臨床微生物檢驗和細菌耐藥性監(jiān)測的應用價值研究

李琳

[摘要] 目的 分析微生物檢驗工作和細菌耐藥性監(jiān)測工作開展的臨床意義。 方法 在盤錦遼油寶石花醫(yī)院檢驗科2019年3月至2020年8月接收的送檢微生物標本中選出2000份為對象，根據(jù)標本的來源臨床科室分為ICU組（n=650）、兒科組（n=350）、內(nèi)科組（n=450）、外科組（n=550），收集檢驗的病原微生物及對四組標本進行細菌耐藥性監(jiān)測。 結(jié)果 2000份微生物標本共培養(yǎng)出1765株病原菌，其中革蘭陰性菌占54.96%，高于革蘭陽性菌的40.79%（P<0.05），真菌僅占4.25%;1765株病原菌中共有507株耐藥菌株，耐藥菌株檢出率為28.73%;四組的耐藥菌株檢出率：ICU組為34.53%，兒科組為16.06%，內(nèi)科組為22.97%，外科組為31.86%，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;在耐藥性監(jiān)測中：革蘭陽性菌對常見的抗生素耐藥率偏高，對萬古霉素和利奈唑胺的耐藥率較低;革蘭陰性菌對多數(shù)抗生素的耐藥率居中，其中銅綠假單胞菌對多數(shù)抗生素的耐藥率偏低。 結(jié)論 臨床微生物檢驗和細菌耐藥性監(jiān)測的開展有利于臨床醫(yī)師明確患者的病原菌，并對藥物治療提供指導，選擇敏感抗生素治療，從而提高治療效果。

[關鍵詞] 微生物檢驗;病原微生物;細菌耐藥性監(jiān)測;耐藥率

[中圖分類號] R446.5? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）02-0123-04

Research on the application value of clinical microbiological test and bacterial drug resistance monitoring

LI Lin

Department of Clinical Laboratory， Panjin Liaoyou Baoshihua Hospital， Panjin? ?124010， China

[Abstract] Objective To investigate the application value of bacterial drug resistance monitoring and clinical microbiological test. Methods A total of 2000 microbiological specimens admitted to the department of clinical laboratory in Panjin Liaoyou Baoshihua Hospital from March 2019 to August 2020 were selected as the research objects. According to the source of clinical departments， the specimens were divided into the intensive care unit （ICU） group（n=650）， the pediatrics group（n=350）， the internal medicine group（n=450） and the surgery group （n=550）. The pathogenic microorganisms were collected and the bacterial drug resistance of 4 groups of specimens was monitored. Results A total of 1765 strains of pathogenic bacteria were cultured from 2000 microbial specimens， of which Gram-negative bacteria accounted for 54.96%. It was higher than 40.79% of the probability of Gram-positive bacteria（P<0.05）. And fungi only accounted for 4.25%. There were 507 drug-resistant strains in 1765 pathogenic bacteria， and the detection rate of drug-resistant strains was 28.73%. The detection rates of drug-resistant strains in four groups were 34.53% in the ICU group， 16.06% in the pediatrics group，22.97% in the internal medicine group and 31.86% in the surgery group， with statistically significant differences（P<0.05）. The results of several main Gram-positive bacteria and Gram-negative bacteria showed that the drug resistance rates of Gram-positive bacteria （Staphylococcus aureus， Streptococcus pneumoniae and Enterococcus） were higher than those of most antibiotics， while the drug resistance rates of vancomycin and linezolid were relatively lower. Meanwhile，the resistance rates of Gram-positive bacteria （Escherichia coli， Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella） to most antibiotics were in the middle， and the resistance rate of Pseudomonas aeruginosa to most antibiotics was relatively lower. Conclusion The development of clinical microbiological test and bacterial drug resistance monitoring is helpful for clinicians to identify the pathogenic bacteria of patients， provide guidance for drug treatment， and choose sensitive antibiotics to improve the therapeutic efficacy.

[Key words] Microbiological test; Pathogenic microorganisms; Bacterial drug resistance monitoring; Drug resistance rate

細菌耐藥性問題是指抗生素與細菌接觸后，細菌的代謝發(fā)生改變，避免被藥物殺滅[1-3]。近年來細菌耐藥性問題越來越多，抗菌藥物的治療效果明顯下降，關于預防細菌耐藥性及延緩細菌耐藥性逐漸成為重點研究[4-5]。細菌作為主要的病原體之一，其可引起多種疾病，當機體免疫力降低時，細菌更容易侵襲感染，因此抗菌藥物的合理應用有重要意義。耐藥菌株的出現(xiàn)使得抗菌藥物的療效大大降低，影響患者的早日康復。為確保細菌感染性疾病患者治療中藥物使用的規(guī)范性、合理性，檢驗科的微生物檢驗工作中根據(jù)實際情況進行必要的細菌耐藥性監(jiān)測也成為重要的任務，以助于臨床醫(yī)師合理選擇抗菌藥物，提高治療效果[6]。本研究選取2000份微生物標本為例，探究細菌耐藥性監(jiān)測的應用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取盤錦遼油寶石花醫(yī)院檢驗科2019年3月至2020年8月期間接收的送檢微生物標本2000份為對象，根據(jù)標本來源科室分組：ICU組共有650份標本，其中血液標本222份，痰液標本275份，分泌物標本87份，尿液標本66份;兒科組共有350份標本，其中血液標本120份，痰液標本141份，分泌物標本52份，尿液標本37份;內(nèi)科組共有450份標本，其中血液標本138份，痰液標本176份，分泌物標本75份，尿液標本61份;外科組共有550份標本，其中血液標本180份，痰液標本227份，分泌物標本80份，尿液標本63份。四組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 菌株鑒定? 本研究的2000份微生物標本均先進行細菌培養(yǎng)，依照常規(guī)工作流程將標本接種到血平板、巧克力平板、麥康凱培養(yǎng)基中，在35℃、5%～7% CO2環(huán)境下培養(yǎng)24～48 h，分離出可疑菌落后，最后用DL-96Ⅱ細菌測定系統(tǒng)進行細菌的鑒定。

1.2.2 耐藥性監(jiān)測? 將分離出來的細菌采用MIC法分析，觀察不同抗菌藥物的最低抑菌濃度。并參照CLSI近兩年的標準確定細菌的耐藥性。最后借助DL-96Ⅱ細菌測定系統(tǒng)的藥敏板條進行藥敏試驗，嚴格按照規(guī)范操作。

1.3 觀察指標

①統(tǒng)計本組2000份微生物標本中培養(yǎng)分離出的病原菌占比及進行病原菌鑒定后的分布狀況。②對ICU組、外科組、兒科組、內(nèi)科組分離出的病原菌進行耐藥性檢測，統(tǒng)計四組的耐藥菌株檢出率。③對分離出的革蘭陽性菌和革蘭陰性菌中概率排名前3位的細菌進行耐藥性檢測，統(tǒng)計常見抗菌藥物的耐藥率。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 24.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 菌株分布情況

本研究中，2000份微生物標本經(jīng)培養(yǎng)分離鑒定，共分離出1765株病原菌，其中真菌較少，僅占4.25%，革蘭陰性菌的占比率為54.96%，明顯高于革蘭陽性菌的40.79%（χ2=70.950，P=0.000<0.05）。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、腸球菌屬、克雷伯屬的占比較高。見表1。

2.2 耐藥菌株檢出率比較

1765株病原菌經(jīng)耐藥性檢測，共檢出507株耐藥菌株，檢出率為28.73%。ICU組患者的耐藥菌株檢出率最高，其次是外科組，明顯高于兒科組和內(nèi)科組檢出率（P<0.05）。見表2。

2.3 主要菌株對抗生素的耐藥性

①金黃色葡萄球菌對紅霉素、青霉素G、克林霉素的耐藥率均較高，超過50%，而利福平、利奈唑胺、萬古霉素的耐藥率較低。肺炎鏈球菌對紅霉素、青霉素G的耐藥率較高，對利奈唑胺、萬古霉素、莫西沙星的耐藥率較低。腸球菌屬對紅霉素、青霉素G、四環(huán)素、莫西沙星、苯唑西林的耐藥率較高，對利奈唑胺、萬古霉素的耐藥率較低。見表3。②大腸埃希菌對氨芐西林、氨曲南、環(huán)丙沙星、哌拉西林、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢唑林、左氧氟沙星等藥的耐藥率均較高，對厄他培南、呋喃妥因、亞胺培南、阿米卡星的耐藥率較低。銅綠假單胞菌對阿米卡星、頭孢吡肟的耐藥率較低，均在10%以下，對氨曲南、環(huán)丙沙星、哌拉西林、慶大霉素、頭孢他啶等藥的耐藥率居中，在10%～30%?？死撞畬俣鄶?shù)抗生素的耐藥率居中，其中對亞胺培南的耐藥率在10%以下。見表4。

3 討論

細菌有多種耐藥基因，隨著臨床上抗菌藥物的廣泛使用，細菌耐藥問題日益突出，多重耐藥菌株也越來越多，對感染類疾病的治療造成重大困擾，因此細菌耐藥問題是臨床研究的重點課題，是亟待解決的問題之一[7-8]。細菌的耐藥性可分為兩種：①天然耐藥，又被稱為固有耐藥，其關鍵在于細菌的染色體基因，經(jīng)過代代相傳，自身無變化，如臨床上常見的有鏈球菌對氨基糖苷類抗生素不敏感，腸道G-桿菌對青霉素類抗生素耐藥等就屬于天然耐藥，是由細菌的染色體基因?qū)е碌哪退幮?。②獲得性耐藥，這種是臨床上最為常見的耐藥，是指細菌在與抗生素接觸后，在質(zhì)粒介導下使得細菌無法被抗生素殺滅，最常見的是金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶。另外，獲得性耐藥問題并不會因不再接觸抗生素而消失，還可能經(jīng)質(zhì)粒將耐藥基因轉(zhuǎn)移到細菌的染色體上，代代相傳，形成天然耐藥。

細菌耐藥性的產(chǎn)生的原因：①細菌生存過程中產(chǎn)生滅活酶，這是細菌耐藥性產(chǎn)生的主要機制之一，使得抗生素在殺滅細菌作用發(fā)揮前就被細菌的滅活酶破壞失去活性，無法起到預期的抗菌效果。常見的滅活酶有β-內(nèi)酰胺酶、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶、氨基糖胺類鈍化酶等[9-10];②抗菌藥物作用的靶位變化，抗生素對細菌的作用靶位被細菌所產(chǎn)生的酶等修飾或是發(fā)生突變，使得作用靶位發(fā)生一定變化，無法發(fā)揮抗菌效果;或抗菌靶位的結(jié)構(gòu)等的變化，使得藥物與細菌的親和力降低，使得藥物與細菌無法結(jié)合，從而喪失抗菌活性。例如：鏈霉素是常用的抗生素，其作用靶位是30S亞基上的S12蛋白，一旦S12蛋白的結(jié)構(gòu)等發(fā)生一定變化，就會導致鏈霉素無法順利與其結(jié)合，從而產(chǎn)生耐藥性;③當細菌的細胞壁通透性改變，使得抗菌藥物無法順利進入細菌體內(nèi)[11]。當細菌接觸到抗生素后，自主改變通道蛋白的性質(zhì)、數(shù)量等，從而使得細胞的膜通透性改變，導致獲得性耐藥問題的發(fā)生。如革蘭陽性菌多數(shù)對多黏菌素類抗生素的耐藥性較高，主要是因為抗生素難以通透細菌的厚細胞壁導致的。也有細菌的細胞膜具有能量依賴性泵出系統(tǒng)，使得進入的抗生素能向外泵出，從而達到預期的抗菌效果。

本研究中，對2000份微生物標本共分離培養(yǎng)出1765株病原菌，其中革蘭陰性菌的占比為54.96%，高于革蘭陽性菌的40.79%（P<0.05），而真菌則較少，僅占4.25%，常見的病原菌有金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌屬、克雷伯屬、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌。對這幾種概率較高的革蘭陽性菌、革蘭陰性菌分別進行細菌耐藥性監(jiān)測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)革蘭陽性菌對多數(shù)抗生素耐藥率較高，其中萬古霉素、利奈唑胺的耐藥率較低，可有效殺滅細菌，因此在臨床用藥時可結(jié)合患者的具體情況用藥，選擇萬古霉素等抗生素，提高抗菌效果。大腸埃希菌、克雷伯屬對喹諾酮類、β-內(nèi)酰胺類藥物的耐藥率較高，增加了臨床治療的難度，這主要是因為大腸埃希菌等細菌能產(chǎn)生超廣譜的β-內(nèi)酰胺酶，β-內(nèi)酰胺酶能水解滅活青霉素、頭孢菌素，而且質(zhì)粒介導在菌株之間傳遞，最終導致細菌對青霉素、頭孢菌素的耐藥性偏高。但是對亞胺培南則較為敏感，故而可將亞胺培南用于革蘭陰性菌引起的感染治療中[12-13]。

本研究進行細菌耐藥性監(jiān)測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ICU組患者的耐藥菌株檢出率最高，其次是外科組，明顯高于內(nèi)科組和兒科組的耐藥菌株檢出率（P<0.05）。筆者認為，ICU收治的患者病情危重，且治療周期長，侵入性治療操作多，更易發(fā)生感染，使得耐藥菌數(shù)也相應較多。外科患者則有暴露的傷口，且多數(shù)患者伴有不同程度的炎癥反應，也更容易引起耐藥問題。因此臨床上需加強對ICU、外科患者的監(jiān)測，重視細菌耐藥性問題的監(jiān)測觀察，為患者選擇敏感抗生素治療，促進患者早日康復[14-15]。

綜上所述，細菌耐藥性已成為感染類疾病治療中的難點，在微生物檢驗工作中，臨床上也需結(jié)合實際情況進行定期、不定期的耐藥性監(jiān)測，觀察細菌耐藥性問題的現(xiàn)狀、發(fā)展趨勢等，同時也指導臨床醫(yī)師根據(jù)患者的耐藥狀況合理選用抗生素，為合理使用抗菌藥物提供指導，提高用藥的有效性和安全性，避免耐藥菌株、多重耐藥菌株的出現(xiàn)，規(guī)范用藥，值得推廣。

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（收稿日期：2021-08-09）