液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定香蕉中三唑類農(nóng)藥①

張 月 黃海珠 韓丙軍

（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院分析測試中心/海南省熱帶果蔬產(chǎn)品質(zhì)量安全重點實驗室 海南?？?571101）

三唑類農(nóng)藥是指含有1，2，4-三唑環(huán)的有機含氮雜環(huán)類化合物，屬于殺菌劑，同時具有植物生長調(diào)節(jié)作用［1］，是殺菌劑類別中品種最多的一大類［2］，具有廣譜、內(nèi)吸、高效等特點，可防治多種作物的銹病、白粉病、葉斑病、根腐病、炭疽病等病害［3-4］，對防治香蕉葉斑病、黑星病、黑疫病等均具有較好的防治效果。

目前，三唑類農(nóng)藥殘留的檢測方法主要有氣相色譜法（GC）、液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）［5-8］。本研究應用 QuEChERS 方法，采用液質(zhì)聯(lián)用儀檢測香蕉5種三唑類農(nóng)藥的殘留量。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

島津LC-40DX3，配AB SECIENCE 4500質(zhì)譜檢測器；色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱1.7 μm，2.1×50 mm；離心機，HITACHI公司制造；快速混勻器等其它實驗室常用儀器設(shè)備。

1.2 材料與試劑

香蕉：采自?？谙憬痘亍＜状?、乙腈（色譜純）：賽默飛世爾科技有限公司；其他未說明試劑均為國產(chǎn)分析純。農(nóng)藥（戊唑醇、氟環(huán)唑、氟硅唑、丙環(huán)唑、腈菌唑）標準品（純度均＞98%）：德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司制造。

1.3 方法

1.3.1 標準溶液配制

準確稱取5種三唑類殺菌劑標準品，用甲醇定容，配制為1 000 μg/mL的標準儲備液，-18 ℃保存。本實驗上機檢測采用基質(zhì)標準曲線，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.2 樣品前處理

將10.0 g香蕉樣品（精確至0.01 g）放入50 mL聚丙烯刻度離心管中，20 mL乙腈溶液提取，混合振蕩10 min，加入2 g氯化鈉，振蕩5 min，離心，取上層清液，經(jīng)PSA凈化，過0.22 μm濾膜，待測定。

1.3.3 儀器條件

液相條件：色譜柱C18，1.7 μm（2.1×50 mm），流動相A水-B甲醇，0.25 mL/min流速，進樣量1 μL，柱溫35 ℃，采用梯度洗脫的方式，具體參數(shù)見表1。質(zhì)譜條件：ESI+離子源。檢測方式為多反應監(jiān)測MRM掃描模式，霧化氣壓力55 psi，離子源溫度450 ℃，電噴霧電壓4 500 V，霧化氣、碰撞氣為氮氣。其他監(jiān)測條件見表2。

表1 流動相比例

表2 多反應監(jiān)測條件

1.3.4 準確度與精密度測定

繪制以峰面積為應變量，質(zhì)量濃度為自變量的標準曲線。在空白香蕉樣品添加標準溶液（0.005、 0.010、 0.100 mg/kg） 3 個 濃 度 ， 按1.3.2開展回收率試驗。每濃度重復5次，得到平均回收率、精密度及RSD。

1.3.5 基質(zhì)效應

在農(nóng)藥殘留檢測中，基質(zhì)效應（ME）會影響檢測結(jié)果準確性。評估基質(zhì)效應并采取有效措施消除基質(zhì)效應能提高分析結(jié)果的可靠性［9-10］。本研究采用基質(zhì)匹配標準溶液與試劑標準工作溶液分別擬合曲線方程斜率之比來評價基質(zhì)效應，見式（1）。

式（1）中，B為基質(zhì)中配制的標準溶液曲線斜率，A為純?nèi)軇┲信渲频臉藴使ぷ饕呵€斜率。

根據(jù)ME絕對值，將基質(zhì)效應強度分為不同級別，當∣ME∣≤ 20% ，為弱基質(zhì)效應；∣ME｜為20%～50% ，為中等程度基質(zhì)效應；｜ME∣≥50%，為強基質(zhì)效應，需采取措施補償基質(zhì)效應［11-12］。且當ME 值≥1，為基質(zhì)增強效應，反之則存在基質(zhì)減弱效應［13］。

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)效應及方法的線性關(guān)系

以香蕉為研究對象，考察5種三唑類農(nóng)藥的基質(zhì)效應。相同樣品前處理凈化后空白基質(zhì)配制的標準溶液與甲醇配制的標準溶液采用1.3.5中的公式計算基質(zhì)效應，結(jié)果如表3所示，5種三唑類農(nóng)藥在香蕉基質(zhì)中產(chǎn)生不同強度的基質(zhì)效應，戊唑醇在香蕉中產(chǎn)生的基質(zhì)增強效應為弱基質(zhì)效應，氟環(huán)唑、氟硅唑、丙環(huán)唑和腈菌唑在香蕉中產(chǎn)生的基質(zhì)減弱效應為強基質(zhì)效應。

表3 5種三唑類農(nóng)藥的基質(zhì)效應

2.2 方法準確度和精密度

在香蕉基質(zhì)中添加0.005、0.010、0.100 mg/kg 3個濃度的5種三唑類標準溶液，每個水平進行5次實驗。結(jié)果如表4所示。由表4可知，3個濃度水平下，5種三唑類殺菌劑的平均回收率范圍為90%～118%，RSD為0.8%～8.8%，說明該方法準確度和精密度滿足農(nóng)藥定量分析要求［14］。

表4 三唑類化合物的平均回收率和RSD（ n = 5）

3 結(jié)論

本研究建立了香蕉中5種三唑類殺菌劑殘留量檢測的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，該方法前處理簡單、靈敏度高，可對待測組分進行準確地定性定量分析，回收率滿足農(nóng)殘檢測要求，有較強的可行性和實用性，為食品中農(nóng)藥最大殘留限量標準的完善和制定提供了技術(shù)支持。