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    神經(jīng)酸口服乳劑的處方及制備工藝優(yōu)化

    2022-03-04 02:33:59陳文靜付加雷孫丹丹于蓓蓓生立嵩閆雪生
    中國藥房 2022年4期
    關(guān)鍵詞:高效液相色譜法

    陳文靜 付加雷 孫丹丹 于蓓蓓 生立嵩 閆雪生

    中圖分類號 R943 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408(2022)04-0458-07

    DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.04.13

    摘 要 目的 制備神經(jīng)酸口服乳劑,對其處方及制備工藝進(jìn)行優(yōu)化,并考察其穩(wěn)定性。方法 通過機(jī)械法制備神經(jīng)酸口服乳劑。在單因素實驗的基礎(chǔ)上,以乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、離心穩(wěn)定常數(shù)(Ke)、粒徑為指標(biāo),采用正交實驗設(shè)計,以油酸用量、辛基苯酚聚氧乙烯醚-10用量、丙二醇用量為因素,對其處方進(jìn)行優(yōu)化;以乳化溫度、剪切時間、高壓均質(zhì)壓力、高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)為因素,對其制備工藝進(jìn)行優(yōu)化;采用高效液相色譜法測定神經(jīng)酸含量,采用高溫試驗、加速試驗和長期試驗考察神經(jīng)酸口服乳劑的穩(wěn)定性。結(jié)果 最優(yōu)處方及制備工藝為神經(jīng)酸原料藥1 g、油酸用量5%、辛基苯酚聚氧乙烯醚-10用量4%、丙二醇用量2%、乳化溫度60 ℃、剪切時間2 min、高壓均質(zhì)壓力40 MPa、高壓均質(zhì)循環(huán)2次。經(jīng)3次實驗驗證,所得神經(jīng)酸口服乳劑的平均粒徑為158.05 nm(RSD=1.58%,n=3),平均Ke為0.39(RSD=1.49%,n=3),外觀呈均一乳白色,均無分層現(xiàn)象。高溫試驗結(jié)果顯示,神經(jīng)酸口服乳劑在高溫環(huán)境中易出現(xiàn)分層現(xiàn)象,神經(jīng)酸的含量有所增加;加速試驗及長期試驗結(jié)果顯示,神經(jīng)酸口服乳劑在室溫下放置6個月的外觀、神經(jīng)酸含量均無明顯變化。結(jié)論 所得最優(yōu)處方及制備工藝穩(wěn)定、可行,可用于神經(jīng)酸口服乳劑的制備;神經(jīng)酸口服乳劑不適宜放置于高溫環(huán)境中,在室溫環(huán)境下放置6個月的穩(wěn)定性較好。

    關(guān)鍵詞 神經(jīng)酸口服乳劑;處方優(yōu)化;制備工藝優(yōu)化;正交實驗設(shè)計;高效液相色譜法;樣品穩(wěn)定性

    Optimization of formulation and preparation technology of Neuritic acid oral emulsion

    CHEN Wenjing1,F(xiàn)U Jialei2,SUN Dandan2,YU Beibei2,SHENG Lisong2,YAN Xuesheng2(1. School of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China; 2. Shandong Academy of Chinese Medicine, Jinan 250014, China)

    ABSTRACT? ?OBJECTIVE To prepare Neuritic acid oral emulsion, to optimize its formulation and preparation technology, and to investigate its stability. METHODS Neuritic acid oral emulsion was prepared by mechanical method. On the basis of single factor experiment, the appearance, centrifugal stability, centrifugal stability constant (Ke) and particle size of the emulsion as indexes, the formulation was optimized by orthogonal design, taking the dosage of oleic acid, octylphenol polyoxyethylene ether-10 and propylene glycol as factors, the preparation technology was optimized by taking emulsification temperature, shear time, pressure of high-pressure homogenization and cycle times of high-pressure homogenization as factors. The content of neuritic acid was determined by high performance liquid chromatography. The stability of Neuritic acid oral emulsion was investigated by high temperature test, accelerated test and long-term test. RESULTS The optimal formulation and preparation technology were as follows: neuritic acid of 1 g, oleic acid of 5%, octylphenol polyoxyethylene ether-10 of 4%, propylene glycol of 2%, emulsification temperature of 60 ℃ , shear time of 2 min, homogenization pressure of 40 MPa and cycle times of twice. After three experiments, the average particle size of Neuritic acid oral emulsion was 158.05 nm (RSD=1.58%, n=3), the average Ke was 0.39 (RSD=1.49%, n=3), and the appearance was uniform milky white, there was no stratification. The results of high temperature test showed that Neuritic acid oral emulsion was prone to stratification in high temperature environment, and the content of neuritic acid increased. The results of accelerated test and long-term test showed that there was no significant change in the appearance or the content of neuritic acid when Neuritic acid oral emulsion was placed at room temperature for 6 months. CONCLUSIONS The formulation and preparation technology are stable and feasible, and can be used for the preparation of Neuritic acid oral emulsion. Neuritic acid oral emulsion should not be placed in high temperature environment. It has good stability at room temperature for 6 months.

    KEYWORDS? ?Neuritic acid oral emulsion; formulation optimization; preparation technology optimization; orthogonal design; high performance liquid chromatography; sample stability

    神經(jīng)酸是一種含24個碳原子和1個雙鍵的不飽和脂肪酸,最早被發(fā)現(xiàn)于哺乳動物的神經(jīng)組織中[1]。神經(jīng)酸是構(gòu)成大腦神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)組織的核心天然成分,能促進(jìn)受損神經(jīng)組織修復(fù)和再生,對防止腦神經(jīng)細(xì)胞衰老有很大作用[2]。神經(jīng)酸具有多種藥理活性,如健腦益智、增強(qiáng)免疫、防治腦病和艾滋病等[3-6]。由于神經(jīng)酸難溶于水、生物利用度低且不穩(wěn)定,需避光低溫保存,使得其臨床應(yīng)用受到限制。乳劑作為一種藥物傳遞系統(tǒng),具有改善藥物溶解度、提高生物利用度等特點(diǎn)[7]。因此,將水溶性差、脂溶性好的神經(jīng)酸制成乳劑可以有效避免其難溶于水和在制劑中分散不均等問題。但乳劑為熱力學(xué)不穩(wěn)定體系,易發(fā)生分層、破裂、絮凝、轉(zhuǎn)相等現(xiàn)象,故需要篩選出合適的處方及工藝參數(shù),以保證所得乳劑的穩(wěn)定性。基于此,本研究利用機(jī)械法制備神經(jīng)酸口服乳劑,采用正交實驗設(shè)計,以神經(jīng)酸口服乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、離心穩(wěn)定常數(shù)(centrifugal stability constant,Ke)、粒徑為指標(biāo),油酸用量、乳化劑用量、丙二醇用量為因素,對其處方進(jìn)行優(yōu)化;以乳化溫度、剪切時間、高壓均質(zhì)壓力、高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)為因素,對其制備工藝進(jìn)行優(yōu)化;采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法測定神經(jīng)酸的含量,采用高溫、加速和長期試驗考察神經(jīng)酸口服乳劑的穩(wěn)定性,旨在為神經(jīng)酸口服乳劑的研究及開發(fā)提供依據(jù)。

    1 材料

    1.1 主要儀器

    本研究所用主要儀器有UV-Vis2450型紫外-可見分光光度儀(日本Shimadzu公司),UltiMate 3000型HPLC儀及配備的自動進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測器(美國Thermo Fisher Scientific公司),BSM 220.4型電子天平(上海卓精電子科技有限公司),BT-1100型電子天平(啟東友銘衡器有限公司),HH-4型數(shù)顯電子恒溫水浴鍋(常州博遠(yuǎn)實驗分析儀器廠),MS-H280型恒溫磁力攪拌器(山東博科科學(xué)儀器有限公司),JRJ-300-Ⅰ型剪切乳化攪拌機(jī)(上海標(biāo)本模型廠),F(xiàn)B-110Q型高壓均質(zhì)機(jī)(上海勵途機(jī)械設(shè)備工程有限公司),90 Plus PALS型納米粒度電位儀(北京海鑫瑞科技有限公司),X-30R型全能高速冷凍離心機(jī)(美國Beckman Coulter公司)等。

    1.2 主要藥品與試劑

    神經(jīng)酸原料藥(批號20190015,純度>85%)購自西安萬方生物科技有限公司;神經(jīng)酸對照品(批號20201115,純度>98%)購自南京普怡生物科技有限公司;油酸(批號20201030)購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;乳化劑辛基苯酚聚氧乙烯醚-10(octylphenol polyoxyethylene ether-10,OP-10,批號C12199604)購自上海麥克林生化科技有限公司;丙二醇(批號100420210103)購自湖南爾康制藥股份有限公司;甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純,水為純凈水。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 神經(jīng)酸口服乳劑的制備

    取神經(jīng)酸原料藥1 g,溶于一定量的油酸中,于適宜乳化溫度下保溫,作為油相;取一定量的OP-10與丙二醇,溶于適量水中,于同一乳化溫度下充分溶解,作為水相;將上述油相緩慢滴入水相中,攪拌,加完油相后再繼續(xù)攪拌5 min,然后加入剩余處方量的水(于同一乳化溫度下保溫),于剪切乳化攪拌機(jī)中以4 000 r/min剪切一定時間,充分混合均勻,制成初乳。取初乳,在一定壓力下于高壓均質(zhì)機(jī)中循環(huán)數(shù)次,即得[8]。

    2.2 神經(jīng)酸口服乳劑的評價指標(biāo)

    2.2.1 外觀

    合格的乳劑應(yīng)符合如下外觀特征:靜止時不分層,無油滴漂浮在表面,振搖后不掛壁或液體能迅速滑落,色澤均一。

    2.2.2 離心穩(wěn)定性

    取神經(jīng)酸口服乳劑適量,置于離心管中,以4 000 r/min離心15 min,不應(yīng)有分層現(xiàn)象[9]。如有分層現(xiàn)象標(biāo)記為“-”,無需測定粒徑及Ke;如無分層現(xiàn)象標(biāo)記為“+”,需測定粒徑及Ke。

    2.2.3 粒徑的測定

    取神經(jīng)酸口服乳劑50 μL,用水稀釋80倍,裝入專用樹脂比色皿中,置于納米粒度電位儀中,于溫度25 ℃、測試角90°條件下測定3次,計算平均粒徑。普通乳劑粒徑范圍為1~100 μm,亞微乳粒徑范圍為0.1~1.0 μm,口服乳劑粒徑范圍符合兩者之一即可[10],且粒徑越小,乳劑越優(yōu)[7]。

    2.2.4 Ke的測定

    取神經(jīng)酸口服乳劑適量,置于離心管中,以4 000 r/min離心15 min,取出,用移液槍精密量取試管底部樣品50 μL,置于10 mL量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,以水為空白,采用紫外-可見分光光度計于500 nm波長處測定吸光度(A)[11]。同法測定未經(jīng)離心的神經(jīng)酸口服乳劑的吸光度(A0),按下式計算Ke:Ke=(A0-A)/A0(0

    2.3 神經(jīng)酸口服乳劑處方的優(yōu)化

    2.3.1 單因素實驗

    (1)油酸用量:取神經(jīng)酸原料藥1 g,固定OP-10用量7%、丙二醇用量5%,乳化溫度70 ℃,以4 000 r/min剪切一定時間,在一定壓力下于高壓均質(zhì)機(jī)中循環(huán)數(shù)次,按“2.1”項下方法操作,考察不同油酸用量(5%、10%、15%、20%、25%、30%)對神經(jīng)酸口服乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、粒徑及Ke的影響。結(jié)果顯示,當(dāng)油酸用量為5%時,所得口服乳劑呈均一乳白色,但振搖后有掛壁現(xiàn)象;粒徑雖符合口服乳劑的粒徑范圍,但偏大;Ke雖為最小,但所得口服乳劑靜置24 h內(nèi)可見分層現(xiàn)象。當(dāng)油酸用量為10%時,所得口服乳劑呈均一乳白色,振搖后不掛壁,亦未出現(xiàn)分層現(xiàn)象,粒徑、Ke相對較小,故選擇油酸用量為10%。結(jié)果見表1。

    (2)OP-10用量:取神經(jīng)酸原料藥1 g,固定丙二醇用量5%、油酸用量10%,乳化溫度70 ℃,以4 000 r/min剪切一定時間,在一定壓力下于高壓均質(zhì)機(jī)中循環(huán)數(shù)次,按“2.1”項下方法操作,考察不同OP-10用量(2%、4%、6%、8%、10%、12%)對神經(jīng)酸口服乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、粒徑及Ke的影響。結(jié)果顯示,當(dāng)OP-10用量為4%時,所得口服乳劑呈均一乳白色,振搖后不掛壁,亦未出現(xiàn)分層現(xiàn)象,粒徑及Ke均為最小,故選擇OP-10用量為4%。結(jié)果見表2。

    +:離心后無分層現(xiàn)象;-:離心后有分層現(xiàn)象;/:無需測定

    (3)丙二醇用量:取神經(jīng)酸原料藥1 g,固定油酸用量10%、OP-10用量4%,乳化溫度70 ℃,以4 000 r/min剪切一定時間,在一定壓力下于高壓均質(zhì)機(jī)中循環(huán)數(shù)次,按“2.1”項下方法操作,考察不同丙二醇用量(2%、4%、6%、8%、10%、12%)對神經(jīng)酸口服乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、粒徑及Ke的影響。結(jié)果顯示,當(dāng)丙二醇用量為4%時,所得口服乳劑呈均一乳白色,振搖后不掛壁,亦未出現(xiàn)分層現(xiàn)象,Ke為最小,粒徑相差不大,故選擇丙二醇用量為4%。結(jié)果見表3。

    +:離心后無分層現(xiàn)象

    2.3.2 正交實驗

    在單因素實驗的基礎(chǔ)上,以油酸用量(A/%)、OP-10用量(B/%)、丙二醇用量(C/%)為因素,神經(jīng)酸口服乳劑粒徑及Ke為指標(biāo),采用L9(34)正交實驗設(shè)計對神經(jīng)酸口服乳劑的處方進(jìn)行優(yōu)化。神經(jīng)酸口服乳劑處方的因素與水平見表4,設(shè)計方案與結(jié)果見表5,方差分析結(jié)果見表6。

    由表5、表6可知,各因素對神經(jīng)酸口服乳劑粒徑的影響由大到小依次為A>C>B,但上述影響均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。各因素對神經(jīng)酸口服乳劑Ke的影響由大到小依次為A>B>C;其中,油酸用量、OP-10用量對神經(jīng)酸口服乳劑Ke的影響有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而丙二醇用量對Ke的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。綜合考慮,得最優(yōu)處方為A1B2C1,即油酸用量為5%,OP-10用量為4%,丙二醇用量為2%。

    2.4 神經(jīng)酸口服乳劑制備工藝的優(yōu)化

    2.4.1 單因素實驗

    (1)乳化溫度:取神經(jīng)酸原料藥1 g,按“2.3”項下最優(yōu)處方,固定剪切時間4 min、高壓均質(zhì)壓力50 MPa、高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)4次,按“2.1”項下方法操作,考察不同乳化溫度(50、60、70、80 ℃)對神經(jīng)酸口服乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、粒徑及Ke的影響。結(jié)果顯示,當(dāng)乳化溫度為70 ℃時,所得口服乳劑呈均一乳白色,振搖后不掛壁,亦未出現(xiàn)分層現(xiàn)象,粒徑、Ke相對較小,故選擇乳化溫度為70 ℃。結(jié)果見表7。

    (2)剪切時間:取神經(jīng)酸原料藥1 g,按“2.3”項下最優(yōu)處方,固定乳化溫度70 ℃、高壓均質(zhì)壓力50 MPa、高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)4次,按“2.1”項下方法操作,考察不同剪切時間(0、2、4、6、8 min)對神經(jīng)酸口服乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、粒徑及Ke的影響。結(jié)果顯示,所得口服乳劑呈均一乳白色,振搖后不掛壁,亦未出現(xiàn)分層現(xiàn)象。當(dāng)剪切時間超過4 min后,粒徑及Ke基本無明顯變化,且兩者相對較小,故選擇剪切時間為4 min。結(jié)果見表8。

    +:離心后無分層現(xiàn)象

    (3)高壓均質(zhì)壓力:取神經(jīng)酸原料藥1 g,按“2.3”項下最優(yōu)處方,固定乳化溫度70 ℃、剪切時間4 min、高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)4次,按“2.1”項下方法操作,考察不同高壓均質(zhì)壓力(20、40、60、80 MPa)對神經(jīng)酸口服乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、粒徑及Ke的影響。結(jié)果顯示,所得口服乳劑呈均一乳白色,振搖后不掛壁,亦未出現(xiàn)分層現(xiàn)象。當(dāng)高壓均質(zhì)壓力為60 MPa時,粒徑略有增加但不明顯,且符合口服乳劑的粒徑范圍,Ke無明顯變化且為最小,故選擇高壓均質(zhì)壓力為60 MPa。結(jié)果見表9。

    +:離心后無分層現(xiàn)象

    (4)高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù):取神經(jīng)酸原料藥1 g,按“2.3”項下最優(yōu)處方,固定乳化溫度70 ℃、剪切時間4 min、高壓均質(zhì)壓力60 MPa,按“2.1”項下方法操作,考察不同高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)(2、4、6、8次)對神經(jīng)酸口服乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、粒徑及Ke的影響。結(jié)果顯示,所得口服乳劑呈均一乳白色,振搖后不掛壁,亦未出現(xiàn)分層現(xiàn)象。隨著高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)的增加,Ke無明顯變化;粒徑雖逐漸增加,但可能與“過做功”導(dǎo)致乳滴合并有關(guān)[13]。綜合考慮,選擇高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)為4次。結(jié)果見表10。

    2.4.2 正交實驗

    在單因素實驗的基礎(chǔ)上,以乳化溫度(A/℃)、剪切時間(B/min)、高壓均質(zhì)壓力(C/MPa)、高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)(D/次)為因素,神經(jīng)酸口服乳劑粒徑及Ke為指標(biāo),采用L9(34)正交實驗設(shè)計對神經(jīng)酸口服乳劑的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。神經(jīng)酸口服乳劑制備工藝的因素與水平見表11,設(shè)計方案與結(jié)果見表12,方差分析結(jié)果見表13。

    由表12、表13可知,乳化溫度、剪切時間、高壓均質(zhì)壓力、高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)對粒徑及Ke的影響均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。其中,高壓均質(zhì)壓力是影響神經(jīng)酸口服乳劑粒徑最主要的因素,其次是高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù),剪切時間對粒徑影響最小,即C>D>A>B,得到粒徑方面的最優(yōu)工藝為A2B2C1D1。乳化溫度是影響神經(jīng)酸口服乳劑穩(wěn)定性最主要的因素,其次是高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)和剪切時間,即A>D=B>C,得到穩(wěn)定性方面的最優(yōu)工藝為A1B1C3D1。綜合分析,因素A、因素B雖不是粒徑的主要影響因素,但卻是Ke的主要影響因素,故因素A、因素B取A1、B1水平;因素C是粒徑的主要影響因素,故因素C取C1水平;因素D均以D1水平為優(yōu),故取D1水平。最終得到最優(yōu)制備工藝為A1B1C1D1,即乳化溫度為60 ℃,剪切時間為2 min,高壓均質(zhì)壓力為40 MPa,高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)為2次。

    2.5 最優(yōu)處方及制備工藝的驗證

    取神經(jīng)酸原料藥1 g,以神經(jīng)酸口服乳劑外觀、離心穩(wěn)定性、粒徑及Ke為指標(biāo),按“2.3”“2.4”項下最優(yōu)處方及最優(yōu)制備工藝制備神經(jīng)酸口服乳劑。每樣品平行操作3次,取平均值。結(jié)果顯示,3批神經(jīng)酸口服乳劑的平均粒徑為158.05 nm(RSD=1.58%,n=3),平均Ke為0.39(RSD=1.49%,n=3),表明所得處方及制備工藝穩(wěn)定、可行。結(jié)果見表14。

    +:離心后無分層現(xiàn)象

    2.6 神經(jīng)酸的含量測定

    2.6.1 色譜條件

    以Amethyst C18-H(250 nm×4.6 mm,5 μm)為色譜柱,以乙腈-0.05%磷酸溶液(98 ∶ 2,V/V)為流動相;流速為1 mL/min;檢測波長為203 nm;柱溫為25 ℃;進(jìn)樣量為5 μL[14]。

    2.6.2 對照品溶液的制備

    精密稱取神經(jīng)酸對照品適量,置于25 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容,混勻,制得質(zhì)量濃度為0.328 0 mg/mL的對照品溶液。

    2.6.3 供試品溶液的制備

    精密量取按最優(yōu)處方及制備工藝制得的神經(jīng)酸口服乳劑0.2 mL,置于10 mL量瓶中,加甲醇溶解,超聲(功率250 W,頻率40 kHz)處理15 min,放冷,加甲醇定容,搖勻,經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.6.4 空白對照溶液的制備

    按“2.3”“2.4”項下最優(yōu)處方及制備工藝制得缺神經(jīng)酸原料藥的空白口服乳劑,再按“2.6.3”項下方法制備空白對照溶液。

    2.6.5 專屬性試驗

    分別取上述對照品溶液、供試品溶液、空白對照溶液,按“2.6.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄色譜圖,詳見圖1。由圖1可知,空白對照溶液色譜圖在對照品相應(yīng)位置上沒有吸收峰,表明處方中的輔料對神經(jīng)酸的測定無干擾;對照品溶液中神經(jīng)酸的理論板數(shù)為24 251,供試品溶液中神經(jīng)酸的理論板數(shù)為23 779。

    2.6.6 線性關(guān)系考察

    精密吸取“2.6.2”項下對照品溶液,用甲醇稀釋并定容,制得質(zhì)量濃度為0.164 0、0.082 0、0.041 0、0.020 5、0.010 25 mg/mL的系列工作溶液,再另取“2.6.2”項下對照品溶液,按“2.6.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄色譜圖。以對照品質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得神經(jīng)酸的回歸方程為Y=30.071 0X+0.019 2(r=0.999 9),表明神經(jīng)酸檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為0.010 25~0.328 0 mg/mL。

    2.6.7 精密度試驗

    取“2.6.6”項下質(zhì)量濃度為0.010 25 mg/mL的對照品溶液,按“2.6.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次,記錄峰面積。結(jié)果顯示,神經(jīng)酸峰面積的RSD為1.05%(n=6),表明儀器精密度良好。

    2.6.8 穩(wěn)定性試驗

    取“2.6.3”項下供試品溶液,分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12、24 h時按“2.6.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄峰面積。結(jié)果顯示,神經(jīng)酸峰面積的RSD為1.01%(n=7),表明供試品溶液于室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

    2.6.9 重復(fù)性試驗

    取按最優(yōu)處方及制備工藝制得的神經(jīng)酸口服乳劑,共6份,按“2.6.3”項下方法制備供試品溶液,再按“2.6.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄峰面積并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品含量。結(jié)果顯示,神經(jīng)酸含量的RSD為1.29%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。

    2.6.10 加樣回收率試驗

    精密移取已知含量的按最優(yōu)處方及制備工藝制得的神經(jīng)酸口服乳劑,共6份,加入等量的對照品,按“2.6.3”項下方法制備供試品溶液,再按“2.6.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定并計算加樣回收率。結(jié)果見表15。

    2.6.11 樣品含量測定

    按“2.3”“2.4”項下最優(yōu)處方及制備工藝制得神經(jīng)酸口服乳劑,共3批,按“2.6.3”項下方法制備供試品溶液,再按“2.6.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品含量。結(jié)果顯示,口服乳劑中神經(jīng)酸的含量分別為8.473 2、8.709 2、8.482 3 mg/mL,平均含量為8.554 9 mg/mL(RSD=1.56%,n=3)。

    2.7 樣品穩(wěn)定性試驗

    2.7.1 高溫試驗

    按“2.3”“2.4”項下最優(yōu)處方及制備工藝制得神經(jīng)酸口服乳劑。取適量,于60 ℃下放置10 d,分別于第5天、第10天時取樣,按2020年版《中國藥典》(四部)“穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項目”考察高溫條件下樣品的穩(wěn)定性[9],并按“2.6.11”項下方法測定其中神經(jīng)酸的含量。結(jié)果顯示,于60 ℃下放置5 d后,神經(jīng)酸口服乳劑外觀由均一乳白色變?yōu)樯蠈拥S色、下層白色,出現(xiàn)分層現(xiàn)象;神經(jīng)酸的含量明顯升高,由8.688 2 mg/mL增加到16.249 2 mg/mL,表明神經(jīng)酸口服乳劑不適宜放置于高溫環(huán)境中,應(yīng)于較低溫度中保存(因第5天時神經(jīng)酸口服乳劑的外觀、含量均發(fā)生了變化,故未對第10天的樣品進(jìn)行檢測)。

    2.7.2 加速試驗

    按“2.3”“2.4”項下最優(yōu)處方及制備工藝制得神經(jīng)酸口服乳劑。取3批樣品,于溫度(40±2) ℃、相對濕度(75±5)%條件下放置6個月,分別于放置0、1、2、3、6個月時取樣,按2020年版《中國藥典》(四部)“加速試驗”規(guī)定考察樣品的穩(wěn)定性[9],并按“2.6.11”項下方法測定其中神經(jīng)酸的含量。結(jié)果顯示,神經(jīng)酸口服乳劑外觀均呈均一乳白色,無分層現(xiàn)象,且神經(jīng)酸的含量變化不大。結(jié)果見表16。

    2.7.3 長期試驗

    按“2.3”“2.4”項下最優(yōu)處方及制備工藝制得神經(jīng)酸口服乳劑。取3批樣品,于溫度(25±2) ℃、相對濕度(60±5)%條件下放置6個月,分別于放置0、3、6個月時取樣,按2020年版《中國藥典》(四部)“長期試驗”規(guī)定考察樣品的穩(wěn)定性[9],并按“2.6.11”項下方法測定其中神經(jīng)酸的含量。結(jié)果顯示,神經(jīng)酸口服乳劑外觀均呈均一乳白色,無分層現(xiàn)象,且神經(jīng)酸的含量變化不大。結(jié)果見表17。

    3 討論

    研究指出,在采用機(jī)械法制備神經(jīng)酸口服乳劑時,不需要考慮混合順序,制備的乳劑質(zhì)量較好[10]。筆者在單因素實驗中發(fā)現(xiàn),油相用量越大,所得口服乳劑的Ke就越大,乳劑就越不穩(wěn)定,油滴越易析出;隨著乳化劑用量的增加,乳劑穩(wěn)定性亦有所增加,但當(dāng)乳化劑用量超過6%時,會導(dǎo)致油相與水相無法均勻混合,從而使乳劑的穩(wěn)定性變差。升高乳化溫度可以降低油相的黏度,有利于剪切力的傳遞及乳劑的形成,但溫度過高會導(dǎo)致乳劑的穩(wěn)定性下降,這可能是由于溫度過高導(dǎo)致油水界面膜膨脹,增加乳滴的動能,使大量的乳滴聚集合并,粒徑增大[15]。在一定的剪切速度下,剪切時間的延長可使乳劑趨于穩(wěn)定,粒徑逐漸縮小;當(dāng)剪切時間超過4 min時,粒徑出現(xiàn)增加的趨勢,這可能是由于外界過高的能量使更多的乳滴產(chǎn)生,使得乳滴之間的擠壓、碰撞更為劇烈,導(dǎo)致乳滴出現(xiàn)合并現(xiàn)象,從而增加乳劑的平均粒徑[13]。此外,本課題組發(fā)現(xiàn),高壓均質(zhì)壓力越大,所得乳劑越穩(wěn)定,Ke越小,但粒徑有增加的趨勢,這可能是由于“過做功”而引起的“粒徑反彈”,即乳劑在高壓均質(zhì)機(jī)中受到高壓而產(chǎn)生強(qiáng)烈的剪切、撞擊和空穴作用,使得乳劑超微細(xì)化,但過度做功會使單位體積內(nèi)油水兩相接觸面積增大、分子熱運(yùn)動加速,導(dǎo)致油相分子之間的碰撞更加頻繁,油滴之間互相吸附和融合,誘發(fā)合并現(xiàn)象,從而增大乳劑的平均粒徑[13]。

    本課題組還發(fā)現(xiàn),不同乳化溫度、剪切時間、高壓均質(zhì)壓力、高壓均質(zhì)循環(huán)次數(shù)對所得口服乳劑穩(wěn)定性及粒徑的影響均存在一定差異,故采用正交實驗設(shè)計對制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。但在優(yōu)化制備工藝時發(fā)現(xiàn),在所選水平中,各因素對粒徑及Ke的影響均無統(tǒng)計學(xué)意義,可能是在單因素實驗中,各水平條件下所得乳劑的粒徑、Ke變化較小。綜合粒徑及Ke得到最優(yōu)處方及制備工藝為神經(jīng)酸原料藥1 g、油酸用量5%、OP-10用量4%、丙二醇用量2%、乳化溫度60 ℃、剪切時間2 min、高壓均質(zhì)壓力40 MPa、高壓均質(zhì)循環(huán)2次。在此處方工藝條件下,所得神經(jīng)酸口服乳劑的平均粒徑為158.05 nm,平均Ke為0.39,外觀、離心穩(wěn)定性及粒徑均符合外觀為均一乳白色、離心后不分層、粒徑在乳劑范圍內(nèi)的要求[11]。

    本課題組在參考相關(guān)文獻(xiàn)[14]的基礎(chǔ)上,考察了不同色譜柱(Diamonsil C18、AcclaimTM120 C18、Amethyst C18-H,規(guī)格均為250 nm×4.6 mm,5 μm)對色譜峰峰形、出峰時間的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),以Amethyst C18-H為色譜柱時,色譜峰峰形更好,出峰時間較短。同時,本課題組又考察了乙腈-0.05%磷酸溶液不同比例(90 ∶ 10、94 ∶ 6、98 ∶ 2、99 ∶ 1,V/V)對色譜峰峰形及出峰時間的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)乙腈與0.05%磷酸溶液比例為98 ∶ 2(V/V)時,所得色譜峰峰形好且出峰快。

    樣品的穩(wěn)定性試驗結(jié)果顯示,神經(jīng)酸口服乳劑應(yīng)避免置于高溫環(huán)境中保存,因高溫環(huán)境可使乳劑出現(xiàn)分層現(xiàn)象,使神經(jīng)酸的含量明顯升高;該制劑應(yīng)于較低溫度下保存,室溫環(huán)境放置6個月的穩(wěn)定性較好。

    綜上所述,所得最優(yōu)處方及制備工藝穩(wěn)定、可行,可用于神經(jīng)酸口服乳劑的制備;所建含量測定方法操作簡便、可行,可用于神經(jīng)酸口服乳劑的含量測定;神經(jīng)酸口服乳劑不適宜放置于高溫環(huán)境中,在室溫環(huán)境中放置6個月的外觀及含量無明顯變化,穩(wěn)定性較好。

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    (收稿日期:2021-09-08 修回日期:2022-01-05)

    (編輯:陳 宏)

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