可以使微環(huán)境中的巨噬細(xì)胞發(fā)生免疫表型和免疫功能的改變，進(jìn)而有利于腫瘤免疫逃逸，但外泌體通過何種途徑對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生影響目前尚不清楚[8]。信號(hào)轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT）蛋白是一個(gè)細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子家族，其中的STAT3 參與許多生物學(xué)過程，可以被激活（通常為磷酸化），通過質(zhì)膜上的受體將轉(zhuǎn)錄信號(hào)傳遞到細(xì)胞核[9]。有研究表明[10]，STAT3 信號(hào)通路在誘導(dǎo)THP-1 巨噬細(xì)胞M2 極化過程中發(fā)揮巨大作用，通過抑制STAT3 信號(hào)通路，可以恢復(fù)對(duì)腫瘤的免疫監(jiān)測(cè)。本研究旨在探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激前列腺癌細(xì)胞分泌的外泌體，能否通過上調(diào)巨噬細(xì)胞的STAT3 通路蛋白，進(jìn)而改變巨噬細(xì)胞的免疫表型，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株和主要試劑 前列腺癌細(xì)胞（PC3）和人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）均購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù)；DMEM培養(yǎng)基（以色列Biological industries 公司）；RPMI 1640 培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco 公司）；胎牛血清（加拿大Wisent 公司）；外泌體提取試劑盒（Exo－Quick-TC）、無外泌體胎牛血清、CD63 單克隆抗體均購(gòu)于美國(guó)SBI 公司；DAPI 染核液、PKH67 綠色熒光細(xì)胞膜標(biāo)記試劑盒、佛波酯（PMA）、毒胡蘿卜素（TG）均購(gòu)于美國(guó)Sigma 公司；兔抗GRP78（美國(guó)Bioworld 公司）；鼠抗TSG101 單克隆抗體（英國(guó)Abcam 公司）；兔抗PD-L1（美國(guó)ABclonal 公司）；兔抗Calnexin 單克隆抗體、兔抗Phospho-Stat3 抗體、兔抗Stat3 抗體均購(gòu)于美國(guó)Cell Signaling Technology公司；鼠抗GAPDH 單克隆抗體、羊抗兔IgG（HRP）抗體、羊抗鼠IgG（HRP）抗體均購(gòu)于武漢三鷹生物技術(shù)公司。

1.2 主要儀器和設(shè)備 無菌細(xì)胞操作臺(tái)購(gòu)于蘇凈安泰公司；電泳儀、垂直電泳槽購(gòu)于北京六一儀器廠；Image Quant LAS 4000 發(fā)光成像系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)GE公司；熒光顯微鏡購(gòu)自日本Olympus 公司；激光共聚焦顯微鏡購(gòu)自德國(guó)徠卡公司。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 PC3 細(xì)胞以DMEM（高糖）完全培養(yǎng)基（10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素）、THP-1 細(xì)胞以RPMI1640 完全培養(yǎng)基（10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素）于飽和濕度37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每48 h 換液1 次，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%～90%時(shí)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代。將培養(yǎng)完成的PC3細(xì)胞以有無TG 刺激分為空白對(duì)照組（Con 組）和TG 刺激組（TG 組）。

1.3.2 巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)及分組實(shí)驗(yàn) 所用巨噬細(xì)胞以50 ng/ml 濃度的PMA 誘導(dǎo)48 h 獲得。將誘導(dǎo)完成的巨噬細(xì)胞根據(jù)加入不同的外泌體刺激進(jìn)行分組，分為Con 組PC3 細(xì)胞外泌體刺激組（M-Con 組）與TG 組PC3 細(xì)胞外泌體刺激組（M-TG 組）。

1.3.3 蛋白印跡實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的PC3 細(xì)胞或者THP-1 細(xì)胞，接種到6 孔板中，待細(xì)胞貼壁后，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆謩e進(jìn)行處理：①以不同濃度（0、1、2、2.5、3、4 μmol/L）TG 刺激PC3 細(xì)胞24 h，后用3 μmol/L 濃度TG 以不同時(shí)間（0、6、12、24、48 h）刺激PC3 細(xì)胞，觀察PC3 細(xì)胞GRP78 蛋白表達(dá)情況，確定TG 最佳刺激濃度與時(shí)間；②培養(yǎng)Con 組PC3細(xì)胞和TG 組PC3 細(xì)胞及其分泌的外泌體，觀察PC3細(xì)胞及其分泌外泌體中CD63、TSG101 與Calnexin 蛋白表達(dá)情況；③以不同濃度（10、20、30、40 μg/ml）外泌體刺激巨噬細(xì)胞24 h，后用30 μg/ml 濃度外泌體以不同時(shí)間（0、6、12、24、48 h）刺激巨噬細(xì)胞，觀察巨噬細(xì)胞PD-L1 蛋白表達(dá)情況，確定外泌體最佳刺激濃度與時(shí)間；④培養(yǎng)M-Con 組和M-TG 組巨噬細(xì)胞，檢測(cè)巨噬細(xì)胞P-STAT3 和STAT3 蛋白表達(dá)情況。收集各組細(xì)胞，提取各組細(xì)胞蛋白，用BCA 試劑盒進(jìn)行蛋白定量，后加入5x 蛋白上樣緩沖液，配制SDS-PAGE 凝膠，各孔中等量蛋白上樣，經(jīng)電泳分離、轉(zhuǎn)膜等步驟后將蛋白轉(zhuǎn)至PVDF 膜上，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，洗膜后分別與相應(yīng)一抗（GRP78抗體1∶3000 稀釋；CD63 抗體、TSG101 抗體、Calnexin 抗體、PD-L1 抗體、P-STAT3 抗體、STAT3 抗體稀釋比例均為1∶1000；GAPDH 抗體1∶20000 稀釋）孵育過夜，經(jīng)洗膜3 遍、二抗室溫孵育1 h、洗膜3 遍后，發(fā)光成像系統(tǒng)顯影。

1.3.4 外泌體的提取 分別收集Con 組和TG 組PC3細(xì)胞的培養(yǎng)上清，3000xg 離心15 min 去除細(xì)胞碎片，吸取上清于新的離心管中，分別加入外泌體提取試劑（ExoQuick-TC），提取Con 組分泌外泌體（Exo-Con）和TG 組細(xì)胞分泌外泌體（Exo-TG），后續(xù)進(jìn)行透射電鏡和蛋白印跡實(shí)驗(yàn)對(duì)兩組外泌體進(jìn)行鑒定。

1.3.5 透射電鏡觀察外泌體 將制備好的外泌體從-80 ℃冰箱取出，冰上自然解凍；取10 μl 于銅網(wǎng)正面，磷鎢酸復(fù)染1～2 min，自然晾干，PBS 沖洗3 遍，自然晾干后透射電子顯微鏡觀察外泌體的形態(tài)。

1.3.6 激光共聚焦顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞 對(duì)外泌體的攝取用PKH67 按照試劑說明書標(biāo)記PC3 細(xì)胞分泌的外泌體，加入誘導(dǎo)后的THP-1 細(xì)胞培養(yǎng)皿中，于飽和濕度、5% CO2、37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)12 h，用預(yù)冷的PBS 洗細(xì)胞3 次，4%多聚甲醛固定30 min，棄甲醛后PBS 再次洗3 遍，后0.2% Triton-100 破膜10 min，再次PBS 洗細(xì)胞3 次，血清封閉30 min，再次PBS 洗3 遍，DAPI 染核5 min，PBS 洗3 遍后激光共聚焦顯微鏡觀察。

1.3.7 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)細(xì)胞炎癥因子 用外泌體和誘導(dǎo)后的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，取其上清液利用化學(xué)發(fā)光方法檢測(cè)Exo-con 和Exo-TG 對(duì)巨噬細(xì)胞IL-1β、IL-6、IL-10 和TNF-α 表達(dá)水平的影響。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0 和GraphPad Prism 5.0 軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)采用（）表示，兩組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01 表示統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著。

2 結(jié)果

2.1 毒胡蘿卜素誘導(dǎo)PC3 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激結(jié)果 TG可刺激PC3 細(xì)胞增加GRP78 蛋白表達(dá)，且PC3 細(xì)胞分泌ERS 標(biāo)志蛋白GRP78 可呈濃度依賴性（圖1A，1B）和時(shí)間依賴（圖1C，1D）表達(dá)增加，當(dāng)濃度為3 μmol/L 時(shí)，GRP78 分泌量達(dá)最大（P＜0.05），見表1；而12 h 時(shí)與24 h 時(shí)GRP78 分泌量增加不明顯（P=0.051），見表2。

圖1 毒胡蘿卜素誘導(dǎo)PC3 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

表1 各組濃度相對(duì)比較（）

表1 各組濃度相對(duì)比較（）

注：與3 μmol/L 組比較

表2 各組時(shí)間相對(duì)比較（）

表2 各組時(shí)間相對(duì)比較（）

注：與24 h 組比較

2.2 外泌體的鑒定及巨噬細(xì)胞對(duì)外泌體的攝取 透射電子顯微鏡觀察可見Exo-Con 和Exo-TG 均為雙層膜樣結(jié)構(gòu)、圓形或類圓形小囊泡，直徑為30～120 nm，大小均一散分布，符合文獻(xiàn)報(bào)道外泌體典型特點(diǎn)，見圖2A、2B；Western blot 結(jié)果顯示，提取的Exo-Con 中和Exo-TG 中均表達(dá)CD63 和TSG101外泌體標(biāo)志蛋白，且無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子蛋白Calnexin 的表達(dá)，見圖2E；另外，Con 組與TG 組PC3 細(xì)胞中CD63、TSG101 和Calnexin 蛋白升高表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖2C、圖2D、表3；而與Exo-Con 比 較，Exo-TG 中 標(biāo) 志 性 蛋 白CD63 和TSG101 的含量較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖2E、圖2F、表4；激光共聚焦觀察結(jié)果顯示，DAPI 染核后的巨噬細(xì)胞能夠攝取PKH67 標(biāo)記的外泌體，見圖2G。

表3 兩組PC3 中Calnexin、TSG101、CD63相對(duì)表達(dá)量比較（）

表3 兩組PC3 中Calnexin、TSG101、CD63相對(duì)表達(dá)量比較（）

表4 兩組外泌體中TSG101 與CD63相對(duì)表達(dá)量比較（）

表4 兩組外泌體中TSG101 與CD63相對(duì)表達(dá)量比較（）

圖2 外泌體的鑒定與巨噬細(xì)胞對(duì)外泌體的攝取

2.3 Exo-TG 上調(diào)巨噬細(xì)胞PD-L1 表達(dá) Western blot 結(jié)果顯示，Exo-TG 可呈濃度依賴性（圖3A）和時(shí)間依賴性（圖3B）增加巨噬細(xì)胞PD-L1 的表達(dá)。且當(dāng)Exo-TG 刺激濃度為30 μg/ml，刺激時(shí)間為24 h時(shí)巨噬細(xì)胞PD-L1 分泌量達(dá)到最大，見圖3C、圖3D；M-Con 組刺激濃度20、30 和40 μg/ml，M-TG組刺激濃度30、40 μg/ml，刺激12 h 和24 h 巨噬細(xì)胞PD-L1 表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表5、表6；此外，與M-Con 組比較，M-TG 組能夠較明顯的增加巨噬細(xì)胞分泌PD-L1 蛋白（P＜0.05），見表7。

表5 不同濃度比較（）

表5 不同濃度比較（）

注：各組均與30 μg/ml 組比較

表6 各組時(shí)間比較（）

表6 各組時(shí)間比較（）

表7 兩組巨噬細(xì)胞PD-L1 相對(duì)表達(dá)量比較（）

表7 兩組巨噬細(xì)胞PD-L1 相對(duì)表達(dá)量比較（）

圖3 外泌體對(duì)巨噬細(xì)胞PD-L1 表達(dá)量的影響

2.4 Exo-TG 可促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2 表型轉(zhuǎn)化 化學(xué)發(fā)光結(jié)果顯示，與M-Con 組相比，M-TG 組不僅能夠明顯升高炎癥細(xì)胞因子IL-1β 和TNF-α 的濃度水平，還能夠提高IL-10 表達(dá)（P＜0.05），但I(xiàn)L-6 濃度水平升高不明顯（P＞0.05），見圖4A、表8、表9。

表8 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)IL-1β、IL-6、IL-10 與TNF-α 濃度水平（，pg/ml）

表8 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)IL-1β、IL-6、IL-10 與TNF-α 濃度水平（，pg/ml）

表9 兩組巨噬細(xì)胞炎癥因子水平相對(duì)表達(dá)量（）

表9 兩組巨噬細(xì)胞炎癥因子水平相對(duì)表達(dá)量（）

圖4 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)巨噬細(xì)胞炎癥因子

2.5 Exo-TG 可上調(diào)巨噬細(xì)胞P-STAT3 的表達(dá)Western blot 結(jié)果顯示，與M-Con 組相比，M-TG 組中的STAT3 蛋白升高不明顯（P＞0.05），而P-STAT3蛋白升高（P＜0.05），見圖5A，且P-STAT3/STAT3 的比值升高（P＜0.05），見圖5B、表10。

圖5 外泌體對(duì)巨噬細(xì)胞STAT3 表達(dá)的影響

表10 兩組巨噬細(xì)胞STAT3 通路蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

表10 兩組巨噬細(xì)胞STAT3 通路蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

3 討論

由于腫瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng)，可引發(fā)腫瘤微環(huán)境發(fā)生改變，如組織缺氧、營(yíng)養(yǎng)不足、低pH 等，進(jìn)而誘發(fā)腫瘤產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激已被證明在調(diào)節(jié)血管生成、炎癥、侵襲轉(zhuǎn)移和化療耐藥性中發(fā)揮重要作用[11]。外泌體是含有多種遺傳信息的載體，在腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞信息傳遞中發(fā)揮重要作用，可以介導(dǎo)巨噬細(xì)胞的分化，最終促進(jìn)腫瘤的發(fā)展[12，13]。在腫瘤微環(huán)境中大多以M2 型巨噬細(xì)胞為主，且M2 巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤的進(jìn)展及預(yù)后均有消極影響。有研究表明[14]，乳腺癌細(xì)胞來源的外泌體可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2 表型轉(zhuǎn)化，促進(jìn)乳腺癌的免疫逃逸。因此，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激前列腺癌細(xì)胞也可能通過外泌體促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2 表型極化，具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白（GRP78）存在于所有真核生物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激情況下，GRP78 的表達(dá)增加[15]。本研究用TG 刺激前列腺癌細(xì)胞構(gòu)建前列腺癌ERS 模型，結(jié)果表明，TG 能夠引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78 表達(dá)增加，且當(dāng)以3 μmol/L 毒胡蘿卜素刺激前列腺癌細(xì)胞24 h 時(shí)，GRP78 蛋白表達(dá)量最高，這時(shí)能夠較好的構(gòu)建前列腺癌ERS 模型。研究還發(fā)現(xiàn)，ERS 的前列腺癌細(xì)胞能夠分泌外泌體，并且ERS 的外泌體能夠表達(dá)更多的CD63 與TSG101，這表明ERS 可能致使外泌體攜帶更多的遺傳物質(zhì)。目前巨噬細(xì)胞亞型可分為經(jīng)典活化促炎M1 型和替代活化M2 型。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[16]，M2型巨噬細(xì)胞不僅能表達(dá)促炎因子IL-1β、IL-6 和TNF-α，還高表達(dá)抗炎因子IL-10 和低水平的IL-12。在本研究中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的PC3 細(xì)胞釋放的外泌體能夠被巨噬細(xì)胞所攝取，并分泌大量IL-1β、IL-10和TNF-α 細(xì)胞炎癥因子，說明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PC3 細(xì)胞外泌體能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2 表型極化；但I(xiàn)L-6 的分泌增加不明顯，這可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激前列腺癌細(xì)胞外泌體同時(shí)促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1 型M2 型的混合極化，這在黑色素瘤細(xì)胞中有相關(guān)報(bào)道[17]。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的極化并不是一個(gè)靜態(tài)的，近年來，有研究發(fā)現(xiàn)通過調(diào)節(jié)NF-κB 通路能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞M1 極化，抑制M2 極化[18]。在胰腺癌模型中，PI3K-γ 通路和CSF-1/CSF1R 的雙重阻斷可使M2型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)镸1 型巨噬細(xì)胞[19]。以上相關(guān)文獻(xiàn)說明巨噬細(xì)胞是可以被動(dòng)態(tài)調(diào)控的，但具體相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本研究還發(fā)現(xiàn)，除了改變巨噬細(xì)胞免疫表型，高表達(dá)炎癥因子外，巨噬細(xì)胞中PD-L1 蛋白也被上調(diào)。而PD-L1 的上調(diào)又被證明能夠抑制CD8+T 細(xì)胞的細(xì)胞毒性，促進(jìn)腫瘤免疫逃逸[20]。綜上所述，M2 極化巨噬細(xì)胞與腫瘤免疫密切相關(guān)，可以與抗腫瘤治療相聯(lián)系，作為輔助治療的潛在靶點(diǎn)。

STAT3 可在多種癌癥中被激活。有研究報(bào)道[21]，乳腺癌細(xì)胞來源的乳酸通過激活ERK/STAT3 信號(hào)通路誘導(dǎo)乳腺癌M2 巨噬細(xì)胞極化，從而促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展。還有研究表明，乳腺癌細(xì)胞來源的外泌體通過gp130 通過激活巨噬細(xì)胞IL-6/STAT3 信號(hào)通路，誘導(dǎo)促腫瘤細(xì)胞因子的表達(dá)，從而使骨髓源性巨噬細(xì)胞向促腫瘤生長(zhǎng)的M2 型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化[22]。以上研究表明，STAT3 在巨噬細(xì)胞M2 極化中發(fā)揮重要作用。在本研究中，來自內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PC3 細(xì)胞的外泌體能夠使巨噬細(xì)胞STAT3 蛋白明顯磷酸化，而STAT3 蛋白表達(dá)升高不明顯，說明ERS 前列腺癌細(xì)胞外泌體可激活巨噬細(xì)胞STAT3 磷酸化蛋白通路，引起巨噬細(xì)胞向M2 型分化，并引起IL-1β、IL-10和TNF-α 的分泌增加和PD-L1 蛋白表達(dá)，從而發(fā)揮抗腫瘤免疫的功能，這與既往的研究[23]相符合。有研究表明[24]，在肺癌中，薯蕷皂苷可能作為一種潛在的IL-10 抑制劑，通過下調(diào)活化STAT3 的表達(dá)，抑制巨噬細(xì)胞M2 極化從而誘導(dǎo)抗腫瘤免疫。同樣的，在前列腺癌中，已有研究證明let-7b-5p 可以通過調(diào)節(jié)SOCS1/STAT 通路的活性來調(diào)節(jié)M1/M2 轉(zhuǎn)換，最終影響前列腺癌增殖[25]；這說明STAT3 是一個(gè)新的可控的調(diào)節(jié)位點(diǎn)，在未來有望成為一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。

綜上所述，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的前列腺癌細(xì)胞能夠借助外泌體將應(yīng)激信號(hào)傳遞給THP-1 巨噬細(xì)胞，引起巨噬細(xì)胞STAT3 的磷酸化，上調(diào)巨噬細(xì)胞PD-L1的表達(dá)，引起巨噬細(xì)胞M2 表型轉(zhuǎn)化，并分泌大量IL-1β、IL-10 和TNF-α 細(xì)胞炎癥因子，促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的免疫逃逸，具體機(jī)制還要進(jìn)一步研究。盡管僅限于體外模型，但這些結(jié)果證明了外泌體能夠在腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞中傳遞信息，并改變巨噬細(xì)胞免疫表型，促進(jìn)癌癥的進(jìn)展，也為治療前列腺癌提供了理論依據(jù)。