核桃楸皮的化學(xué)成分研究

付起鳳，魏硯君，方振興，劉艷，劉源，張曉娟，羅雨萌，周媛媛?

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省科學(xué)院火山與礦泉研究所，黑龍江 五大連池 164155）

核桃楸（Juglans mandshuricaMaxim）又被稱為山核桃、胡桃楸、小核桃等，為胡桃科胡桃屬落葉喬木，其根、皮、葉和種子都有一定的藥用價(jià)值，其中對(duì)核桃楸皮（barks ofJuglans mandshuricaMaxim）的研究和應(yīng)用最多［1］。核桃楸是由核桃楸樹(shù)皮、枝皮和果皮經(jīng)干燥而成，味苦、性寒，具有清熱、解毒、明目、止痢、止帶等功效［2?4］?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，核桃楸皮中含有豐富的化學(xué)成分，包括醌類、黃酮類、二芳基庚烷類、酚酸類等［5］，具有良好的抗菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛等多種藥理活性［6－7］。研究表明，核桃楸皮可用于各種腫瘤疾病的治療，且效果顯著［8－9］。為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用此藥用資源，筆者對(duì)核桃楸皮進(jìn)行系統(tǒng)的成分分離，從中共分離得到12個(gè)化合物。

1 儀器與材料

Bruker－400 型超導(dǎo)核磁共振光譜儀（美國(guó)BRUKER）；Q－Tof（ESI）LC/MS 6530高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent）；515－2414半制備型高效液相色譜（Waters公司）；AgilentEclipse XDB－C18半制備色譜柱（9.4 mm ×250 mm，5 μm）（美國(guó)Agilent 公司）；EYELAN－1100 旋蒸儀（東京理化公司）；DTC－22隔膜真空泵（東京理化公司）；硅膠填料（200～ 300 目，青島海洋化工廠）；ODS反相硅膠填料（日本YMC）；預(yù)制薄層板GF254（青島海洋化工廠）；其他試劑均為分析純。

核桃楸皮采自黑龍江省牡丹江地區(qū)張廣才嶺，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物學(xué)教研室蘇連杰教授鑒定為胡桃楸（Jugland mandshuricaMaxim）的干皮。標(biāo)本（20191022）保存于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)教研室。

2 提取分離

核桃楸皮干燥藥材5.5 kg，適當(dāng)粉碎，90%乙醇10 L 加熱回流提取3 次，每次2.5 h，合并過(guò)濾液并回收乙醇得到濃縮浸膏。用水將浸膏捏溶后，分別用等體積的石油醚、二氯甲烷、正丁醇依次萃取至有機(jī)相近無(wú)色，取石油醚部位60 g，通過(guò)硅膠柱色譜分離，以石油醚－乙酸乙酯（1∶0→0∶1）梯度洗脫，得到Fr.A～Fr.D，其中流分Fr.A經(jīng)硅膠色譜柱以石油醚－乙酸乙酯（20∶1）等度洗脫以及重結(jié)晶得到化合物7（38 mg），F(xiàn)r.C 經(jīng)硅膠色譜柱以石油醚－乙酸乙酯梯度洗脫（20∶1→5∶1），洗脫后得到化合物8（6.3 mg）；取二氯甲烷部位55 g，同上以硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷－甲醇（1∶0→0∶1）梯度洗脫，得到Fr.E～Fr.I，其中流分Fr.F 經(jīng)硅膠柱色譜以二氯甲烷－甲醇（15∶1）等度洗脫得到化合物9（9.2 mg）；正丁醇部位55 g，以二氯甲烷－甲醇（15∶0→0∶1）梯度洗脫，得到Fr.J～Fr.O，其中流分Fr.J通過(guò)硅膠柱色譜分離，以氯仿－甲醇（15∶0→0∶1）梯度洗脫，重結(jié)晶得到化合物10（4.3 mg）、化合物11（6.6 mg）、化合物12（5.1 mg），流分Fr.N 通過(guò)ODS柱色譜以甲醇－水（10%→90%）梯度洗脫并取30%部位以半制備HPLC 分離得到化合物5（3.5 mg）、化合物6（3.0 mg），70%部位以半制備HPLC 分離得到化合物1（2.2 mg）、化合物2（2.5 mg）、化合物3（2.8 mg）和化合物4（2.1 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

黃色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：445.193 3［M+H］+，推測(cè)分子量為444。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.30（1H，dddd，J=3.8，4.6，6.5，13.6 Hz，H－3a），2.33（1H，dddd，J=2.2，4.6，8.9，13.6 Hz，H－3b），2.45（1H，ddd，J=4.6，6.5，17.6 Hz，H－2a），2.88（1H，ddd，J=4.6，8.9，17.6 Hz，H－2b），3.36（1H，m，H－2′），3.38（2H，dd，J=2.4，7.2 Hz，H－3′，4′），3.62（1H，m，H－5′），4.40（1H，d，J=7.6 Hz，H－1′），4.45（1H，dd，J=7.2，11.6 Hz，H－6′a），4.67（1H，dd，J=2.2，11.6 Hz，H－6′b），7.98（2H，d，J=8.8 Hz，H－2″，6″），6.80（2H，d，J=8.8 Hz，H－3″，5″）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：200.5（C－1），35.4（C－2），30.9（C－3），76.2（C－4），130.2（C－5），134.4（C－6），129.0（C－7），127.5（C－8），132.7（C－9），143.8（C－10），103.3（C－1′），75.4（C－2′），78.2（C－3′），72.7（C－4′），75.6（C－5′），65.3（C－6′），122.4（C－1″），132.8（C－2″，6″），116.6（C－3″，5″），163.4（C－4″），167.9（C－7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］對(duì)照基本一致，鑒定化合物1 為（4S）－4－羥基－α－四氫萘酮－4－O－β－D－（6′－O－4″－羥基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷。

3.2 化合物2

黃色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：483.174 9［M+Na］+，推測(cè)分子量為460。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.15（1H，tt，J=4.2，12.8 Hz，H－3a），2.38（1H，dt，J=3.6，17.2 Hz，H－2a），2.49（1H，dddd，J=1.3，3.2，4.7，12.8 Hz，H－3b），3.05（1H，ddd，J=5.0，13.4，17.2 Hz，H－2b），3.22（1H，m，H－2′），3.38（2H，m，H－3′，4′），3.67（1H，m，H－5′），4.42（1H，dd，J=6.8，11.8 Hz，H－6′a），4.62（1H，d，J=7.8 Hz，H－1′），4.64（1H，dd，J=2.0，11.8 Hz，H－6′b），5.38（1H，t，J=3.2 Hz，H－4），6.80（2H，dt，J=2.6，8.8 Hz，H－3″，5″），7.11（1H，dd，J=1.0，8.2 Hz，H－6），7.28（1H，t，J=8.2 Hz，H－7），7.44（1H，dd，J=1.0，8.2 Hz，H－8），7.98（2H，dt，J=2.6，8.8 Hz，H－2″，6″）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：201.2（C－1），33.4（C－2），30.2（C－3），70.0（C－4），157.2（C－5），122.5（C－6），130.4（C－7），119.0（C－8），134.7（C－9），129.8（C－10），103.5（C－1′），75.4（C－2′），78.0（C－3′），72.5（C－4′），75.6（C－5′），65.1（C－6′），122.0（C－1″），132.8（C－2″，6″），116.4（C－3″，5″），163.5（C－4″），168.0（C－7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］對(duì)照基本一致，鑒定化合物2 為（4S）－4，5－二羥基－α－四氫萘酮－4－O－β－D－（6′－O－4″－羥基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷。

3.3 化合物3

黃色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：499.166 6［M+Na］+，推測(cè)分子量為476。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.18（2H，m，H－3），2.45（1H，dt，J=3.4，17.2 Hz，H－2a），3.04（1H，ddd，J=6.0，12.8，17.2 Hz，H－2b），3.44（1H，dd，J=3.4，17.2 Hz，H－4′），3.47（1H，t，J=8.6 Hz，H－3′），3.50（1H，dd，J=8.6，16.5 Hz，H－2′），3.71（1H，dt，J=2.0，8.4 Hz，H－5′），4.40（1H，dd，J=7.4，11.6 Hz，H－6′a），4.61（1H，dd，J=2.0，11.6 Hz，H－6′b），4.77（1H，d，J=7.6 Hz，H－1′），5.30（1H，t，J=3.2 Hz，H－4），6.68（1H，d，J=8.8 Hz，H－7），6.85（2H，dd，J=2.8，8.6 Hz，H－3″，5″），7.44（1H，d，J=9.1 Hz，H－6），7.80（2H，dt，J=2.8，8.6 Hz，H－2″，6″）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：205.2（C－1），33.4（C－2），30.1（C－3），61.7（C－4），148.2（C－5），128.5（C－6），118.5（C－7），159.1（C－8），116.4（C－9），135.0（C－10），104.5（C－1′），75.2（C－2′），78.0（C－3′），72.3（C－4′），75.6（C－5′），65.0（C－6′），122.4（C－1″），132.8（C－2″，6″），116.3（C－3″，5″），163.4（C－4″），167.9（C－7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］對(duì)照基本一致，鑒定化合物3 為（4S）－4，5，8－三羥基－α－四氫萘酮－5－Oβ－D－（6′－O－4″－羥基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷。

3.4 化合物4

紅色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：377.324 8［M+Na］+，推測(cè)分子量為354。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.12（1H，tdd，J=2.6，4.4，13.8 Hz，H－3a），2.49（1H，d，J=4.4 Hz，H－3b），2.51（1H，d，J=5.0 Hz，H－2a），3.15（1H，m，H－2′），3.19（1H，d，J=5.0 Hz，H－2b），3.32（1H，m，H－3′），3.33（1H，m，H－4′），3.34（1H，m，H－5′），3.82（1H，m，H－6′a），3.90（3 H，s，H－11），3.94（1H，m，H－6′b），4.49（1H，d，J=7.6 Hz，H－1′），5.45（1H，t，J=2.8 Hz，H－4），7.30（1H，dd，J=1.2，8.2 Hz，H－6），7.46（1H，t，J=8.2 Hz，H－7），7.56（1H，dd，J=1.2，8.2 Hz，H－8）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：200.6（C－1），33.5（C－2），30.3（C－3），68.7（C－4），159.1（C－5），117.0（C－6），130.5（C－7），120.0（C－8），134.4（C－9），131.9（C－10），56.8（C－11），104.2（C－1′），75.2（C－2′），78.0（C－3′），72.0（C－4′），78.3（C－5′），63.0（C－6′）。經(jīng)與文獻(xiàn)［11］對(duì)照基本一致，鑒定化合物4 為（4R）－4－羥基－5－甲氧基－α－四氫萘酮－4－O－β－D－吡喃葡萄糖苷。

3.5 化合物5

黃色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：489.312 9［M+H］+，推測(cè)分子量為488。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.24（2H，m，H－3），2.50（1H，dt，J=3.5，17.6 Hz，H－2a），3.04（1H，m，H－2b），3.18（1H，dd，J=2.0，11.6 Hz，H－6′a），3.34（1H，s，H－4′），3.44（1H，t，J=8.8 Hz，H－2″），3.53（1H，m，H－2′），3.58（1H，m，H－4″），3.62（1H，t，J=5.6 Hz，H－5″），3.66（1H，d，J=7.6 Hz，H－1′），4.94（1H，d，J=1.2 Hz，H－1″），5.36（1H，t，J=3.0 Hz，H－4），6.87（1H，d，J=8.8 Hz，H－7），7.50（1H，d，J=8.8 Hz，H－6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：206.1（C－1），33.5（C－2），30.3（C－3），61.5（C－4），149.1（C－5），128.6（C－6），119.0（C－7），159.3（C－8），116.4（C－9），135.4（C－10），104.3（C－1′），77.2（C－2′），83.0（C－3′），72.0（C－4′），78.6（C－5′），63.2（C－6′），110.3（C－1″），77.6（C－2″），85.7（C－3″），75.2（C－4″），68.6（C－5″）。經(jīng)與文獻(xiàn)［12］對(duì)照基本一致，鑒定化合物5 為（4S）－4，5，8－三羥基－α－四氫萘酮－5－O－（6′－O－α－L－阿拉伯糖基）－β－D－吡喃葡萄糖苷。

3.6 化合物6

黃色無(wú)定形粉末。HR－ESI－MS（m/z）：541.172 4［M+Na］+，推測(cè)分子量為518。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：2.24（2H，m，H－3），2.52（1H，dt，J=3.5，17.2 Hz，H－2a），3.03（1H，m，H－2b），3.22（2H，m，H－2′，4″），3.28（1H，m，H－3″），3.40（1H，t，J=9.0 Hz，H－4′），3.46（2H，t，J=9.0 Hz，H－5′，5″），3.54（1H，m，H－2″），3.62（1H，m，H－3′），3.66（1H，dd，J=5.8，12.0 Hz，H－6″a），3.82（1H，dd，J=6.3，11.8 Hz，H－6′a），3.86（1H，m，H－6″b），4.13（1H，m，H－6′b），4.37（1H，d，J=7.8 Hz，H－1″），4.82（1H，d，J=7.8 Hz，H－1′），5.34（1H，t，J=3.3 Hz，H－4），6.93（1H，d，J=8.8 Hz，H－7），7.60（1H，d，J=8.8 Hz，H－6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：206.1（C－1），33.5（C－2），30.3（C－3），61.5（C－4），148.8（C－5），128.6（C－6），119.1（C－7），159.3（C－8），116.4（C－9），134.8（C－10），104.3（C－1′），75.4（C－2′），77.9（C－3′），71.6（C－4′），78.0（C－5′），69.8（C－6′），104.7（C－1″），75.6（C－2″），78.2（C－3″），71.2（C－4″），78.3（C－5″），62.5（C－6″）。經(jīng)與文獻(xiàn)［12］對(duì)照基本一致，鑒定化合物6 為4（S）－4，5，8－三羥基－α－四氫萘酮－5－O－（6′－β－D－吡喃葡萄糖基）－β－D－吡喃葡萄糖苷。

3.7 化合物7

橙黃色針晶（MeOH）。HR－ESI－MS（m/z）：175［M+H］+，推測(cè)分子量為174。1H－NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.25（1H，m，H－6），7.58（1H，d，J=7.6 Hz，H－7），7.60（1H，d，J=7.6 Hz，H－8），7.03（2H，s，H－2，3）。13C－NMR（CDCl3，100 MHz）δ：189.9（C－1），138.8（C－2），139.4（C－3），184.8（C－4），160.9（C－5），124.5（C－6），137.0（C－7），118.8（C－8），114.9（C－9），132.0（C－10）。經(jīng)與文獻(xiàn)［13］對(duì)照基本一致，鑒定化合物7為胡桃醌。

3.8 化合物8

紅色片狀結(jié)晶（CH2Cl2）。HR－ESI－MS（m/z）：191［M+H］+，推測(cè)分子量為190。1H－NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.09（4H，s，H－2，3，6，7），12.50（1H，s，5，8－OH）。13C－NMR（CDCl3，100 MHz）δ：190.1（C－1），138.2（C－2），138.9（C－3），185.0（C－4），161.1（C－5），124.7（C－6），136.7（C－7），119.1（C－8），115.2（C－9），132.2（C－10）。經(jīng)與文獻(xiàn)［13］對(duì)照基本一致，鑒定化合物8為5，8－二羥基－1，4－萘醌。

3.9 化合物9

棕色粉末。HR－ESI－MS（m/z）：179［M+H］+，推測(cè)分子量為178。1H－NMR（CDCl3，400 MHz）δ：2.19（1H，m，H－3a），2.41（1H，m，H－3b），2.72（1H，ddd，J=17.8，8.8，5.0 Hz，H－2a），3.10（1H，ddd，J=17.8，8.8，5.0 Hz，H－2b），4.89（1H，dd，J=4.0，7.2 Hz，H－4），7.02（1H，dd，J=8.8，1.2 Hz，H－7），7.06（1H，m，H－5），7.53（1H，dd，J=8.8，1.2 Hz，H－6），12.42（1H，s，8－OH）。13C－NMR（CDCl3，100 MHz）δ：205.8（C－1），34.2（C－2），30.8（C－3），68.0（C－4），117.2（C－5），136.9（C－6），117.7（C－7），163.0（C－8），116.1（C－9），144.8（C－10）。經(jīng)與文獻(xiàn)［14］對(duì)照基本一致，鑒定化合物9為核桃酮。

3.10 化合物10

無(wú)色針狀結(jié)晶（MeOH）。HR－ESI－MS（m/z）：171［M +H］+，推測(cè)分子量為170。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.02（2H，s，H－2，H－6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：121.8（C－1），109.9（C－2，6），146.8（C－3，5），140.2（C－4），169.8（－COOH）。經(jīng)與文獻(xiàn)［15］對(duì)照基本一致，鑒定化合物10 為沒(méi)食子酸。

3.11 化合物11

無(wú)色針狀結(jié)晶（MeOH）。HR－ESI－MS（m/z）：167［M－H］－，推測(cè)分子量為168。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.88（3 H，s，－OCH3），6.88（1H，d，J=8.6 Hz，H－5），7.39（1H，d，J=2.0 Hz，H－2），7.45（1H，d，J=8.6 Hz，2.0 Hz，H－6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：123.0（C－1），112.9（C－2），147.1（C－3），149.0（C－4），113.5（C－5），124.8（C－6），57.2（－OCH3）。經(jīng)與文獻(xiàn)［15］對(duì)照基本一致，鑒定化合物11為香草酸。

3.12 化合物12

無(wú)色針狀結(jié)晶（MeOH）。HR－ESI－MS（m/z）：199［M +H］+，推測(cè)分子量為198。1H－NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.86（6H，s，3，5－OCH3），7.30（2H，s，H－2，6）。13C－NMR（CD3OD，100 MHz）δ：121.0（C－1），106.9（C－2，6），56.2（3，5－OCH3），139.8（C－4），148.1（C－3，5），167.9（－COOH）。經(jīng)與文獻(xiàn)［15］對(duì)照基本一致，鑒定化合物12為丁香酸。

4 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)對(duì)核桃楸皮進(jìn)行系統(tǒng)成分分離研究，從石油醚、二氯甲烷、正丁醇三個(gè)不同極性萃取部位中共分離得到12個(gè)化合物，分別是（4S）－4－羥基－α－四氫萘酮－4－O－β－D－（6′－O－4″－羥基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷（1）、（4S）－4，5－二羥基－α－四氫萘酮－4－O－β－D－（6′－O－4″－羥基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷（2）、（4S）－4，5，8－三羥基－α－四氫萘酮－5－O－β－D－（6′－O－4″－羥基苯甲酰）吡喃葡萄糖苷（3）、（4R）－4－羥基－5－甲氧基－α－四氫萘酮－4－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（4）、（4S）－4，5，8－三羥基－α－四氫萘酮－5－O－（6′－O－α－L－阿拉伯糖基）－β－D－吡喃葡萄糖苷（5）、4（S）－4，5，8－三羥基－α－四氫萘酮－5－O－（6′－β－D－吡喃葡萄糖基）－β－D－吡喃葡萄糖苷（6）、胡桃醌（7）、5，8－二羥基－1，4－萘醌（8）、核桃酮（9）、沒(méi)食子酸（10）、香草酸（11）和丁香酸（12）。其中化合物1～ 6 為首次從該藥用部位中分離得到。