丁苯肽和長春西汀治療急性缺血性腦卒中對患者血清LncRNA CAI2及CD62P的影響

耿彪 趙小輝 宋志軍 楊晶 劉盼 王洪志 馬天驕

急性缺血性腦卒中是一種由腦部急性血液障礙導(dǎo)致腦組織缺血缺氧的臨床綜合征，該疾病發(fā)病急、病情發(fā)展迅速，對腦組織的損傷不可逆轉(zhuǎn)，且致殘率和致死率極高[1]。急性缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)制大多是患者血管異常堵塞或狹窄，血液粘度異常增加，從而造成腦組織供血障礙。目前臨床上多采用擴(kuò)張腦血管藥物治療急性缺血性腦卒中，其中長春西汀是目前臨床治療常使用的溶栓藥物之一[2]。由于溶栓的最佳治療時(shí)間是早期，因此隨著病情的發(fā)展急需聯(lián)合其他治療手段提高療效并改善患者預(yù)后。近年來，臨床治療常采用丁苯肽聯(lián)合治療急性缺血性腦卒中，丁苯肽不僅可以有效抑制血小板聚集，還可以降低機(jī)體炎性因子水平，從而保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞[3]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，長非編碼RNA(long non coding RNA，LncRNA)CAI2和血小板膜激活標(biāo)記物P-選擇素(Platelet membrane activation marker P-selectin，CD62P)在急性缺血性腦卒中病情發(fā)展中具有巨大研究價(jià)值[4，5]。本研究采用丁苯肽結(jié)合長春西汀治療急性缺血性腦卒中患者，及其對血清LncRNA CAI2及CD62P的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象為2017年3月至2020年5月于本院就診并接受治療的220例急性缺血性腦卒中患者，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組和觀察組，每組110例，年齡40～75歲。2組患者在年齡和性別比、病程和合并癥等臨床資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究由醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)進(jìn)行，患者及家屬簽訂知情同意書。見表1。

表1 2組患者的一般資料 例，

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者經(jīng)CT檢查已確診患有急性缺血性腦卒中，臨床癥狀符合2018版急性缺血性腦卒中急診急救中國專家共識(shí)[6]中急性缺血性腦卒的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)入院前無急性缺血性腦卒中病史；(3)病發(fā)3 d內(nèi)入院接受治療；(4)無治療藥物過敏史。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患有腦出血或其他自發(fā)性出血疾?。?2)患有其他并發(fā)癥、惡性腫瘤以及精神病的患者；(3)身體重要臟器受損或內(nèi)分泌系統(tǒng)障礙；(4)患者認(rèn)知和社交無障礙。

1.3 方法 患者均給予常規(guī)治療，主要包括穩(wěn)定顱內(nèi)壓、營養(yǎng)支持、內(nèi)環(huán)境平衡、抗血小板凝聚、液體補(bǔ)充治療和輔助呼吸等。此外，對于合并高血壓患者給予常規(guī)降壓治療，對于合并高血糖患者給予常規(guī)降糖治療。除常規(guī)治療外，對照組給予靜脈滴注長春西汀注射液(規(guī)格：50 mg/2 ml，批號：31170306，河北智同生物制藥有限公司)，1次/d，30 mg/次。觀察組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上，給予丁苯肽膠囊結(jié)合長春西汀注射液，常規(guī)治療和長春西汀注射液的治療方案同對照組，丁苯肽膠囊(規(guī)格：0.2 g/顆，必普藥業(yè)有限公司)口服給藥，3次/d，0.2 g/次。2組治療期均為2周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 臨床療效：本實(shí)驗(yàn)采用美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIH Stroke Scale,NIHSS)評價(jià)臨床療效，評價(jià)指標(biāo)為治療后患者神經(jīng)功能狀況。分別于2周后觀察并記錄兩組治療前后的NIHSS分?jǐn)?shù)。NIHSS分?jǐn)?shù)相較治療前降低>90%，記作治愈；NIHSS分?jǐn)?shù)相較治療前降低在46%～90%，記作顯著有效；NIHSS分?jǐn)?shù)相較治療前降低在18%～45%，記作有效；NIHSS分?jǐn)?shù)相較治療前降低<18%，記作無效。治療有效率=治愈率+顯著有效率+有效率。

1.4.2 NIHSS評分、mRS評分和Barthel指數(shù):分別于2周后比較2組治療前后NIHSS評分、改良Rankin量表(modified Rankin scale,mRS)評分和Barthel指數(shù)(the Barthelindex of ADL，BI)評分。無或有輕微神經(jīng)功能障礙，記作0分；有輕微神經(jīng)功能障礙，但不影響工作生活，記作1分；無法正常工作生活，在他人幫助下可實(shí)現(xiàn)生活自理，記作2分；可獨(dú)立行走，在他人幫助下可實(shí)現(xiàn)生活自理，記作3分；無法獨(dú)立行走，在他人幫助下可實(shí)現(xiàn)生活自理，記作4分；患者大小便失禁，無法行走，且完全喪失生活能力，記作5分。

1.4.3 血液流變學(xué)指標(biāo)：取患者早晨空腹肘靜脈血2 ml，4℃離心10 min(3 000 r/min)，LG-R-80A型全自動(dòng)血液黏度計(jì)(北京中科富邦醫(yī)療設(shè)備有限公司)測定其中全血黏度(whole blood viscosity，WBV)、血漿黏度(plasma viscosity，PV)水平、纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)IB)水平和紅細(xì)胞比容(hematocrit，HCT)。

1.4.4 血清炎性因子水平:治療前后取患者早晨空腹靜脈血5 ml，4℃離心10 min(3 000 r/min)，取上層血清通過免疫比濁法(檢測試劑來自RANDOX公司)測定其中C-反應(yīng)蛋白(CRP)含量。采用酶聯(lián)免疫法(檢測試劑均來自北京晶美生物技術(shù)有限公司)測定血清中白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-8(IL-8)的含量。

1.4.5 血清LncRNACAI2和CD62P:水平分別治療前后取患者早晨空腹后靜脈取血樣品3ml，加入抗凝劑枸櫞酸鈉，4℃離心15 min(4 000 r /min)，取上層血清采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)測定其中LncRNACAI2水平。首先采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號：A257414368813，美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)將血清樣品中RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后采用PowerUp SYBR Green預(yù)混液(批號：A25741，美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)定量擴(kuò)增cDNA，最后以甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH) 為對照品，采用熒光定量PCR儀(美國伯樂公司)實(shí)時(shí)定量PCR，并通過2-ΔΔCT法計(jì)算LncRNACAI2的相對含量。分別治療前后取患者早晨空腹后靜脈取血樣品5 ml，加入抗凝劑枸櫞酸鈉，4℃離心10 min(3 000 r/min)，取上層血清采用酶聯(lián)免疫吸附法(檢測試劑來自上海酶聯(lián)生物有限公司)測定其中CD62P水平。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效 治療后對照組總有效率為 89.1%，觀察組為96.4%，觀察組總有效率顯著高于對照組，2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組治療后臨床療效比較 n=110,例(%)

2.2 NIHSS、mRS和BI評分 治療前2組NIHSS、mRS和BI評分指數(shù)均無明顯差異(P>0.05)，治療后2組NIHSS和mRS評分均顯著降低(P<0.05)，BI顯著提高(P<0.05)。此外，治療后觀察組的NIHSS和mRS評分均明顯低于對照組(P<0.05)，BI明顯高于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 2組治療前后NIHSS、mRS和BI評分比較 n=110,分，

2.3 血液流變學(xué)指標(biāo) 治療前2組血液流變學(xué)指標(biāo)均無明顯差異(P>0.05)，治療后2組均明顯降低(P<0.05)，且觀察組均明顯低于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 2組治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)比較

2.4 血清炎性因子水平 治療前2組的血清炎性細(xì)胞因子水平均無明顯差異(P>0.05)，治療后2組均明顯降低(P<0.05)，且治療后觀察組均明顯低于對照組(P<0.05)。見表5。

表5 2組治療前后血清炎性因子水平比較

2.5 血清LncRNACAI2和CD62P水平 治療前2組的血清LncRNACAI2和CD62P水平均無明顯差異(P>0.05)，治療后2組均顯著降低(P<0.05)，且觀察組均低于對照組(P<0.05)。見表6。

表6 2組治療前后血清LncRNACAI2和CD62P水平比較

3 討論

急性缺血性腦卒中發(fā)病原因?yàn)榛颊吣X血管病理性萎縮或是血液粘度異常增高導(dǎo)致腦血管堵塞，從而引發(fā)腦血栓以及其他并發(fā)癥[7]。長春西汀是目前臨床治療中常使用的一種溶栓藥物[8]，作為吲哚類生物堿的長春西汀脂溶性較好的，可通過血腦屏障直達(dá)腦組織，有效降低腦血液粘度，從而改善患者血栓。但是溶栓治療時(shí)間很短暫，因此在臨床治療中常需聯(lián)合其他藥物提高療效。腦組織缺血缺氧會(huì)刺激人體氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而促進(jìn)機(jī)體分泌炎性因子，過高水平的炎性因子會(huì)進(jìn)一步損傷神經(jīng)細(xì)胞。因此本研究采用長春西汀聯(lián)合可有效降低機(jī)體炎性因子水平的丁苯肽，以達(dá)到提高療效以及改善患者預(yù)后的作用。

本研究中，觀察組總有效率顯著高于對照組(P<0.05)。這說明長春西汀和聯(lián)合用藥均可以有效治療急性缺血性腦卒中并改善患者的神經(jīng)功能恢復(fù)，但聯(lián)合用藥的療效更佳。治療后2組的NIHSS和mRS評分均顯著降低(P<0.05)，BI均顯著提高(P<0.05)這說明長春西汀和聯(lián)合用藥均可以有效改善患者生活自理能力以及神經(jīng)功能恢復(fù)。原因可能是長春西汀可有效阻滯機(jī)體鈣離子通道[9]，降低機(jī)體鈣離子水平，從而保護(hù)腦組織缺血缺氧狀態(tài)下神經(jīng)細(xì)胞興奮性損傷，從而避免神經(jīng)細(xì)胞受損。此外，丁苯肽中消旋-3-正定基本肽成分可保護(hù)腦細(xì)胞線粒體的功能與結(jié)構(gòu)[10]，從而保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，改善患者的神經(jīng)功能恢復(fù)。

治療后2組的血液流變學(xué)指標(biāo)均明顯降低(P<0.05)，且觀察組低于對照組(P<0.05)。這說明長春西汀和聯(lián)合用藥均可以有效改善急性缺血性腦卒中患者的全血黏度、血漿黏度水平、纖維蛋白原水平和紅細(xì)胞比容。原因可能是長春西汀可調(diào)節(jié)紅細(xì)胞形狀[11]，降低血管內(nèi)紅細(xì)胞水平，從而降低血液粘度。丁苯肽中消旋-3-正定基本肽成分可有效調(diào)節(jié)機(jī)體花生四烯酸表達(dá)水平[12]，從而抑制腦血管血小板異常凝聚，從而降低血液粘度。

治療后2組的血清炎性細(xì)胞因子水平均明顯降低(P<0.05)，且觀察組低于對照組(P<0.05)。這說明相較于長春西汀，聯(lián)合用藥降低機(jī)體血清炎性細(xì)胞因子水平效果更佳。分析認(rèn)為原因可能是丁苯肽的活性成分消旋-3-正定基本肽可抑制機(jī)體合成谷氨酸[13]，從而抑制機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生炎性因子，避免神經(jīng)細(xì)胞炎性受損。

急性缺血性腦卒中的致死率極高，因此預(yù)防診斷逐漸成為臨床治療急性缺血性腦卒中的研究熱點(diǎn)，其中LncRNACAI2和CD62P的水平變化與急性缺血性腦卒中病情發(fā)展密切相關(guān)。LncRNA廣泛存在于人體腦組織中，參與機(jī)體神經(jīng)炎性反應(yīng)[14]，影響急性缺血性腦卒中患者神經(jīng)功能恢復(fù)。CD62P作為促炎性因子[15]，在血小板活化過程中具有重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)治療后2組的血清LncRNACAI2和CD62P水平均顯著降低(P<0.05)。健康人體內(nèi)血清LncRNACAI2水平極低[16]，患有急性缺血性腦卒中后明顯增高，聯(lián)合治療后血清LncRNACAI2和CD62P水平顯著降低，這提示臨床中可監(jiān)測患者血清LncRNACAI2和CD62P水平，提早診斷和治療急性缺血性腦卒中，給予患者個(gè)性化治療，改善患者預(yù)后。

本研究發(fā)現(xiàn)，長春西汀聯(lián)合丁苯肽可以顯著改善急性缺血性腦卒中患者的神經(jīng)功能和生活自理能力恢復(fù)。此外，丁苯肽結(jié)合長春西汀可能發(fā)生協(xié)同作用，增強(qiáng)溶栓和抗炎作用，顯著改善血液流變學(xué)指標(biāo)、血清炎性因子水平以及血清LncRNACAI2和CD62P水平。