代謝組學(xué)在兒童哮喘中的應(yīng)用進(jìn)展

吳銳劍，黃宇戈，羅連響

支氣管哮喘（以下簡(jiǎn)稱哮喘）是一種常見的慢性氣道炎癥性疾病，其特征是可逆性氣流受限和氣道高反應(yīng)性，臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的喘息、咳嗽、胸悶和氣促［1］。哮喘是兒童最常見的慢性疾?。?］，其發(fā)病與飲食、遺傳、微生物和環(huán)境等因素相關(guān)［3］，具體發(fā)病機(jī)制尚未明確。目前臨床主要根據(jù)臨床癥狀、體征、肺功能和呼出氣一氧化氮（FeNO）等進(jìn)行診斷及病情評(píng)估。我國(guó)兒童哮喘流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，城市兒童哮喘的漏診率達(dá)30%［4］。而且目前臨床上哮喘常用的輔助檢查——肺功能和FeNO 無法監(jiān)測(cè)肺部炎癥情況，亦不能預(yù)測(cè)病情惡化。代謝物是生物學(xué)和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，具備將基因型和表型聯(lián)系起來的巨大潛力，代謝組學(xué)有助于從整體上識(shí)別和量化生物體內(nèi)的代謝物變化。

代謝組學(xué)是對(duì)生物體液、細(xì)胞、組織、器官或生物中的低分子量分子或代謝產(chǎn)物進(jìn)行客觀地整體測(cè)量［5］。以往人們主要將代謝物視為下游產(chǎn)物，即生物標(biāo)志物，隨著對(duì)代謝物的深入了解發(fā)現(xiàn)，代謝物不僅是疾病的生物標(biāo)志物，依據(jù)各自酶的活性其還可以修飾蛋白質(zhì)和DNA，并與之相互作用，從而改變蛋白質(zhì)組和表觀基因組［6-7］（圖1）。代謝物可作為信號(hào)分子來控制轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)而控制基因表達(dá)；此外，代謝物作為染色質(zhì)修飾酶的輔助因子和輔助底物，積極參與表觀遺傳調(diào)控。代謝物還通過核糖開關(guān)傳感小分子配體和轉(zhuǎn)錄后修飾影響RNA 代謝。最后，代謝物通過跨膜受體和轉(zhuǎn)錄因子的變構(gòu)調(diào)節(jié)，作為生化反應(yīng)催化中的輔酶因子和共底物，以及通過翻譯后修飾，來主動(dòng)控制蛋白活性。因此，代謝組學(xué)不僅能為臨床提供哮喘的潛在生物標(biāo)志物，還有助于進(jìn)一步了解哮喘的發(fā)病機(jī)制。

圖1 代謝物與表觀基因組、蛋白質(zhì)組的相互作用Figure 1 Interactivities of metabolite with epigenome and proteome

目前哮喘相關(guān)的代謝組學(xué)研究主要是針對(duì)成人哮喘，兒童哮喘相關(guān)的代謝組學(xué)研究相對(duì)較少。兒童生理特點(diǎn)與成人不同，兒童處在生長(zhǎng)發(fā)育階段，器官發(fā)育尚未成熟，功能尚未完善，兒童代謝水平有其自身特點(diǎn)。例如，成人哮喘患者的血清精氨酸高于非哮喘者［8］，而在兒童中結(jié)果正好相反［9］，這可能由兒童免疫系統(tǒng)不成熟導(dǎo)致［8，10］。與成人相比，兒童更易受遺傳、性別［11］、年齡［12］、體質(zhì)指數(shù)（BMI）［13］、飲食［14］、藥物［15］、外界環(huán)境等因素影響，因此，需嚴(yán)格控制研究人群的人口學(xué)特征。此外，代謝組學(xué)在兒童哮喘中的意義不僅局限于哮喘的診斷，還包括哮喘的預(yù)測(cè)，本文對(duì)代謝組學(xué)在兒童哮喘中的應(yīng)用進(jìn)行綜述，以期在疾病早期對(duì)患兒進(jìn)行干預(yù)，從而獲得更好的預(yù)后。

1 代謝組學(xué)技術(shù)與分析

代謝組學(xué)按研究策略可分為靶向代謝組學(xué)和非靶向代謝組學(xué)。非靶向代謝組學(xué)是對(duì)特定環(huán)境、特定生理狀態(tài)下生物實(shí)體代謝物組成的分析［16］，其目的在于對(duì)所有代謝物進(jìn)行分析并從中篩選差異代謝物。而靶向代謝組學(xué)則是依賴于先驗(yàn)代謝物及其生化途徑對(duì)特定的代謝物進(jìn)行定量分析，重復(fù)性更好、靈敏度更高［17］。

獲取代謝組學(xué)數(shù)據(jù)的兩種最常見的分析方法是核磁共振光譜（NMR）和質(zhì)譜（MS）。NMR 是基于能量吸收和由于外部磁場(chǎng)變化而使原子核重新發(fā)射的原理的光譜技術(shù)［18］，其優(yōu)勢(shì)在于具有很高的可重復(fù)性和定量性，且不會(huì)對(duì)樣本造成破壞，但與此相對(duì)的是靈敏度較低［19］。MS 通過質(zhì)荷比（m/z）和離子化合物通過相對(duì)強(qiáng)度獲取光譜數(shù)據(jù)［20］，具有很高的靈敏度和特異度以及良好的動(dòng)態(tài)范圍，這使其特別適合靶向代謝組學(xué)研究。代謝組學(xué)中MS 的主要弱點(diǎn)之一是定量分析，所用樣品制備類型及其分子環(huán)境會(huì)影響信號(hào)強(qiáng)度［21］?；贛S 的代謝組學(xué)通常在分離步驟之后進(jìn)行，這會(huì)降低生物樣品的復(fù)雜性，并允許在不同時(shí)間對(duì)不同分子集合進(jìn)行MS分析［18］。MS 技術(shù)中最常用的分離技術(shù)是液相色譜（LC）和氣相色譜（GC）色譜柱，分別稱為L(zhǎng)C-MS 技術(shù)和GC-MS 技術(shù)［22］。GC-MS 相對(duì)穩(wěn)定、靈敏度高，具有出色的分離再現(xiàn)性，使用商業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)和軟件即可輕松鑒定代謝物，但樣品前處理工作量大，只能鑒定易揮發(fā)物質(zhì)且難以進(jìn)行新的化合物；而LC-MS 技術(shù)具有更高的靈敏度、更廣泛的代謝物檢測(cè)范圍和多樣化的方法，但穩(wěn)定性更差，化合物鑒定更困難［23］。

2 代謝組學(xué)在兒童哮喘中的應(yīng)用

代謝組學(xué)研究最常用的樣本包括呼出氣、尿液、糞便、血液（血清和血漿），肺泡灌洗液和痰誘導(dǎo)樣本由于其侵入性及技術(shù)的復(fù)雜性，在臨床取樣時(shí)較少見。樣本選擇取決于研究問題的相關(guān)性和實(shí)際操作的可行性。關(guān)于不同樣本的生理特征、優(yōu)缺點(diǎn)以及相關(guān)注意事項(xiàng)詳見表1。

表1 代謝組學(xué)常見檢測(cè)樣本的比較Table 1 Comparison of common samples for metabonomics analysis of childhood asthma

2.1 血漿和血清代謝組學(xué) 血漿和血清是代謝組學(xué)分析使用最廣泛的樣本類型，用于研究各種疾病以揭示潛在的生物標(biāo)志物。兩者均有很好的重現(xiàn)性，且兩者之間有很高的相關(guān)性，但血清樣品的濃度、靈敏度和可靠性更高［33-34］。血漿和血清相比其他類型的樣本，優(yōu)勢(shì)在于能反映樣本采集時(shí)生理狀態(tài)的全局視圖，但缺點(diǎn)在于差異缺乏組織特異性。CHECKLEY 等［35］在一項(xiàng)包含100 名兒童的病例對(duì)照研究中使用LC-MS 技術(shù)對(duì)血清中的18 種代謝物進(jìn)行代謝組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，哮喘患兒的還原型谷胱甘肽濃度比對(duì)照組高70%。谷胱甘肽是一種三肽硫醇，能通過谷胱甘肽過氧化物酶清除自由基，并與呼吸道反應(yīng)性以及炎癥調(diào)節(jié)有關(guān)。哮喘患者肺部和血液中的谷胱甘肽升高是對(duì)相關(guān)氧化應(yīng)激的適應(yīng)性反應(yīng)［36］。FITZPATRICK 等［37］在兒童血漿樣本中使用了非靶向LC-MS技術(shù)來區(qū)分輕度和重度哮喘，并確定了與哮喘嚴(yán)重程度相關(guān)的兩個(gè)代謝途徑：甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝途徑以及N-?；掖及泛蚇-?；D(zhuǎn)移酶途徑。絲氨酸是包括甘氨酸和半胱氨酸在內(nèi)的幾種氨基酸的前體，甘氨酸和半胱氨酸是重要的抗氧化劑谷胱甘肽的必須成分。N-?；掖及妨字怯赡は嚓P(guān)的N-?；D(zhuǎn)移酶形成的，可響應(yīng)細(xì)胞損傷而代謝為N-酰基乙醇胺，并在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和抗氧化應(yīng)激的細(xì)胞保護(hù)中發(fā)揮重要作用。兒童重度哮喘可能與抗氧化劑谷胱甘肽失衡有關(guān)［38］，患兒氣道［39］和體循環(huán)［40］中的谷胱甘肽水平降低，導(dǎo)致氣道炎性增加和細(xì)胞功能受損。在成人研究中，哮喘患者體循環(huán)中的谷胱甘肽水平較正常人降低，但并無明顯差異［41-42］，這可能與紅細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激的補(bǔ)償反應(yīng)有關(guān)［43］；有趣的是，在COMHAIR 等［41］的研究中，患有嚴(yán)重氣流受限的哮喘患者傾向于增加血清谷胱甘肽，這與CHECKLEY 等［35］在哮喘兒童中的研究一致。

2.2 呼出氣代謝組學(xué) 近幾年，呼出氣中代謝成分的分析受到廣泛關(guān)注，因?yàn)槠涫且环N非侵入性的方法，具有提供有關(guān)下呼吸道有價(jià)值的臨床信息的潛力。目前兒童哮喘領(lǐng)域中大多數(shù)研究應(yīng)用GC-MS 技術(shù)來研究單個(gè)呼吸中含有的揮發(fā)性有機(jī)化合物（VOC）或使用電子鼻（eNOSE）技術(shù)來研究VOC混合物，這些化合物來源可以是外源（細(xì)菌）或內(nèi)源（細(xì)胞）。盡管GC-MS 存在需要訓(xùn)練有素的研究人員和無法獲得實(shí)時(shí)在線調(diào)查結(jié)果的缺點(diǎn)，其仍然被認(rèn)為是呼出氣分析的“金標(biāo)準(zhǔn)”，因?yàn)槠淠軌蜃R(shí)別化合物，從而深入了解病理生理過程，并驗(yàn)證檢測(cè)到的化合物的來源［44］。而eNOSE 技術(shù)快速、便宜、容易使用，因此是一種具有吸引力的護(hù)理技術(shù)［44］。一項(xiàng)前瞻性研究使用GC-MS 技術(shù)分析VOC 發(fā)現(xiàn)，6 種VOC的組合能預(yù)測(cè)兒童哮喘的惡化（靈敏度：100%，特異度：93%）［45］，VOC 以烴類為主。另一項(xiàng)針對(duì)兒童的前瞻性研究表明，VOC 分析（GC-MS 法）可以準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)采樣后14 d 的哮喘發(fā)作（靈敏度：88%，特異度：75%）［46］，VOC 包含了3 種醛類、1 種烴類，與前一研究相似。醛類和烴類化合物均與氧化劑對(duì)細(xì)胞膜中不飽和脂肪酸的損傷有關(guān)［47-49］。在成人中也有類似研究，用于預(yù)測(cè)停止吸入皮質(zhì)類固醇后哮喘的控制［50-51］，正確分類率可達(dá)95%，有助于患者的哮喘檢測(cè)和管理。得益于無創(chuàng)、易于獲得且能反映氣道生理的優(yōu)勢(shì)，呼出氣代謝組學(xué)在監(jiān)測(cè)氣道炎癥方面的潛力巨大。

2.3 腸道代謝組學(xué) 腸道代謝組學(xué)在探索腸道菌群對(duì)健康的廣泛影響中受到了越來越多的關(guān)注，糞便是一種非侵入性樣本，是腸道消化過程的最終產(chǎn)物［52］，越來越多的研究表明，腸道微生物在哮喘發(fā)展中發(fā)揮著重要作用［53］。CHIU 等［54］通過NMR 技術(shù)對(duì)85 名兒童的糞便進(jìn)行代謝組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，糞便丁酸鹽的減少與螨蟲特異性IgE 水平升高以及兒童哮喘的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。而丁酸鹽對(duì)哮喘的改善作用，在另外兩篇文獻(xiàn)中得到了進(jìn)一步證實(shí)［55-56］。丁酸鹽是結(jié)腸細(xì)胞的重要能量來源，對(duì)于結(jié)腸完整性至關(guān)重要［57］。通過保留腸道屏障，丁酸鹽可防止細(xì)菌異位至循環(huán)系統(tǒng)；此外丁酸鹽通過抑制HDAC 活性來抑制2 型固有淋巴細(xì)胞（ILC2）增殖和GATA3表達(dá)，從而減少細(xì)胞因子IL-5 和IL-13 的產(chǎn)生［58］。在成人中，丁酸鹽被證明能誘導(dǎo)嗜酸粒細(xì)胞的凋亡以及抑制嗜酸粒細(xì)胞黏附于內(nèi)皮，并阻止其向嗜酸粒細(xì)胞趨化因子-2 的遷移，這可能與組蛋白去乙?；傅囊种朴嘘P(guān)［59］。此外，丁酸鹽還可促進(jìn)抗原特異性B 淋巴細(xì)胞中IL-10 基因的轉(zhuǎn)錄和IL-10 的表達(dá)［60］，而產(chǎn)生IL-10 的B 淋巴細(xì)胞具有免疫抑制功能［61］。除丁酸鹽外，多不飽和脂肪酸和膽汁酸均有助于哮喘的改善，而鞘脂和色氨酸代謝物作為潛在的重要途徑值得未來進(jìn)行深入研究（表2）。腸道代謝物代表宿主和腸道菌群之間的化學(xué)相互作用，并具有無創(chuàng)、易于收藏和可重復(fù)收集等優(yōu)勢(shì)，但由于腸道代謝物可衍生自宿主、微生物群或包含飲食在內(nèi)的外源性來源，所以很難查明代謝物的具體來源。

表2 腸道代謝物及其在哮喘發(fā)展中的作用機(jī)制Table 2 Roles of intestinal metabolites involved in the pathogenesis of childhood asthma

2.4 尿液代謝組學(xué) 尿液代謝組學(xué)是近年來發(fā)現(xiàn)非侵入性生物標(biāo)志物的一個(gè)重要領(lǐng)域，其可以檢測(cè)出針對(duì)特定疾病或治療干預(yù)的細(xì)微代謝差異。與其他生物流體相比，尿液的特點(diǎn)是易于收集、代謝產(chǎn)物豐富、能反映體內(nèi)所有生化途徑的不平衡，并且在腎功能正常的情況下，尿液被過濾、細(xì)胞污染程度低［75］。SAUDE 等［76］對(duì)135 名兒童的尿液應(yīng)用靶向NMR，篩選出23 種代謝物鑒別穩(wěn)定哮喘患兒與健康對(duì)照組兒童、28 種代謝物鑒別穩(wěn)定哮喘患兒與急性哮喘患兒，盡管該研究并沒有將飲食、采樣時(shí)間、藥物的使用情況等混雜因素進(jìn)行亞組分析，但也為后來兒童哮喘的代謝組學(xué)研究提供了參考和方向。一項(xiàng)基于兩個(gè)獨(dú)立的兒童哮喘前瞻性隊(duì)列研究發(fā)現(xiàn)，哮喘母親所生的健康新生兒在4 周齡時(shí)，可以通過尿液樣本中的代謝譜將健康兒童與正在發(fā)展為哮喘的兒童區(qū)分開，并且兩個(gè)出生隊(duì)列有14 個(gè)重疊的區(qū)分特征［77］。其他研究也表明，生命最初幾年的尿液代謝組學(xué)譜可預(yù)測(cè)反復(fù)喘息和哮喘［78-79］。與兒童研究不同，成人哮喘尿液代謝組學(xué)更多關(guān)注哮喘與慢性阻塞性肺疾?。–OPD）的鑒別診斷，在ADAMKO 等［80］的研究中，16 種尿液代謝物能將病情惡化1～2 周后的哮喘及COPD 患者進(jìn)行分類，準(zhǔn)確率達(dá)94%，對(duì)非病情惡化的哮喘患者的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為90.9%，這項(xiàng)研究與SAUDE 等［76］的研究有3 個(gè)重疊的化合物，分別是二甲胺、葡萄糖和1-甲基煙酰胺，二甲胺與一氧化氮途徑有關(guān)［81］，高血糖和1-甲基煙酰胺與哮喘惡化有關(guān)［82-83］。與哮喘生物標(biāo)志物的篩選相比，預(yù)測(cè)哮喘的發(fā)生、發(fā)展可能更具臨床意義［84］。

3 代謝組學(xué)的局限性

代謝組學(xué)為研究環(huán)境與宿主之間的相互作用提供了獨(dú)特的機(jī)會(huì)，因?yàn)榇x物代表對(duì)環(huán)境刺激以及上游遺傳和調(diào)控修飾（表觀遺傳學(xué)、轉(zhuǎn)錄、翻譯后修飾）的響應(yīng)，但是，代謝組學(xué)本身可能無法捕獲相互作用過程中環(huán)境因素特征的范圍或宿主反應(yīng)的范圍。首先，代謝物的水平受許多混雜因素的影響，例如性別［11］、年齡［12］、BMI［13］、飲食［14］、吸煙、藥物［15］、體力活動(dòng)、并發(fā)癥等；其次，代謝組學(xué)研究過程相關(guān)操作，例如樣品收集時(shí)間［85］、收集程序、前處理［86］、存儲(chǔ)［34］、凍融［87］、提取程序［88］、稀釋、分析方法等，也會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響，所以，規(guī)范的操作可以減少偏差，增加結(jié)果的可靠性；最后，在數(shù)據(jù)處理過程中，由于變量數(shù)常大于樣本數(shù)量，所以數(shù)據(jù)會(huì)過度擬合，從而導(dǎo)致錯(cuò)誤。為解決過度擬合的問題，就需要足夠的樣本量，使用內(nèi)部交叉驗(yàn)證或Bootstrapping 算法對(duì)模型進(jìn)行校準(zhǔn)，并在獨(dú)立的外部樣本中對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

4 代謝組學(xué)的發(fā)展方向

遺傳、調(diào)控和環(huán)境刺激在生物系統(tǒng)中觸發(fā)了廣泛的輸入-輸出級(jí)聯(lián)，疾病的發(fā)病機(jī)制需要在這種廣泛的生物學(xué)系統(tǒng)背景下進(jìn)行驗(yàn)證。代謝組學(xué)是整合來自各種組學(xué)研究（基因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組、代謝組和微生物組）的數(shù)據(jù)，可能會(huì)為在復(fù)雜的生物系統(tǒng)背景下理解疾病的發(fā)展過程提供更大的機(jī)會(huì)［89］。盡管單個(gè)組學(xué)研究得到了大量可訪問的數(shù)據(jù)，但是通過組學(xué)整合來識(shí)別新的生物機(jī)制尚未達(dá)到預(yù)期，原因是高度異構(gòu)數(shù)據(jù)整合困難，以及目前所謂的大數(shù)據(jù)集與使用無監(jiān)督學(xué)習(xí)方法有效工作所需的數(shù)據(jù)集相比仍然很小，并且難以達(dá)到所需的精度［90］。為了在多組學(xué)數(shù)據(jù)中實(shí)現(xiàn)高信息含量，仍需要遵守相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，并以高度系統(tǒng)化的方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

其次，通過基于人工智能的機(jī)器學(xué)習(xí)方法，從數(shù)據(jù)中學(xué)習(xí)復(fù)雜的功能關(guān)系，而無需先驗(yàn)證假設(shè)。機(jī)器學(xué)習(xí)模型的原理是在一個(gè)生物數(shù)據(jù)集上訓(xùn)練，然后使用檢測(cè)到的模式來預(yù)測(cè)另一個(gè)。機(jī)器學(xué)習(xí)在典型的生物學(xué)應(yīng)用中分為兩大類，即有監(jiān)督學(xué)習(xí)和無監(jiān)督學(xué)習(xí)。在有監(jiān)督學(xué)習(xí)中，機(jī)器學(xué)習(xí)算法的目標(biāo)是從已知分組的訓(xùn)練數(shù)據(jù)集推算得出疾病的類別，屬于分類算法，其功能是預(yù)測(cè)；相反，在無監(jiān)督學(xué)習(xí)中，目標(biāo)是從“未標(biāo)記”的樣本推斷可能的集合，屬于聚類算法，其功能是降維，對(duì)樣本間差異較小的特征不敏感。

此外，哮喘是一種復(fù)雜而異質(zhì)的疾病，可分為不同的表型及內(nèi)型，相同表型的患者，對(duì)同一藥物的反應(yīng)不盡相同。精確的內(nèi)型是通過特定的生物標(biāo)志物將病理生物學(xué)機(jī)制和可見特性聯(lián)系起來，其有望將哮喘細(xì)分為不同亞型并為個(gè)性化治療方案開辟道路。多組學(xué)數(shù)據(jù)為超越臨床表型的內(nèi)分型提供了機(jī)會(huì)，特別是與上述機(jī)器學(xué)習(xí)聚類算法結(jié)合使用時(shí)。將多組學(xué)數(shù)據(jù)與聚類算法結(jié)合使用，可以識(shí)別同質(zhì)的哮喘內(nèi)型，這些內(nèi)型可能對(duì)特定的、個(gè)性化的治療方案做出相似反應(yīng)。

隨著代謝組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，不再將代謝物視為下游產(chǎn)物，代謝物除了是飲食、環(huán)境、遺傳、微生物共同作用的結(jié)果，其還能調(diào)控基因表達(dá)、RNA代謝和蛋白質(zhì)活性，在哮喘的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用。通過對(duì)血液、呼出氣、糞便、尿液等樣本的檢測(cè)，代謝組學(xué)可提供生物標(biāo)志物的篩選、發(fā)病機(jī)制的闡釋、疾病的預(yù)測(cè)與分度、呼吸道炎癥的監(jiān)測(cè)。此外，隨著系統(tǒng)生物學(xué)的發(fā)展，運(yùn)用多組學(xué)融合手段對(duì)疾病進(jìn)行更加全面地研究也逐漸成為趨勢(shì)。未來，將基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、微生物組學(xué)和生物信息學(xué)結(jié)合，有利于為兒童哮喘的研究提供可信度更高的數(shù)據(jù)，并有望借此區(qū)分不同哮喘亞型，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療和個(gè)體化治療。

作者貢獻(xiàn)：黃宇戈、羅連響進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，文章的可行性分析；吳銳劍進(jìn)行文獻(xiàn)的收集、整理，以及撰寫論文；黃宇戈進(jìn)行文章的質(zhì)量控制及最終文章的修改，對(duì)文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。

本文文獻(xiàn)檢索策略：

檢索Pubmed 數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索時(shí)間為建庫(kù)至2020 年12 月。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）以檢索式metabolomics AND asthma AND （child OR children）檢索相關(guān)文獻(xiàn)；（2）盡量以近10 年文獻(xiàn)作為參考文獻(xiàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）重復(fù)文獻(xiàn)；（2）與“代謝組學(xué)”“兒童”無關(guān)文獻(xiàn)；（3）存在研究設(shè)計(jì)缺陷，質(zhì)量差的文獻(xiàn)。