枳殼HPLC 含量測(cè)定中不確定度計(jì)算

寧知貴，洪家順，劉威

（江西省道地藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)研究中心，江西南昌，330029）

0 引言

枳實(shí)、 枳殼,為中醫(yī)臨床常用中藥。2020 年版中國(guó)藥典枳殼源于蕓香科植物酸橙CitrusaurantiumL及其栽培變種的未成熟果實(shí),有理氣寬中、行滯消脹的功效。枳殼中HPLC 含量測(cè)定流程較多，影響結(jié)果的因素不能直接判斷，對(duì)于新手來(lái)說(shuō)，結(jié)果的判斷準(zhǔn)確性就會(huì)受到極大的影響。因此，有必要對(duì)枳殼中柚皮苷含量測(cè)定整個(gè)過(guò)程進(jìn)行分析，找出影響不確定度的因素，如實(shí)反映檢測(cè)的置信度和準(zhǔn)確性。

1 儀器設(shè)備

XSR205DU/A 電 子 天 平（十 萬(wàn) 分 之一），梅特勒-托利多；高效液相色譜儀ACQUITYUPLCH-ClassPLUS， 沃 特 斯 中 國(guó) 有限公司；25mL 容量瓶，容量允差：±0.020mL（A 級(jí)）， 天 玻；100mL 容 量 瓶， 容 量 允 差：±0.04mL（A 級(jí)），天玻；10mL 吸量管，容量允差：±0.010mL（A 級(jí)），天玻；50mL 吸量管，容量允差：±0.010mL（A 級(jí)），天玻。

2 測(cè)量不確定度來(lái)源

2.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（20:80）（用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL 含80μg 柚皮苷的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粗粉約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1.5 小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10mL 置25mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得，含量為7.68%。

3 計(jì)算模型

3.1 不確定度來(lái)源

如圖：

3.2 數(shù)學(xué)模型

柚皮苷含量R按下式計(jì)算結(jié)果為：

式中，A 樣：樣品中柚皮苷峰面積；A 對(duì)：對(duì)照品中柚皮苷峰面積；mx：樣品的稱樣量，mg；Vx1：樣品第一次吸取體積，mL；Vx2：樣品吸取體積，mL；Vx3：樣品第二次定容體積，mL；ms：對(duì)照品的稱樣量，mg；Vs1：對(duì)照品第一次定容體積，mL；根據(jù)不確定度傳律公式得出：

根據(jù)測(cè)定過(guò)程中各個(gè)不確定度分量的評(píng)定，計(jì)算出測(cè)定過(guò)程中的不確定度，并評(píng)估合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度。由于目前尚無(wú)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于評(píng)價(jià)化驗(yàn)室的操作，因此所有可能的影響因子均需考慮，如對(duì)照品的定容、樣品的稱量、樣品的定容等，得出不確定度數(shù)學(xué)模型：

3.3 不確定度主要來(lái)源

經(jīng)過(guò)對(duì)上面公式的分析，樣品含量測(cè)定的不確定度主要由下面幾個(gè)方面組成：

被測(cè)樣品的重復(fù)性引入的不確定度U(C02)；被測(cè)樣品稱取引入不確定度Umx；被測(cè)樣品的定容引入不確定度UVx1、UVx2；被測(cè)樣品吸取引入不確定度UVx3。

對(duì)照品的重復(fù)性引入的不確定度U(C01)；對(duì)照品稱取引入不確定度Ums；對(duì)照品的定容引入不確定度UVs1；儀器測(cè)定引入不確定度UE。

4 計(jì)算A 類不確定度

4.1 測(cè)試對(duì)照品的重復(fù)性引入的不確定度U(C01)

表1 對(duì)照品重復(fù)性引入數(shù)據(jù)

如上表，對(duì)照品重復(fù)性引入的不確定度U(C01)：

4.2 測(cè)試樣品的重復(fù)性引入的不確定度U(C02)

如下表， 樣品重復(fù)性引入的不確定度U(C01)：

表2 測(cè)試樣品重復(fù)性引入數(shù)據(jù)

實(shí)驗(yàn)重復(fù)性測(cè)量引入的不確定度為A 類不確定度，表示如下：

5 計(jì)算B 類不確定度

5.1 對(duì)照品配制引入不確定度UMs

5.2 被測(cè)樣品的定容引入不確定度UVx

溫度引入不確定度：實(shí)驗(yàn)室的溫度在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)，因此因溫度控制不充分而產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度可以忽略不計(jì)。

50mL 移液管經(jīng)校準(zhǔn)，已知在20℃時(shí)，體積最大誤差為±0.010mL，按則引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

10mL 移液管經(jīng)校準(zhǔn)，已知在20℃時(shí)，體積最大誤差為±0.010mL，按均勻分布，則引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

5.3 儀器測(cè)定引入不確定度UE

ACQUITYUPLCH-ClassPLUS 高效液相色譜儀經(jīng)檢定，定量重復(fù)性為0.7%，按均勻分布，則引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

5.4 其它

由對(duì)照品含量引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度,對(duì)照品說(shuō)明書中沒(méi)有報(bào)告含量的允差極值，故忽略不計(jì)。

6 合成不確定度

6.1 不確定度分量

表3 不確定度分量表

6.2 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

將上述數(shù)據(jù)合成得枳殼含量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

6.3 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

實(shí)驗(yàn)測(cè)得柚皮苷含量測(cè)定結(jié)果為7.68%，則測(cè)量結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

7 擴(kuò)展不確定度

取擴(kuò)展因子k=2，則擴(kuò)展不確定度為

8 測(cè)量結(jié)果

柚皮苷含量測(cè)定以R表示為R=7.68%

該樣品的被測(cè)量之值為Y=(7.68%±0.035%，k=2)g/g，其中擴(kuò)展不確定度U=0.035%是由合成不確定度U(R)=0.01732%乘以包含因子k=2得到。