HLA-F及miR-93在鼻咽癌中的表達(dá)及其對(duì)調(diào)強(qiáng)放療預(yù)后評(píng)估的價(jià)值

王皓穎 趙一電 梁塏 王曉敏

【摘要】 目的 探究人類白細(xì)胞抗原F（human leukocyte antigen-F，HLA-F）及微小RNA-93（microRNA-93，miR-93）在鼻咽癌中的表達(dá)及其對(duì)調(diào)強(qiáng)放療預(yù)后評(píng)估的價(jià)值。

方法 選取2017年1月～2018年1月安陽市腫瘤醫(yī)院收治的鼻咽癌患者72例，給予調(diào)強(qiáng)放療并獲取患者治療前后的HLA-F和miR-93的表達(dá)水平。對(duì)患者進(jìn)行隨訪，分析HLA-F、miR-93表達(dá)水平與患者預(yù)后的關(guān)系。

結(jié)果 HLA-F高表達(dá)29例，低表達(dá)43例;miR-93高表達(dá)45例，低表達(dá)27例。HLA-F低表達(dá)患者的腫瘤直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的比例明顯高于HLA-F高表達(dá)患者（P<0.05）;miR-93低表達(dá)患者的腫瘤直徑<5 cm、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的比例高于miR-93高表達(dá)患者（P<0.05）。多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期均為鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療后預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。對(duì)所有患者持續(xù)隨訪3～36個(gè)月，72例患者中有19例死亡，存活53例，生存率為73.61%。生存組與死亡組患者的腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。ROC曲線分析顯示，HLA-F預(yù)測鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療后生存狀態(tài)的AUC為0.600，準(zhǔn)確性較低;miR-93預(yù)測的AUC為0.875，準(zhǔn)確性良好;二者聯(lián)合的預(yù)測AUC為0.930，準(zhǔn)確性高。

結(jié)論 HLA-F的表達(dá)對(duì)鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療預(yù)后評(píng)估價(jià)值較低，miR-93的評(píng)估價(jià)值良好，但二者聯(lián)合的評(píng)估價(jià)值更高，可作為鼻咽癌患者預(yù)后評(píng)估的重要參考。

【關(guān)鍵詞】 HLA-F;miR-93;鼻咽癌;調(diào)強(qiáng)放療

中圖分類號(hào)：R739.62?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.01.004

Expression of HLA-F and miR-93 in nasopharyngeal carcinoma and their value in evaluating the prognosis of intensity-modulated radiotherapy

WANG Haoying， ZHAO Yidian， LIANG Kai， WANG Xiaomin

（Radiotherapy Department， The Fourth Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology—Anyang Cancer Hospital， Anyang 455000， Henan， China）

【Abstract】 Objective To explore the expression of human leukocyte antigen-F （HLA-F） and microRNA-93 （miR-93） in nasopharyngeal carcinoma and their value in evaluating the prognosis of intensity-modulated radiotherapy.

Methods 72 patients with nasopharyngeal carcinoma admitted to Anyang Cancer Hospital from January 2017 to January 2018 were selected to receive intense-modulated radiotherapy， and the expression levels of HLA-F and miR-93 before and after treatment were recorded. The patients were followed up to analyze relationship between the expression levels of HLA-F and miR-93 and the prognosis of the patients.

Results 29 cases had high expression of HLA-F and 43 cases had low expression; 45 cases had high expression of miR-93， and 27 cases had low expression. The proportion of tumor diameter≥5 cm， lymph node metastasis and clinical stage Ⅲ-Ⅳ in patients with low HLA-F expression was significantly higher than that in patients with high HLA-F expression （P<0.05）. The proportion of tumor diameter<5 cm， no lymph node metastasis and clinical stage Ⅰ-Ⅱ in patients with low miR-93 expression was significantly higher than that in patients with high miR-93 expression（P<0.05）. Multivariate Cox regression analysis showed that tumor diameter≥5 cm， lymph node metastasis， and clinical stage Ⅲ-Ⅳ were independent risk factors for the poor? prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma after intensity-modulated radiotherapy （P<0.05）. All patients were followed up for 3-36 months， 19 of 72 patients died， 53 patients survived， and the survival rate was 73.61%. There were statistically significant differences in the tumor diameter， lymph node metastasis， and clinical stage between survival group and death group （P<0.05）. ROC curve analysis showed that the AUC of HLA-F in predicting the survival state of patients with nasopharyngeal carcinoma after intensity-modulated radiotherapy was 0.600， which was low in accuracy; the AUC predicted by miR-93 was 0.875， which had good accuracy; combined prediction AUC of the two was 0.930， which had high accuracy.

Conclusion The expression of HLA-F is of low value in evaluating the prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma， and the evaluation value of miR-93 is good. The combined evaluation value of the two is higher， which can be used as an important reference for the prognosis evaluation of patients with nasopharyngeal carcinoma.

【Key words】 HLA-F; miR-93; nasopharyngeal carcinoma; intensity-modulated radiotherapy

調(diào)強(qiáng)放療已經(jīng)成為治療鼻咽癌的常用治療方式，但其治療效果并未達(dá)到理想地步。通過對(duì)患者的預(yù)后效果進(jìn)行評(píng)估，給予針對(duì)性的分流和療效監(jiān)測，可幫助提升治療效果并節(jié)約醫(yī)療資源。鼻咽癌作為免疫相關(guān)性腫瘤之一，其表皮生長因子受體在腫瘤細(xì)胞浸潤、轉(zhuǎn)移均發(fā)揮著重要作用，而人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）已被證實(shí)與表皮生長因子受體存在相關(guān)性[1]。人類白細(xì)胞抗原F（human leukocyte antigen-F，HLA-F）為HLAI類分子之一，可體現(xiàn)患者體內(nèi)免疫系統(tǒng)的情況，研究發(fā)現(xiàn)HLA-F在腫瘤患者中異常表達(dá)[2]，但是HLA-F與鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的價(jià)值相關(guān)研究文獻(xiàn)不多。微小RNA-93（microRNA-93，miR-93）被報(bào)道能通過靶向調(diào)控多種基因改善鼻咽癌腫瘤細(xì)胞的生長和侵襲[3]，但關(guān)于miR-93對(duì)于鼻咽癌預(yù)后價(jià)值的文獻(xiàn)較少。為了解HLA-F和miR-93與鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療預(yù)后的關(guān)系，并分析鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療后的生存時(shí)間，故我們開展此次研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月～2018年1月在我院確診為鼻咽癌的患者72例，所有患者均符合以下標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）為首次確診為鼻咽癌且經(jīng)病理組織學(xué)確診者;（2）為首次接受治療且符合調(diào)強(qiáng)放療指征者[4];（3）本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且所有患者及家屬均了解實(shí)驗(yàn)過程并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并患有其他重要臟器功能障礙類疾病者;（2）有化療史或其他相關(guān)治療史者;（3）中途失聯(lián)、退出、資料不全或依從性差者?；颊咧心行?2例，女性20例，年齡為41～72歲，平均（56.11±15.24）歲。

1.2 方法

所有患者均接受調(diào)強(qiáng)放療，患者取仰臥體位，利用CT模擬機(jī)確定掃描中心，層厚3 mm;完成CT掃描后進(jìn)行圖像重建，放療師以此為根據(jù)確定高危臨床靶向體積和低危臨床靶向體積;高危臨床靶向體積和低危臨床靶向體積的用藥均為2.0 Gy/f，總量保持在55 Gy;首個(gè)療程為28次/6周，隨后根據(jù)患者情況適當(dāng)放緩放療的頻率;患者每3個(gè)月進(jìn)行一次復(fù)查。

對(duì)所有患者持續(xù)隨訪3～36個(gè)月，中位隨訪時(shí)間22個(gè)月，以了解患者的預(yù)后情況，以電話隨訪或門診登記訪問為主，死亡患者以死亡時(shí)間為隨訪截止時(shí)間。生存療效評(píng)價(jià)指標(biāo)：記錄患者從隨機(jī)化（random assignment）開始至因任何原因死亡（death）的時(shí)間（失訪患者為最后一次隨訪時(shí)間;研究結(jié)束時(shí)仍然存活患者，為隨訪結(jié)束日），即記錄總生存期（OS，overall survival）。中位總生存（mOS）：又稱半數(shù)生存期，表示恰好有50%的個(gè)體尚存活的時(shí)間。由于截尾數(shù)據(jù)的存在，計(jì)算不同于普通的中位數(shù)，利用生存曲線，令生存率為50%時(shí)，推算出生存時(shí)間。

1.3 觀察療效指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)

所有患者均于入院當(dāng)天（治療前）和治療結(jié)束后（治療后）取病理學(xué)組織，采用免疫人HLA-F單克隆抗體化學(xué)試劑檢測癌組織中HLA-F的表達(dá)，按試劑操作說明進(jìn)行操作。miR-93檢測：取患者外周血液5 mL放置在含有促凝劑的采血管中，并于1 h內(nèi)放置低于4℃的環(huán)境中保存，隨后進(jìn)行常規(guī)離心15 min;取上層血清進(jìn)行檢測以了解患者血液中miR-93的表達(dá)水平，取血清標(biāo)本，提取總RNA（Bioteke公司），純化后紫外分光光度計(jì)測定RNA濃度、純度，逆轉(zhuǎn)錄cDNA，應(yīng)用miRNA莖環(huán)引物及PCR引物上實(shí)時(shí)定量PCR儀（ABI公司，美國）檢測（U6為內(nèi)參基因），條件95℃預(yù)變性10 min、95℃變性15 s、60℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)。

由專業(yè)的病理科醫(yī)師對(duì)每張切片5個(gè)400倍視野以染色強(qiáng)度結(jié)合陽性細(xì)胞的百分比進(jìn)行綜合積分，積分標(biāo)準(zhǔn)：（-）為陰性記0分，（+）為弱陽性記1～4分，（++）為中度陽性記5～8分，（+++）為強(qiáng)陽性記9～12分;將0～4分定為低表達(dá)，5～12定為高表達(dá)[5]。鼻咽癌分期參照標(biāo)準(zhǔn)為第八版美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)/國際抗癌聯(lián)盟鼻咽癌臨床病理分析系統(tǒng)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。采用logistic回歸分析鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療后預(yù)后的影響因素，采用ROC曲線評(píng)價(jià)HLA-F、miR-93對(duì)調(diào)強(qiáng)放療生存結(jié)局的預(yù)測價(jià)值。檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)? 果

2.1 HLA-F和miR-93表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

72例鼻咽癌患者中HLA-F高表達(dá)29例，低表達(dá)43例;miR-93高表達(dá)45例，低表達(dá)27例。HLA-F、miR-93高表達(dá)與患者的性別、年齡無關(guān)（P>0.05）;HLA-F低表達(dá)患者的腫瘤直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的比例明顯高于HLA-F高表達(dá)患者（P<0.05）;miR-93低表達(dá)患者的腫瘤直徑<5 cm、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的比例明顯高于miR-93高表達(dá)患者（P<0.05）。見表1、表2。

2.2 鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療后預(yù)后的影響因素分析

腫瘤直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期是鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療后預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。見表3。

2.3 預(yù)后與臨床病理特征的關(guān)系

對(duì)所有患者持續(xù)隨訪3～36（20.37±4.88）個(gè)月，無患者失聯(lián)或中途退出。72例患者中19例死亡，53例存活，生存率為73.61%。按照預(yù)后情況將患者分成生存組和死亡組。兩組患者的年齡、性別等對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但兩組患者的腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。腫瘤直徑≥5 cm的平均生存期為（25.63±1.11）個(gè)月，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的平均生存期為（24.81±1.03）個(gè)月，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的平均生存期為（24.81±1.05）個(gè)月。見表4、表5及圖1。

2.4 HLA-F和miR-93的ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示，HLA-F預(yù)測鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療后生存狀態(tài)的AUC為0.600，準(zhǔn)確性較低;miR-93預(yù)測的AUC為0.875，準(zhǔn)確性良好;二者聯(lián)合預(yù)測的AUC為0.930，準(zhǔn)確性更高。以ROC曲線cutoff預(yù)測HLA-F、miR-93二者聯(lián)合預(yù)測死亡，結(jié)果顯示，聯(lián)合預(yù)測的敏感度和特異度分別為86.3%和93.1%。見表6、圖2。

3 討? 論

目前腫瘤治療已經(jīng)進(jìn)入免疫時(shí)期，即在給予調(diào)強(qiáng)放療、靶向治療等外力幫助的同時(shí)，注重提升患者自身的免疫力以達(dá)到增強(qiáng)消滅體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的效果[6]。本組案例中，生存組和死亡組患者一般資料比較，其臨床分級(jí)之間存在明顯差異。死亡組患者的Ⅲ～Ⅳ期的人數(shù)占比明顯高于生存組的患者，可見患者的病情程度對(duì)其預(yù)后也會(huì)產(chǎn)生影響。除臨床分期外，癌組織或血清中因子差異表達(dá)也可幫助臨床醫(yī)師評(píng)估鼻咽癌調(diào)強(qiáng)放療的預(yù)后。

研究證實(shí)[7]，HLA參與了鼻咽癌免疫調(diào)節(jié)，HLA-F屬非典型HLAI類抗原，可維持免疫耐受體系，改善免疫系統(tǒng)失調(diào)等情況。國內(nèi)外大量研究表明[8～10]，HLA-F表達(dá)可反映腫瘤浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管和淋巴管侵犯等，因此，其可作為鼻咽癌診斷或預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，在HLA-F、miR-93低表達(dá)中，腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期分布比例均存在差異。綜合回歸分析結(jié)果看，HLA-F表達(dá)水平低、miR-93表達(dá)水平高患者病死率更高。這可能是死亡組患者經(jīng)過治療后，其自身免疫系統(tǒng)改善效果不佳，致使HLA-F表達(dá)量無明顯變化。但也可能是由于死亡組患者的病例數(shù)較少，無法進(jìn)行有效的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異研究比較。為了進(jìn)一步分析鼻咽癌患者預(yù)后與臨床特征的關(guān)系，本研究隨訪發(fā)現(xiàn)，生存和死亡患者的腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期均存在差異。進(jìn)一步說明鼻咽癌患者的腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期不僅影響HLA-F、miR-93表達(dá)水平，還與預(yù)后結(jié)果息息相關(guān)。做進(jìn)一步預(yù)測分析，發(fā)現(xiàn)HLA-F可預(yù)測鼻咽癌患者調(diào)強(qiáng)放療后死亡情況，其預(yù)測AUC為0.600，但預(yù)測準(zhǔn)確性較低，敏感度和特異度分別為70.2%與87.9%?？梢?，如果僅觀察HLA-F的表達(dá)情況是無法就鼻咽癌患者的預(yù)后情況進(jìn)行有效的預(yù)測評(píng)估。

有研究顯示[11～13]，miR-93在多種腫瘤中差異表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，生存組與死亡組在治療前后的miR-93表達(dá)均有明顯差異，且兩組患者在治療后miR-93均得到明顯改善。經(jīng)過ROC曲線分析，miR-93的預(yù)測AUC為0.875，預(yù)測準(zhǔn)確性良好，敏感度和特異度分別為88.7%與84.2%。進(jìn)一步表明，miR-93表達(dá)水平可對(duì)鼻咽癌患者的預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。但與HLA-F或miR-93單獨(dú)診斷相比，二者聯(lián)合診斷鼻咽癌調(diào)強(qiáng)放療死亡的AUC高達(dá)0.930，特異度提升至93.1%。這可能是，HLA-F表達(dá)與腫瘤細(xì)胞逃逸機(jī)體免疫殺傷能力，HLA-F表達(dá)降低提示腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[14]，miR-93表達(dá)則與鼻咽癌細(xì)胞的侵襲、增殖相關(guān)[15]，因此，綜合考慮HLA-F或miR-93表達(dá)，既能反映鼻咽癌惡性生物學(xué)行為進(jìn)程，又可以反映患者免疫功能，從而提高對(duì)預(yù)后不良結(jié)局的預(yù)測效果。

綜上所述，鼻咽癌患者接受調(diào)強(qiáng)放療后，單獨(dú)觀察HLA-F表達(dá)對(duì)其預(yù)后效果評(píng)估價(jià)值較低，而單獨(dú)觀察miR-93表達(dá)水平對(duì)其預(yù)后效果評(píng)估價(jià)值良好，二者聯(lián)合有較高評(píng)估價(jià)值，對(duì)于鼻咽癌患者預(yù)后評(píng)估具有重要的參考價(jià)值。但由于此次實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象較少，隨訪時(shí)間較短，無法就HLA-F與miR-93之間的協(xié)作機(jī)制進(jìn)行更進(jìn)一步的研究。

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（收稿日期：2020-10-31 修回日期：2021-11-13）

（編輯：潘明志）