H2S、HBP、sTREM-1在尿源性膿毒血癥中的表達及診斷價值分析

談朦 盧子文 李衛(wèi)林

尿源性膿毒血癥是泌尿外科常發(fā)生的抑制危急重癥，其特點是發(fā)病急，進展迅速，病情較為兇險，大部分患者在住院前已經(jīng)伴隨全身炎癥反應(yīng)綜合征發(fā)生，如果治療不及時，會向膿毒性休克方向發(fā)展，嚴重的患者出現(xiàn)多器官功能障礙，病情難以控制，增加死亡率［1-2］。因此，早期診斷尿源性膿毒血癥，有助于提高患者生存率。內(nèi)源性硫化氫（Endogenous hydrogen sulfide，H2S）是一種主要在組織細胞中所表達的氣體信號分子，可參與多種病理、生理反應(yīng)［3］。尿肝素結(jié)合蛋白（Urinary heparin-binding protein，HBP）是具有殺菌活性的物質(zhì)，主要由中性粒細胞激活后所分泌，可與內(nèi)皮細胞相互作用，增加血管通透性，最終引發(fā)水腫及臟器損傷［4］。髓樣細胞觸發(fā)受體1（Myeloid cell trigger receptor 1，sTREM-1）是與細菌性腦膜炎、肺炎、炎癥性腸炎、膿毒癥等多種疾病存在聯(lián)系的TREM-1 可溶形式［5］。目前臨床關(guān)于H2S、HBP、sTREM-1 在尿源性膿毒血癥聯(lián)合檢測的相關(guān)研究甚少，本文旨在研究H2S、HBP、sTREM-1 與尿源性膿毒血癥嚴重程度的相關(guān)性，為臨床診斷提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019 年5 月至2021 年5 月在本院診斷尿源性膿毒血癥患者140 例分為觀察組。選擇同期經(jīng)皮腎鏡或經(jīng)輸尿管鏡手術(shù)后非尿源性膿毒癥患者120 例分為對照組。收集患者一般資料，年齡、BMI、性別、實驗室指標C 反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、白細胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、降鈣素原（Procalcitonin，PCT）、白細胞計數(shù)（White blood cell count，WBC）、纖維蛋白原（Fibrinogen，F(xiàn)IB）、腫瘤壞死因子-ɑ（Tumor necrosis factor-ɑ，TNF-ɑ）、白細胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）。（1）納入標準：所有患者均符合《泌尿系感染診斷治療指南》中［6］的診斷標準，存在泌尿系統(tǒng)感染癥狀；患者膿尿、尿生化檢查為陽性；尿細菌菌落計數(shù)≥105 CFU/mL；所有患者均為首次行皮腎鏡、輸尿管鏡手術(shù)。（2）排除標準：合并腫瘤、血液疾病、冠心病患者；免疫功能障礙患者；其他原因造成的全身性炎癥反應(yīng)綜合征患者；兩次以上行皮腎鏡、輸尿管鏡手術(shù)患者；精神異?；颊?。

1.2 方法 （1）標本采集：抽取兩組患者清晨空腹靜脈血3 mL，置入肝素化離心管內(nèi)充分混勻，用離心機以3,000 r/min 的轉(zhuǎn)速分離，離心半徑為12 cm，取上層血清保存至-20℃的冰箱中，冷藏待測。（2）生化指標檢測方法：通過去蛋白法貴兩組受試者H2S 水平進行檢測。通過酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法對兩組患者HBP、sTREM-1 水平進行檢測，將10μL 待測樣品與40 μL待測樣品稀釋液加入孔中，輕微搖晃均勻，向孔中加入100 μL 酶標試劑，并進行封板，將其在37℃下孵育60 min，后棄去孔中液體，使用Wash Sohltion 進行重復(fù)清洗，清洗后加入顯色劑50μL，搖晃均勻后在37℃下進行顯色處理15 min，后加入50μL 終止液，終止反應(yīng)，在450 nm 波長下檢測OD 值，查出HBP、sTREM-1。HBP、sTREM-1 ELISA 試劑盒由上海富雨生物科技有限公司提供，貨號分別為FY-03806H2、FY-04104H2。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 26.0 統(tǒng)計軟件。計量資料符合正態(tài)分布以（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗。ROC 曲線，分析H2S、HBP、sTREM-1 及三項聯(lián)合對尿源性膿毒血癥的診斷價值。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較 兩組年齡、BMI、性別對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。觀察組CRP、IL-6、PCT、WBC、FIB、TNF-ɑ、IL-1β 水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組基線資料比較

2.2 兩組H2S、HBP、sTREM-1 水平對比 觀察組H2S、HBP、sTREM-1 水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組H2S、HBP、sTREM-1水平對比（±s）

表2 兩組H2S、HBP、sTREM-1水平對比（±s）

組別 n H2S（ng/mL） HBP sTREM-1對照組 120 45.63±5.01 226.79±24.88 3.14±0.43觀察組 140 75.63±8.45 301.79±30.71 5.71±0.79 t 值 34.090 78.470 31.820 P 值 0.001 0.001 0.001

2.3 尿源性膿毒血癥的因素分析 以是否發(fā)生尿源性膿毒血癥為因變量（0=否，1=是），CRP、IL-6、PCT、WBC、FIB、TNF-ɑ、IL-1β、H2S、HBP、sTREM-1為自變量，建立Logistic 回歸模型，并校正年齡、BMI、性別等混雜因素影響，最終CRP、IL-6、PCT、TNF-ɑ、H2S、HBP、sTREM-1 是發(fā)生尿源性膿毒血癥的危險因素，見表3。

表3 尿源性膿毒血癥的因素分析

2.4 H2S、HBP、sTREM-1 對尿源性膿毒血癥的診斷價值 ROC 曲線顯示，三項聯(lián)合對尿源性膿毒血癥的診斷價值高H2S、HBP、sTREM-1 單項診斷，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

表4 H2S、HBP、sTREM-1對尿源性膿毒血癥的診斷價值

3 討論

膿毒血癥是指患者血液中的感染源造成的全身性炎癥反應(yīng)綜合征，尿源性膿毒血癥是泌尿系統(tǒng)發(fā)生的膿毒血癥。相關(guān)研究顯示，經(jīng)皮腎鏡或者是經(jīng)輸尿管鏡手術(shù)后尿源性膿毒血癥發(fā)病率達23%，死亡率達35.2%，發(fā)生的主要原因是由于患者及其醫(yī)護人員手術(shù)后重視不足，存在診斷滯后，容易錯過最佳的治療時間［7］。尿源性膿毒血癥治療每延遲1 h，患者的存活幾率就下降8%，早期診斷尿源性膿毒血癥是提高患者生存質(zhì)量的關(guān)鍵［8］。

H2S 是具有細胞保護、促炎、調(diào)節(jié)血管收縮、調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激等作用的氣體信號分子，在泌尿生殖系統(tǒng)、心血管、消化、內(nèi)分泌系統(tǒng)中均發(fā)揮著重要作用［9-10］。研究表明［11］，H2S 在尿源性膿毒血癥癥中呈高表達，可通過促進趨化因子、IL-8、IL-10 等炎癥因子的釋放，且可使炎癥細胞印在炎癥部位轉(zhuǎn)移，進而參與患者的炎癥反應(yīng)，推動了尿源性膿毒血癥患者病情的進一步發(fā)展。本文研究顯示，H2S 在尿源性膿毒血癥癥中呈高表達，其結(jié)果與既往研究結(jié)果一致，且高表達的H2S 與尿源性膿毒血癥存在密切聯(lián)系，提示H2S 為尿源性膿毒血癥發(fā)生的危險因素。分析其原因為高表達的H2S 可促進尿源性膿毒血癥患者炎癥因子的釋放，進而加重了患者炎癥反應(yīng)，推動了患者病情的進一步發(fā)展。

HBP 作為膿毒血癥、器官功能衰竭、重癥肺炎、腦膜炎、腎綜合征出血熱進展的預(yù)測指標，在細菌感染發(fā)展為膿毒血癥時其水平明顯升高［12-13］。正常情況下，HBP主要在中性粒細胞中的嗜天青顆粒、分泌顆粒中所存在，在細菌感染時，可釋放進入血漿，進而對單核細胞、巨噬細胞起到了激活作用，且可與毛細血管內(nèi)皮細胞相互作用，最終使得患者血管通透性增加，炎癥反應(yīng)加強，進而推動了尿源性膿毒血癥患者病情的發(fā)展［14-15］。本文研究顯示，在尿源性膿毒血癥患者血清中HBP呈高表達，分析其原因為HBP 經(jīng)A 型鏈球菌M1 蛋白復(fù)合體、纖維蛋白原激活后，可促進組織水腫的發(fā)生，最終可造成臟器嚴重損傷，加重了尿源性膿毒血癥患者病情。此外本研究ROC 分析顯示HBP 預(yù)測尿源性膿毒血癥的AUC 達0.731，提示HBP 是孕婦發(fā)生尿源性膿毒血癥的警示指標。

sTREM-1 是對尿源性膿毒血癥早期診斷、病情嚴重程度評估、預(yù)后情況具有評估作用的TREM-1 可溶形式，TREM-1 主要在中性粒細胞、成熟單核-巨噬細胞等炎癥細胞表面所表達，屬于免疫球蛋白超家族成員，TREM-1 溶解于體液后可轉(zhuǎn)化為sTREM-1，進而對急性炎癥反應(yīng)作用起到了促進作用［16］。研究顯示［17］，sTREM-1 在化膿性關(guān)節(jié)炎、急性腎損傷、重癥肺炎、急性胰腺炎等多種疾病中均呈高表達，可對患者感染嚴重程度進行反映。本文研究顯示，尿源性膿毒血癥患者血清中sTREM-1 呈高表達，且與尿源性膿毒血癥的存在密切聯(lián)系，提示sTREM-1 為尿源性膿毒血癥發(fā)生的危險因素。分析其原因為過度表達的sTREM-1 會可加重機體炎癥反應(yīng)，造成局部血流動力學(xué)紊亂，且可促進氧化應(yīng)激功能障礙的發(fā)生，進而推動了尿源性膿毒血癥的發(fā)生。

綜上所述，本文研究顯示，H2S、HBP、sTREM-1在尿源性膿毒血癥患者中表達較高，三者均為尿源性膿毒血癥的獨立危險因素，且ROC 曲線顯示，三者聯(lián)合對尿源性膿毒血癥的診斷價值較高，對H2S、HBP、sTREM-1 水平進行動態(tài)檢測，可為患者治療效果、預(yù)后的判定提供一定借鑒。但因樣本量過少，且未對其作用機制進行分析，因此還需后續(xù)進一步分析H2S、HBP、sTREM-1 參與尿源性膿毒血癥發(fā)生、發(fā)展的具體機制。