2018—2021年山東省血液中心單采血小板和獻血者乙肝表面抗原ELISA復(fù)檢陽性情況分析

于媛 陳劍鋒 陳元鋒

血小板在生理性止血、維持血管壁完整性等過程中起著重要作用，單采血小板是臨床常用的血液成分之一。單采血小板具有純度高、受血者機體不易產(chǎn)生針對人類白細胞抗原、人類血小板抗原的抗體等優(yōu)點[1]，在搶救患者生命中具有不可替代的作用，臨床需求量不斷增加。但由于單采血小板采集過程較全血復(fù)雜，需要一個相對固定獻血場所，獻血者采集時間更長，獻血過程中更易出現(xiàn)獻血反應(yīng)。單采血小板獻血者需要對血液安全和無償獻血的意識相對較高，且其招募要求比全血獻血者更加嚴(yán)格等多種原因增加了獻血者的招募難度[2]，因此單采血小板供應(yīng)常常不能滿足臨床需要。所以采供血機構(gòu)非常關(guān)注血液質(zhì)量，單采前的篩查工作尤顯重要，以期減少血液的報廢?，F(xiàn)對山東省血液中心2018—2021年單采血小板和單采獻血者乙肝表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）復(fù)檢陽性情況進行回顧性分析，探討提高初篩單采獻血者HBsAg的檢出能力，對避免血小板復(fù)檢出現(xiàn)陽性報廢率以及降低血液資源浪費率的相關(guān)影響意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為2018—2021年在山東省血液中心捐獻單采血小板的無償獻血者，需符合國家《中華人民共和國獻血法》[3]《獻血者健康檢查要求（GB 18467—2011）》[4]《血站技術(shù)操作規(guī)程》[5]等相關(guān)規(guī)定要求，并根據(jù)知情同意原則在唐山啟奧科技SHINOW 9.5系統(tǒng)中登記相關(guān)信息。

1.2 方法

獻血者采前需做健康征詢、一般檢查合格后進行血液初篩檢測，檢測項目包括血型、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、血液細胞計數(shù)、HBsAg。檢測結(jié)果合格后即可進行單采。單采獻血者HBsAg初篩均采用英科新創(chuàng)乙肝膠體金試紙條法，按試劑說明書要求檢測標(biāo)本。2018—2020年采用全血檢測，2021年采用全血離心后血漿檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

試紙條上檢測區(qū)和對照區(qū)各出現(xiàn)1條紅色印線為HBsAg快速檢測法陽性。ELISA復(fù)檢不合格定義如下：用2種不同廠家的試劑進行檢測，2種試劑均陽性判為陽性；1種試劑陽性再用2種試劑對原管進行雙孔檢測，至少1孔陽性亦判為陽性。對2種試劑均判為陰性的標(biāo)本再進行核酸檢測，核酸實驗反應(yīng)性標(biāo)本判定為核酸反應(yīng)陽性不合格。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

用唐山啟奧科技SHINOW 9.5系統(tǒng)中統(tǒng)計功能模塊分析，SPSS 26.0（IBM公司）進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料表示為n（%），采用χ2檢驗。兩兩間的比較采用Bonferroni調(diào)整法進行調(diào)整，P＜0.008 3為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 單采獻血者情況

2018—2021年，山東省血液中心共采集單采血小板獻血者15 495人，因為有獻血者多次參加獻血，共采集51 129人次。ELISA復(fù)檢HBsAg陽性人次數(shù)33人次，約占總?cè)舜蔚?.6‰。ELISA復(fù)檢HBsAg陽性人數(shù)33人，約占總?cè)藬?shù)的2.1‰。各年情況見表1。2021年與2018、2019年、2020年相比及各年間比較復(fù)檢HBsAg（+）單采血小板獻血者人次比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，獻血者人數(shù)比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 2018—2021年山東省血液中心乙肝表面抗原ELISA復(fù)檢陽性單采血小板獻血者數(shù)據(jù)

表1 （續(xù)）

2.2 單采血小板情況

2018—2021年，山東省血液中心單采血小板共采集86 364份，ELISA復(fù)檢HBsAg陽性51份，約占采集總份數(shù)的0.6‰。各年份情況見表2。2021年與2018、2020年相比，復(fù)檢HBsAg（+）單采血小板比例顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 2018—2021年山東省血液中心乙肝表面抗原ELISA復(fù)檢陽性單采血小板數(shù)據(jù)

3 討論

在獻血過程當(dāng)中，為保障獻血者機體健康以及避免在輸血過程當(dāng)中出現(xiàn)傳染病等相關(guān)性問題。我國血站技術(shù)操作規(guī)程當(dāng)中，對于上述問題有所明確。首先，供血機構(gòu)應(yīng)當(dāng)對獻血者機體健康進行初篩及復(fù)檢，在初篩當(dāng)中，內(nèi)容應(yīng)當(dāng)包含血紅蛋白檢測，同時，血小板獻血者應(yīng)當(dāng)對獻血人員血小板計數(shù)以及紅細胞比容等相關(guān)數(shù)據(jù)進行綜合評判。此外，各地區(qū)應(yīng)當(dāng)根據(jù)自身條件以及疾病流行史，對血型、ALT等檢測項目有所增加。各采供血機構(gòu)在對單采獻血者進行初篩檢測項目設(shè)計選擇時結(jié)合了自身的實際情況，比如新疆[6]、廣州[7]及鄭州[8]等地單采初篩檢測項目均包括血型、ALT、血液細胞計數(shù)、HBsAg、抗-HCV、抗-TP、抗-HIV，所有檢測結(jié)果合格后進行單采。東莞市[9]初篩項目包括ALT、血常規(guī)、HBsAg、抗-TP。唐山市[10]經(jīng)血傳播疾病初篩項目包括ALT、HBsAg、抗-TP、抗-HIV。本中心多年來初篩檢測項目均是血型、ALT、血液細胞計數(shù)、HBsAg，與成都[11]、深圳[12-13]等地區(qū)相同。

通過分析我國流行病史可發(fā)現(xiàn)，在我國，乙型肝炎發(fā)病幾率較高，對我國民眾身心健康造成嚴(yán)重損害。引起患者出現(xiàn)乙型肝炎原因，與患者感染乙肝病毒有直接關(guān)聯(lián)。在我國基礎(chǔ)民眾當(dāng)中，大約有10%人群均攜帶乙型肝炎病毒[14]。乙型肝炎具有較長的潛伏期，當(dāng)前對于該疾病的診斷主要依賴于血清標(biāo)志物檢測[15]，目前廣大供血機構(gòu)對于獻血者在血液檢測復(fù)檢當(dāng)中，必檢指標(biāo)為HBsAg。由于乙型肝炎在發(fā)病初期時無顯著臨床癥狀，因此，在血液檢測過程當(dāng)中，檢測乙肝病毒標(biāo)志物具有顯著影響意義。同時，在進行檢測過程當(dāng)中，應(yīng)當(dāng)選取具有較高的靈敏度及特異性手段[16-17]，最常用的檢測方法有酶聯(lián)免疫法ELISA法與膠體金法[14-18]。ELISA法與膠體金免疫層析法在乙肝表面抗原檢測方面，具有顯著應(yīng)用意義，同時，還可發(fā)揮無放射性污染等相關(guān)性優(yōu)點[14]。面對HBsAg使用膠體金試紙法檢測方法，可全面發(fā)揮檢測結(jié)果直觀快速、操作過程簡單以及無需特殊設(shè)備等多方面優(yōu)點，因此，膠體金試紙檢測手段，在廣大采供血機構(gòu)血液采集篩查方面，得到廣泛應(yīng)用。ELISA通過采用抗原抗體結(jié)合的專一性，對免疫反應(yīng)進行定量及定性檢測，上述手段不會對血液樣本中抗體及抗原免疫學(xué)特性有所改變。通過保留酶活性物質(zhì)標(biāo)記的抗體或抗原與吸附在載體上的已知抗原或抗體結(jié)合，并加入底物產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)?？蓪贵w抗原是否出現(xiàn)特異性反應(yīng)有所認(rèn)知并對底物顏色深淺進行綜合評判，用來分析抗體水平。同時，該檢測手段在檢測當(dāng)中，具有操作較為便捷、結(jié)果清晰易判讀、成本較低以及資料易儲存整理等相關(guān)性優(yōu)點，因此，應(yīng)用價值較為積極。此外，在檢測過程當(dāng)中，由于加入酶物質(zhì)，對反應(yīng)效果有極大增強，使得ELISA發(fā)揮較高靈敏度及特異性等相關(guān)性優(yōu)點[19]。在進行大批量血液標(biāo)本檢測時，更加快捷及迅速。因此，目前各地區(qū)實驗室當(dāng)中常廣泛應(yīng)用HBsAg檢測方法[14]。但ELISA方法也存在操作方法較復(fù)雜等缺點[20]，所以廣泛應(yīng)用于采供血機構(gòu)HBsAg的血液檢測復(fù)檢中。

經(jīng)統(tǒng)計，本中心2018—2021年單采獻血者HBsAg ELISA復(fù)檢陽性人數(shù)比例和人次比例均較低，陽性人數(shù)比例在0.9‰～2.4‰，陽性人次比例在0.3‰～0.9‰。2021年中心共采集了16 774人次單采血小板，復(fù)檢陽性人次降至最低5例。胡靜[21]統(tǒng)計了廣州惠州市2016年1月—2019年12月單采血小板獻血者7 865人，ELISA復(fù)查HBsAg陽性率為1.72%，中心低于相關(guān)數(shù)據(jù)。李仲平等[7]統(tǒng)計了廣州血液中心2014年1月—2018年3月單采血小板共157 692人次，復(fù)檢HBsAg雙試劑陽性人次數(shù)比例約2.1‰。2016—2020年重慶地區(qū)[22]單采血小板獻血者共采集68 755人次，復(fù)檢HBsAg陽性為133例，比例約為1.9‰。2021年中心ELISA復(fù)檢陽性人次比例0.3‰均低于相關(guān)報導(dǎo)。因為單項核酸HBV-DNA（+）的單采獻血者人次比例，中心2018—2021年在0～0.4‰之間，重慶地區(qū)統(tǒng)計約為0.45‰。2021年中心的比例約為0.2‰，與報導(dǎo)相比也處于較低水平。

2018—2021年中心單采血小板HBsAg ELISA復(fù)檢陽性報廢率在0.2‰～0.9‰，2021年比例降至最低約0.2‰，與2018年和2020年0.9‰相比均明顯降低，考慮與2021年改用離心后血漿檢測方法有關(guān)。2021年和2019年相比沒有顯著差異的原因考慮與2019年8名陽性獻血者捐獻雙份血小板比率較低有關(guān)。2018—2021年復(fù)檢HBsAg陽性的獻血者雙份捐獻率分別是66.7%、25.0%、72.7%、40%，可以看出2019年比例為4年內(nèi)最低。

劉艷芳等[23]統(tǒng)計玉溪市中心血站2015—2017年共采集1 913份單采血小板，HBsAg復(fù)檢陽性報廢率約為0.5‰。王珺等[8]統(tǒng)計了鄭州市2013—2017年采集單采血小板，ELISA復(fù)檢HBsAg陽性率為1‰?？梢钥闯鲋行?021年的陽性報廢比例約為0.2‰，與其他采供血機構(gòu)相比處于較低水平。

膠體金法試劑靈敏度較ELISA低是引起HBsAg漏檢的主要原因之一[18，24]。賀生梅[25]將獻血者ELISA法和核酸檢測HBsAg陽性的樣本171例再次采用膠體金法復(fù)檢，檢出陽性47例。李昶[18]檢測HBsAg指標(biāo)時，通過采取膠體金法及酶聯(lián)免疫法，對送檢4 500例血液樣本進行綜合評判，其中通過采用酶聯(lián)免疫法檢測后，檢出陽性標(biāo)本305例，陽性率為6.78%；而使用膠體金法，樣本檢測后檢出陽性標(biāo)本298例，陽性率為6.62%。而分析2種檢測方法，共同檢測時檢出陽性血液標(biāo)本共295例。酶聯(lián)免疫法與膠體金法相對比檢出結(jié)果，陽性率有明顯增加。同時，存在3例樣本通過膠體金法檢測后，出現(xiàn)結(jié)果陽性，而酶聯(lián)免疫法檢出陰性。楊俊鴻等[26]對31例單采獻血者進行ELISA檢測HBsAg，當(dāng)檢測結(jié)果為陽性時，再次使用膠體金法進行再次檢測發(fā)現(xiàn)，存在15例陽性及16例陰性問題?？偟囊恢滦詾?8.4%。ELISA陽性標(biāo)本中S/CO值小于10，而面對漏檢標(biāo)本，通過采取膠體金法進行檢測后發(fā)現(xiàn)，陰性結(jié)果是4例，陽性結(jié)果3例，一致性為9.7%；S/CO 值在10～30時用膠體金法檢測為陽性的標(biāo)本總共有14例，陰性為2例，一致性為45.2%；S/CO值大于30的9例標(biāo)本再次用膠體金法檢測全部檢出，一致性為100%。何衛(wèi)社等[27]通過對319例陽性標(biāo)本采取ELISA檢測HBsAg，發(fā)現(xiàn)6例S/CO值在29以上標(biāo)本膠體金法復(fù)檢仍為陰性。而分析膠體金法漏檢因素包含少量標(biāo)本存在HBV變異或亞型，以及試劑包被片段不同有直接關(guān)聯(lián)。此外，部分陽性標(biāo)本由于水平過高，與抗原抗體結(jié)合最大比例不適宜，也會出現(xiàn)假陰性結(jié)果[28]。

乙肝膠體金試紙條法說明書要求檢測標(biāo)本全血（指血或耳血）、血漿、血清均可選用。在實際工作中，全血加樣易出現(xiàn)混有氣泡、加樣量不足、全血過于粘稠輔助液添加不準(zhǔn)確等情況。另外主要是工作人員因素[27]，如責(zé)任心不夠、培訓(xùn)不到位、觀察時間不夠、試劑貯存不當(dāng)、獻血者人數(shù)較多時未做標(biāo)記等原因影響結(jié)果的正確判定導(dǎo)致漏檢。通過對多方面因素進行綜合評判后，血液檢驗中心應(yīng)當(dāng)在實際工作當(dāng)中，采取適宜解決措施，以此對初篩HBsAg遺漏問題有所解決。（1）首先，應(yīng)當(dāng)對血液樣本檢驗操作人員進行綜合培訓(xùn)，以此提升操作人員及技術(shù)能力，尤其面對新入職員工。（2）明確了使用離心后血漿檢測，不用輔助液。乙肝試紙條滲透速度及自身快慢，與檢測結(jié)果準(zhǔn)確性有直接關(guān)聯(lián)[29]。當(dāng)乙肝試紙條滲透速度太快或太慢時，均會引起檢測結(jié)果出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象。從而保證加樣量穩(wěn)定，規(guī)范工作人員的操作。（3）獻血者初篩檢測時制定好先做乙肝試紙條檢測再做轉(zhuǎn)氨酶檢測的步驟流程，這樣減少獻血者等待時間，優(yōu)化采血流程，提高獻血者的獻血體驗和滿意度。（4）標(biāo)記每一位獻血者的條碼，防止獻血者過多時出現(xiàn)誤判、漏判，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。（5）試驗操作嚴(yán)格遵循說明書，規(guī)范加樣，記錄實驗開始和結(jié)束時間，保證試紙條判讀時間至少為10 min后。（6）做好試劑的質(zhì)控把關(guān)。試劑貯存得當(dāng)，防止受潮，開蓋時準(zhǔn)確標(biāo)識開啟時間及失效時間，開蓋后盡快使用。（7）保證篩查標(biāo)本離心后無溶血、脂肪血等情況。（8）保證單采初篩實驗環(huán)境穩(wěn)定。（9）制定量化考核目標(biāo)，質(zhì)管科加強考核監(jiān)督，獎懲并進。

本中心采取了上述綜合措施，2021年ELISA復(fù)檢的HBsAg陽性單采血小板報廢率降至近年來最低約0.2‰。單采獻血者初篩時采用全血離心后血漿進行HBsAg的膠體金試紙條檢測方法降低了單采血小板的報廢，該方法適用于單采獻血者的初篩。血液質(zhì)量和輸血安全是采供血機構(gòu)的重心，今后中心將繼續(xù)積累數(shù)據(jù)，持續(xù)觀察，不斷摸索改進，減少寶貴的血小板資源浪費。