理沖顆粒的薄層鑒別方法的建立

侯秋苑，李惠敏，林鳳屏，馮白茹，殷蕾，梁可

（1.惠州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東惠州，516025；2.惠州市藥用植物研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東惠州，516025；3.惠州市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東惠州，516025）

0 引言

理沖湯出自清末名醫(yī)張錫純所著《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》上冊(cè)，由生黃芪、黨參、白術(shù)、生山藥、天花粉、知母、三棱、莪術(shù)、生雞內(nèi)金九味藥材組成，具有益氣行血，調(diào)經(jīng)祛瘀之功效［1］。筆者前期研究了理沖顆粒的制備工藝和含量測(cè)定方法。為了更有效地控制其質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)對(duì)理沖顆粒進(jìn)行薄層色譜鑒別研究，為理沖顆粒的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

KQ-250 超 聲 波 清 潔 機(jī)；BWS-20 恒 溫水槽水浴鍋；XS205 分析天平（METTLER TOLEDO）；SL-373 醫(yī) 藥 陰 涼 柜；DHG-9070A電熱鼓風(fēng)干燥箱；薄層硅膠預(yù)制板（煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所、Merck）；CAMAG REPROSTAR 3薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)（瑞士卡瑪公司）。

1.2 試藥

理沖顆粒（自制）；理沖顆粒陰性（自制）；黃芪甲苷對(duì)照品（北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司，批號(hào):2001220，純度≥98%）；三棱對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121521-201905）。水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芪甲苷薄層色譜鑒別

2.1.1 理沖顆粒溶液的制備［2］

取理沖顆粒10g，加4%濃氨的80%甲醇50mL，回流1h，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，定容到5mL 的容量瓶，制成理沖顆粒溶液。

2.1.2 黃芪甲苷對(duì)照品溶液的制備［2］

稱取黃芪甲苷對(duì)照品10mg，加80%甲醇制成每1mL 含0.1mg 的溶液，即得。

2.1.3 理沖顆粒陰性溶液的制備

取不含黃芪的理沖顆粒10g，按“2.1.1”流程制成理沖顆粒陰性溶液。

2.1.4 展開(kāi)系統(tǒng)的考察［3］

分別吸取理沖顆粒溶液、黃芪甲苷對(duì)照品溶液和理沖顆粒陰性溶液各1 ～5μL，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）的下層溶液為展開(kāi)系統(tǒng)Ⅰ［4］、三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下層溶液為展開(kāi)系統(tǒng)Ⅱ、三氯甲烷-甲醇-水（17:7:2）的下層溶液為展開(kāi)系統(tǒng)Ⅲ，展開(kāi)，拿出，自然晾干，再噴適量10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色，置于365 nm 紫外光燈下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果表明，展開(kāi)系統(tǒng)Ⅱ的展開(kāi)效果最佳，陰性溶液色譜在相應(yīng)位置上無(wú)干擾，因此選擇三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下層溶液為該薄層鑒別的展開(kāi)系統(tǒng)。

圖1 展開(kāi)系統(tǒng)考察

2.1.5 耐用性考察［5］

（1）不同薄層板的考察。分別吸取理沖顆粒溶液、黃芪甲苷對(duì)照品溶液和理沖顆粒陰性溶液各5μL，分別點(diǎn)于3 種不同的硅膠G 板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，拿出，自然晾干，再噴適量10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色，置于365nm 紫外光燈下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，Merck 板的分離效果優(yōu)于其他板，但影響不大。

圖2 薄層板考察

（2）不同展開(kāi)溫度的考察。分別吸取理沖顆粒溶液、黃芪甲苷對(duì)照品溶液和理沖顆粒陰性溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G 板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下層溶液為展開(kāi)劑，在8℃、25℃、32℃的溫度下展開(kāi)，拿出，自然晾干，再噴適量10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色，置于365 nm 紫外光燈下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果表明，展開(kāi)溫度對(duì)分離結(jié)果影響不大，可選擇在室溫下展開(kāi)。

圖3 溫度考察

（3）不同展開(kāi)濕度的考察。分別吸取理沖顆粒溶液、黃芪甲苷對(duì)照品溶液和理沖顆粒陰性溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G 板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下層溶液為展開(kāi)劑，在相對(duì)濕度為32%、58%、88%的濕度下展開(kāi)，拿出，自然晾干，再噴適量10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色，置于365 nm紫外光燈下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖4。結(jié)果表明，不同的相對(duì)濕度對(duì)展開(kāi)結(jié)果影響不大。

圖4 濕度考察

2.2 三棱薄層色譜鑒別［6-8］

2.2.1 理沖顆粒溶液和三棱對(duì)照藥材溶液的制備

取理沖顆粒10g，加乙醇50mL，加熱回流1h，過(guò)濾，蒸干濾液，殘?jiān)?mL 乙醇溶解，制成理沖顆粒溶液。另取三棱對(duì)照藥材2g，用相同方法制成三棱對(duì)照藥材溶液。

2.2.2 理沖顆粒陰性溶液的制備

取不含三棱的理沖顆粒10g，按“2.2.1” 流程制成理沖顆粒陰性溶液。

2.2.3 展開(kāi)系統(tǒng)的考察

分別吸取理沖溶液、三棱對(duì)照藥材溶液和理沖顆粒陰性溶液各1～5μL，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮（9.2:0.8）為展開(kāi)系統(tǒng)Ⅰ，環(huán)己烷-乙酸乙酯（4:1）為展開(kāi)系統(tǒng)Ⅱ，石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）為展開(kāi)系統(tǒng)Ⅲ，展開(kāi)，拿出，自然晾干，置于365 nm紫外光燈下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖5。結(jié)果表明，展開(kāi)系統(tǒng)Ⅲ的展開(kāi)效果最佳，理沖顆粒陰性溶液色譜在相應(yīng)位置上無(wú)干擾。因此石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）為該薄層鑒別的展開(kāi)系統(tǒng)。

圖5 展開(kāi)系統(tǒng)考察

2.2.4 耐用性考察［5］

（1）不同薄層板的考察。分別吸取理沖溶液、三棱對(duì)照藥材溶液和理沖顆粒陰性溶液各5μL，分別點(diǎn)于3 種不同的硅膠G 板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）為展開(kāi)劑，拿出，自然晾干，置于365 nm 紫外光燈下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖6。結(jié)果表明，不同材料的薄層板對(duì)展開(kāi)效果影響不大。

圖6 薄層板考察

（2）不同展開(kāi)溫度的考察。分別吸取理沖溶液、三棱對(duì)照藥材溶液和理沖顆粒陰性溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）為展開(kāi)劑，在8℃、25℃、32℃的溫度下展開(kāi)，拿出，自然晾干，置于365 nm 紫外光燈下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖7。結(jié)果表明，展開(kāi)溫度對(duì)分離結(jié)果影響不大，選擇在室溫下展開(kāi)。

圖7 溫度考察

（3）不同展開(kāi)濕度的考察。分別吸取理沖溶液、三棱對(duì)照藥材溶液和理沖顆粒陰性溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4:1）為展開(kāi)劑，在相對(duì)濕度為32%、58%、88%的濕度下展開(kāi)，拿出，自然晾干，置于365 nm 紫外光燈下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖8。結(jié)果表明，不同的相對(duì)濕度對(duì)展開(kāi)結(jié)果影響不大。

圖8 濕度考察

以上黃芪甲苷和三棱的薄層色譜結(jié)果可說(shuō)明，本次實(shí)驗(yàn)建立的理沖顆粒的薄層色譜鑒別方法分離效果佳，結(jié)果可重現(xiàn)，能用于理沖顆粒的鑒別并為理沖顆粒的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

3 討論

實(shí)驗(yàn)研究中，擬對(duì)黨參、白術(shù)、山藥、天花粉進(jìn)行薄層鑒別，但由于以上四味成分均具有氨基酸成分，陰性樣品存在互相干擾情況，因此未再進(jìn)行深入研究。

實(shí)驗(yàn)考察了不同材質(zhì)的薄層板、溫度、濕度對(duì)理沖顆粒分離程度的影響，結(jié)果表明，供試品在不同環(huán)境下的分離程度佳，斑點(diǎn)清晰可見(jiàn)。另對(duì)黃芪甲苷對(duì)照品溶液、三棱對(duì)照藥材、理沖顆粒溶液及其陰性溶液的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，以上溶液在放置96 小時(shí)后點(diǎn)樣，層析結(jié)果和之前一樣，由此可見(jiàn)樣品穩(wěn)定性較好。