基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究溫補(bǔ)固腎方治療糖尿病腎病的作用機(jī)制及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

禹靜，劉續(xù)春，李振華

（1.黃淮學(xué)院直屬附屬駐馬店市中心醫(yī)院，河南 駐馬店 463000；2.鄭州市中心醫(yī)院 河南 鄭州 450001）

糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病誘發(fā)的微血管并發(fā)癥之一。近年來糖尿病的發(fā)病率不斷升高，預(yù)計(jì)到2040 年全球糖尿病患者人數(shù)預(yù)計(jì)達(dá)6.42 億，其中30%～ 40%的糖尿病患者會(huì)發(fā)展成為DN［1］。DN 是終末期腎病最常見的原因，與心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)升高密切相關(guān)［2］。但是目前有關(guān)DN 的治療仍無完美的治療方案，只能通過飲食控制、降壓、降血糖，減少尿蛋白等手段進(jìn)行對(duì)癥治療，療效欠佳。隨著中醫(yī)藥防治DN 理論和臨床研究的不斷深入，其在治療DN 中的作用日顯突出。溫補(bǔ)固腎方（Wenbu Gushen Prescription，WBGSF）由黨參，山茱萸，芡實(shí)，枸杞子，覆盆子，菟絲子，淫羊藿及益智仁組成。全方以溫陽補(bǔ)腎固腎為治療根本大法，佐以收澀補(bǔ)氣之品［3］。既往研究發(fā)現(xiàn)，WBGSF 能夠改善慢性腎病伴腎小管間質(zhì)損害患者臨床癥狀［3］。溫補(bǔ)固腎方配方芡實(shí)能夠調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶－9/基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑－1間平衡，降解膠原蛋白Ⅳ，減輕腎小管間質(zhì)纖維化，降低尿蛋白，從而改善DN 腎功能［4］。但是目前有關(guān)WBGSF 對(duì)DN的影響及作用機(jī)制尚不清楚。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是通過研究中藥活性成分－潛在靶點(diǎn)－疾病治療之間復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)關(guān)系的新型方法，是初步探究中藥治療疾病的作用機(jī)制新思路［5］。本研究擬通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)挖掘出WBGSF 治療DN 的潛在靶點(diǎn)和作用通路，探討可能作用機(jī)制，同時(shí)采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)構(gòu)建DN 大鼠模型，觀察WBGSF 對(duì)DN 大鼠的治療效果并對(duì)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

SPF 級(jí)，雄性，SD 大鼠，6～ 8 周齡，體質(zhì)量180～200 g，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2018－0002）。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，期間正常飲食、飲水，晝夜12 h/12 h交替光照，溫度（25±2）℃，相對(duì)濕度45%～55%，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：20191002），并符合3R原則。

1.1.2 藥物與主要試劑

溫補(bǔ)固腎方免煎制劑組成：黨參，山茱萸，芡實(shí)，枸杞子，覆盆子，菟絲子，淫羊藿和益智仁均購自廣東一方制藥有限公司；鏈脲佐菌素（STZ）（Sigma－Aldrich，貨號(hào)：S0130）；蘇木素伊紅（hematoxylin－eosin，HE）染色試劑盒、Masson染色試劑盒、細(xì)胞裂解液、蛋白marker、BCA試劑盒、山羊抗兔二抗、山羊抗小鼠二抗、ECL 發(fā)光試劑盒、β－actin 一抗（上海碧云天生物技術(shù)公司，貨號(hào)：C0105M、T4131、P0013、P0075、P0012、A0408、A0412、P0018S、AF5001）；晚期糖基化終末產(chǎn)物試劑盒（advanced glycation end products，AGEs）（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)：H250－1－1）、晚期糖基化終末產(chǎn)物受體試劑盒（receptor for advanced glycation end products，RAGE）（美國Raybiotech公司，貨號(hào)：S100A12）；RAGE一抗（美國Cell Signaling Technology公司，貨號(hào)：55222）。

1.1.3 主要儀器

多功能酶標(biāo)儀（長(zhǎng)春樂鏷科技有限公司，型號(hào)：LP－5117）；熒光倒置顯微鏡（日本/奧林巴斯Olympus，型號(hào)：CKX53）；高速冷凍離心機(jī)（湖南可成儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)：H3－18KR）；凝膠成像系統(tǒng)（美國Bio－Rad伯樂公司，型號(hào)：Gel Doc XR+）。

1.2 方法

1.2.1 溫補(bǔ)固腎方活性成分及潛在靶點(diǎn)

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫以黨參、山茱萸、芡實(shí)、枸杞子、覆盆子、菟絲子、淫羊藿和益智仁為關(guān)鍵詞檢索其所有化學(xué)成分，按照口服生物利用度（oral bioavailability，OB）>30%和類藥性（drug likeness，DL）>0.18 進(jìn)行有效活性成分篩選，之后選擇Related Target項(xiàng)獲得相關(guān)化合物名稱和靶點(diǎn)基因。

1.2.2 糖尿病腎病相關(guān)靶點(diǎn)基因預(yù)測(cè)

以“diabetic nephropathy”為關(guān)鍵詞，于“GeneCard”“OMIM”“PharmGkb”“TTD”及“DrugBank”數(shù)據(jù)庫，預(yù)測(cè)糖尿病腎病相關(guān)靶點(diǎn)，合并5 個(gè)數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果，去除重復(fù)靶點(diǎn)，并通過UniProt數(shù)據(jù)庫將上述靶點(diǎn)名稱轉(zhuǎn)化為基因名稱。

1.2.3 溫補(bǔ)固腎方治療糖尿病腎病的潛在靶點(diǎn)基因預(yù)測(cè)

利用R 3.6.3 軟件分析溫補(bǔ)固腎方與糖尿病腎病共同靶點(diǎn)基因，并繪制韋恩圖。

1.2.4 溫補(bǔ)固腎方活性成分－潛在靶點(diǎn)－糖尿病腎病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將溫補(bǔ)固腎方治療糖尿病腎病共同靶點(diǎn)基因?qū)隨TRING 數(shù)據(jù)庫，設(shè)置條件限定物種為“Homo sapiens”，靶點(diǎn)基因之間相互作用分值≥0.9，之后刪除游離靶點(diǎn)基因，并獲得上述蛋白質(zhì)相互作用（PPI）信息，最后將靶點(diǎn)基因?qū)隒ytoscape 軟件進(jìn)行拓?fù)浞治鲆约癙PI網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建，并取得核心靶基因網(wǎng)絡(luò)圖。

1.2.5 關(guān)鍵靶蛋白GO富集分析和KEGG通路分析

在BioConductor 檢索相應(yīng)軟件包，并對(duì)篩選得到的核心靶基因進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析。

1.2.6 糖尿病腎病模型構(gòu)建與分組給藥

SD 大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為對(duì)照組（Control組）、模型組（DN 組）和溫補(bǔ)固腎方給藥低、中、高劑量組，每組各10只。DN組和溫補(bǔ)固腎方（WBGSF）組大鼠給予腹腔一次性注射鏈脲佐菌素（60 mg/kg），72 h尾靜脈采血測(cè)定大鼠血糖，血糖值≥16.7 mmol/L，且尿蛋白含量≥30 mg視為造模成功［6］。溫補(bǔ)固腎方低劑量組給藥量0.92 g/kg，組方：黨參0.1 g，山茱萸0.12 g，芡實(shí)0.2 g，枸杞子0.1 g，覆盆子0.1 g，菟絲子0.1 g，淫羊藿0.1 g，益智仁0.1 g。溫補(bǔ)固腎方中劑量組給藥劑量1.84 g/kg，制劑組成配比是低劑量組的2倍。溫補(bǔ)固腎方高劑量組給藥劑量3.68 g/kg，制劑組成配比是低劑量組的4 倍。每日1 劑（5 mL），連續(xù)灌胃給藥12 周，模型組和對(duì)照組大鼠給予等量生理鹽水灌胃。

1.2.7 大鼠相關(guān)生化指標(biāo)檢測(cè)

大鼠尾靜脈采血，血糖儀檢測(cè)血糖；代謝收集24 h尿液，3 000 r/min 離心，10 min 后取上清液，依據(jù)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組大鼠尿蛋白和尿素氮含量。

1.2.8 腎組織病理學(xué)觀察

大鼠頸椎脫臼處死，取腎組織放于福爾馬林－醋酸－酒精中固定、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、組織石蠟包埋、切片（3～5 μm），進(jìn)行HE 和Masson 染色并于400倍顯微鏡下觀察腎臟組織病理學(xué)變化。

1.2.9 腎組織AGEs和RAGE含量檢測(cè)

收集腎組織勻漿上清，依據(jù)ELISA 檢測(cè)試劑盒測(cè)定，計(jì)算AGEs和RAGE含量。

1.2.10 Western blot檢測(cè)腎組織RAGE表達(dá)

腎組織加入細(xì)胞裂解液后于冰上裂解40 min，期間每8 min，渦旋1次；4 ℃，12 000 r/min，離心10 min，吸取細(xì)胞上清液；BCA法測(cè)定各組腎組織蛋白質(zhì)濃度；上樣（按照每孔上樣量30 μg計(jì)算得出上樣體積）；凝膠電泳（80 V，30 min后120 V，60 min）；濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜90 min；5%脫脂牛奶室溫封閉2 h；分別加RAGE一抗及β－actin抗體（1∶2 000），4 ℃孵育過夜；加對(duì)應(yīng)的山羊抗兔二抗或者山羊抗鼠二抗（1∶5 000），室溫孵育1～2 h；加吐溫20磷酸鹽緩沖溶液洗滌3次，每次5 min，加入顯影液，顯影并拍照。以目的蛋白條帶灰度值與β－actin 條帶灰度值的比值反映RAGE蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

SPSS20.0 用于數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用F檢驗(yàn)，組間比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 WBGSF方活性成分篩選及靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

通過檢索TCMSP 數(shù)據(jù)庫，檢索黨參、山茱萸、芡實(shí)、枸杞子、覆盆子、菟絲子、淫羊藿和益智仁符合OB和DL 參數(shù)條件標(biāo)準(zhǔn)的非重復(fù)活性成分81 個(gè)，主要有異鼠李素、山柰酚、木犀草素、槲皮素、菠菜甾醇和大豆黃素等。利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫靶點(diǎn)預(yù)測(cè)技術(shù)，對(duì)上述活性成分進(jìn)行作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，排除重復(fù)靶點(diǎn)后共獲得潛在作用靶點(diǎn)260個(gè)。

2.2 糖尿病腎病疾病靶點(diǎn)

以“diabetic nephropathy”為關(guān)鍵詞，于“GeneCard”“OMIM”“PharmGkb”“TTD”及“DrugBank”數(shù)據(jù)庫，預(yù)測(cè)糖尿病腎病相關(guān)靶點(diǎn)，結(jié)果分別獲得疾病相關(guān)靶點(diǎn)3 422、183、100、22 和40 個(gè)，剔除重復(fù)靶點(diǎn)后，共獲得糖尿病腎病相關(guān)靶點(diǎn)3 573個(gè)。見圖1。

圖1 糖尿病腎病相關(guān)靶點(diǎn)篩選韋恩圖

2.3 化合物靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)

將3 573 個(gè)疾病靶點(diǎn)和81 個(gè)化合物的260 個(gè)作用靶點(diǎn)取交集，獲得共同作用靶點(diǎn)148個(gè)。進(jìn)一步建立中藥化合物－靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)圖，將共有靶點(diǎn)信息輸入STRING 數(shù)據(jù)庫，將輸出結(jié)果tsv 文件導(dǎo)入Cytoscape 3.7.0 軟件，構(gòu)建靶蛋白PPI 網(wǎng)絡(luò)，并進(jìn)一步行拓?fù)浞治?。通過計(jì)算Betweenness、Closeness Degree、Eigenvector、LAC和Network 值，并以每個(gè)基因上述指標(biāo)大于中位值為篩選條件，最終獲得核心作用靶點(diǎn)21 個(gè)，主要包括MAPK14、AKT1、CASP3、EGFR、凋亡相關(guān)基因以及炎癥相關(guān)基因等。見圖2和圖3。

圖2 溫補(bǔ)固腎方－潛在靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖3 溫補(bǔ)固腎方－潛在靶點(diǎn)－糖尿病腎病共同作用靶點(diǎn)拓?fù)浞治?/p>

2.4 GO和KEGG富集分析

利用R軟件及相關(guān)程序包對(duì)WBGSF治療糖尿病腎病的148個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO和KEGG富集分析。將GO富集過程中的分子生物學(xué)過程、分子功能及細(xì)胞成分和KEGG 通路按照P值升序排列，取前10 位做氣泡分析，若未滿10個(gè)，則全部納入分析。其中GO功能富集分析顯示W(wǎng)BGSF 治療DN 的生物學(xué)過程主要包括cellular response to chemical stress，response to oxidative stress 及response to metalion 等；分子功能包括RNA polymeraseⅡ－specific DNA－binding transcription factor binding、DNA－binding transcription factor binding 和 nuclear receptor activity 等；而細(xì)胞成分主要包括membrane raft、membrane microdomain 和membrane region 等。KEGG 通路富集分析顯示W(wǎng)BGSF治療DN的主要信號(hào)通路包括Lipid and atherosclerosis、AGE－RAGE signaling pathway in diabetic complication等。見圖4和圖5。

圖4 WBGSF治療糖尿病腎病GO功能富集分析

圖5 WBGSF治療糖尿病腎病的KEGG通路富集分析

2.5 各組大鼠生化指標(biāo)的比較

與Control組相比，DN 組大鼠血糖、尿素氮、肌酐以及24 h尿蛋白含量明顯升高（P<0.01）。與DN組大鼠相比，WBGSF各劑量組大鼠血糖、尿素氮、肌酐以及24 h尿蛋白含量明顯降低（P<0.05或P<0.01）。見表1。

表1 各組大鼠血糖、尿素氮、肌酐、24 h尿蛋白含量比較（xˉ±s，n=6）

2.6 各組大鼠腎組織病理變化的比較

Control 組大鼠腎組織腎小球結(jié)構(gòu)完整、清晰，腎小管上皮細(xì)胞排列整齊。DN 組大鼠腎組織腎小球肥大，系膜增生，系膜外基質(zhì)增多，腎間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)沉積明顯，腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性。溫補(bǔ)固腎方給藥組大鼠腎組織腎小球損傷和基底膜增厚現(xiàn)象減輕、腎小管上皮細(xì)胞空泡變性明顯減少，膠原沉積減少，腎組織結(jié)構(gòu)損傷有不同程度緩解。見圖6。

圖6 溫補(bǔ)固腎方對(duì)DN大鼠腎組織病理變化的影響（400×）

2.7 各組大鼠腎組織AGEs和RAGE含量的比較

與Control組相比，DN 組大鼠腎組織AGEs 和RAGE 含量顯著升高（P<0.01）。與DN 組相比，WBGSF 各劑量組大鼠腎組織AGEs 和RAGE 含量顯著降低（P<0.05或P<0.01）。見圖7。

圖7 各組大鼠腎組織AGEs和RAGE水平比較

2.8 各組大鼠腎組織AGE－RAGE 信號(hào)通路蛋白表達(dá)的比較

與Control組相比，DN組大鼠腎組織RAGE蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01）。與DN組相比，WBGSF各劑量組大鼠腎組織RAGE蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01）。見圖8。

圖8 各組大鼠腎組織AGE－RAGE信號(hào)通路蛋白表達(dá)情況比較

3 討論

中醫(yī)學(xué)稱糖尿病為消渴病，伴隨糖尿病病情發(fā)展會(huì)誘發(fā)DN，DN可歸于“水腫、關(guān)格、腎濁”范疇，主要表現(xiàn)為腎虛陰陽失衡、水液潴留等［7］，陽氣虛衰為其主要征象，尤其以腎陽虛為主，另伴有瘀血內(nèi)阻之象［8］。因此，DN治療多以溫陽、補(bǔ)腎、固腎治療為主。溫補(bǔ)固腎方中黨參具有補(bǔ)氣健脾、扶正氣之功效。山茱萸具有補(bǔ)益肝腎、收澀固脫之效。芡實(shí)可益腎固精，補(bǔ)脾止瀉。菟絲子具有清熱解毒、健脾利濕之效。覆盆子益腎固精、平補(bǔ)肝腎。淫羊藿具有溫腎、壯陽之效。益智仁具有溫化腎氣、溫補(bǔ)腎陽的作用。諸藥合用能夠發(fā)揮溫陽，補(bǔ)腎功效。但是目前有關(guān)WBGSF 對(duì)DN 的治療效果及其可能作用機(jī)制尚不清楚。為此，本研究首先通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析WBGSF 有效活性成分調(diào)控潛在靶點(diǎn)基因，通過何種信號(hào)通路，從而發(fā)揮治療DN。

TCMSP 數(shù)據(jù)庫篩選WBGSF 有效活性成分81 個(gè)，主要包括異鼠李素、山柰酚、木犀草素、槲皮素、菠菜甾醇和大豆黃素等。涉及潛在靶點(diǎn)基因260 個(gè)。以“GeneCard”“OMIM”“PharmGkb”“TTD”及“DrugBank”數(shù)據(jù)庫，預(yù)測(cè)DN 相關(guān)靶點(diǎn)，共獲得DN 相關(guān)靶點(diǎn)3 573 個(gè)。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建“WBGSF－關(guān)鍵靶點(diǎn)－疾病”網(wǎng)絡(luò)，明確WBGSF 治療DN 的化合物與潛在靶點(diǎn)基因之間的關(guān)系。篩選結(jié)果顯示，WBGSF 有效活性化合物能夠通過調(diào)控AKT、MAPK、細(xì)胞凋亡以及炎癥性細(xì)胞因子等基因發(fā)揮DN 治療作用。既往研究發(fā)現(xiàn)，抑制Akt蛋白表達(dá)，能夠降低高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化，減少膠原沉積，從而改善DN［9］。MAPK 是與DN 腎組織炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，在DN 腎組織中p－MAPK 表達(dá)明顯升高，抑制p－MAPK 能夠降低炎癥因子TNF－α、IL－1β 表達(dá)［10］。炎癥反應(yīng)包括促炎因子TNF－α、IL－1β、COX－2 等合成與釋放增加，會(huì)導(dǎo)致DN 腎纖維化，加重腎組織結(jié)構(gòu)損傷［11］。WBGSF 中的活性成分木犀草素能夠通過抗氧化作用以及降低腎組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子－β1 和纖溶酶原激活物抑制物－1 表達(dá)發(fā)揮DN 大鼠腎臟保護(hù)作用［12］。槲皮素能夠通過調(diào)控p38MAPK/NF－κB 信號(hào)，減輕DN腎組織炎癥［13］。山柰酚能夠通過調(diào)控p38MAPK 通路，改善高糖誘導(dǎo)大鼠腎系膜細(xì)胞損傷［14］。本研究初步揭示W(wǎng)BGSF 有效活性化合物可能通過作用上述靶點(diǎn)基因，從而發(fā)揮DN 腎臟保護(hù)作用，表明WBGSF 治療DN 具有多成分－多靶點(diǎn)的特點(diǎn)。GO 功能富集和KEGG 通路富集分析發(fā)現(xiàn)，WBGSF 能夠通過調(diào)控脂質(zhì)－動(dòng)脈粥樣硬化信號(hào)通路、AGE－RAGE 信號(hào)通路以及流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化通路等發(fā)揮治療DN 的作用。研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素等有效活性成分能夠通過調(diào)控AGE－RAGE 信號(hào)通路，降低AGE 和RAGE水平，抑制系膜細(xì)胞增殖和降低尿蛋白水平，從而改善DN 腎損傷［15］。脂質(zhì)－動(dòng)脈粥樣硬化信號(hào)通路與DN 損害密切相關(guān)。山柰酚具有廣泛的藥理學(xué)活性能夠調(diào)節(jié)血脂，降低動(dòng)脈粥樣硬化［16］。以上研究表明WBGSF 能夠通過多組分－多靶點(diǎn)－多通路發(fā)揮DN保護(hù)作用。

為證實(shí)WBGSF 能夠治療DN，改善DN 腎損傷。本研究首先通過構(gòu)建DN 大鼠模型，觀察WBGSF 對(duì)DN 的治療作用。結(jié)果顯示與DN 組相比，WBGSF 各劑量組大鼠血糖、尿素氮、肌酐以及24 h 尿蛋白含量明顯降低。進(jìn)一步通過HE 和Masson 染色觀察腎組織形態(tài)學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)與DN 組相比，WBGSF 各劑量組腎組織腎小球損傷和基底膜增厚現(xiàn)象減輕、腎小管上皮細(xì)胞空泡變性明顯減少，腎組織結(jié)構(gòu)損傷有不同程度緩解。以上研究結(jié)果表明WBGSF 具有有效治療DN作用。

前期網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選結(jié)果顯示在WBGSF 治療DN 眾多通路中AGE－RAGE 信號(hào)通路與DN 的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。AGEs 是高糖環(huán)境下的代謝產(chǎn)物，被稱為“糖毒素”，是引起糖尿病微血管病變的重要始動(dòng)環(huán)節(jié)［17］。RAGE 是介導(dǎo)AGEs 對(duì)心血管系統(tǒng)損傷的主要受體，與AGEs 結(jié)合后能夠激活下游多種信號(hào)通路，包括p38MAPK、NF－κB、PI3K 信號(hào)等，共同參與DN氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞凋亡［18］。因此，通過抑制AGEs－RAGE 信號(hào)通路激活，是預(yù)防DN 疾病進(jìn)展的有效策略。本研究發(fā)現(xiàn)與DN 組相比，WBGSF 各劑量組大鼠腎組織AGEs 和RAGE 含量降低，RAGE 蛋白表達(dá)明顯降低，表明WBGSF 能夠通過抑制AGERAGE 信號(hào)通路，改善DN 腎損傷。

綜上所述，本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探究WBGSF 對(duì)DN 的治療作用。結(jié)果顯示W(wǎng)BGSF 可以通過“多組分－多靶點(diǎn)－多通路”發(fā)揮DN 腎損傷保護(hù)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)WBGSF 能夠降低大鼠血糖、尿素氮、肌酐以及24 h 尿蛋白含量，改善DN 腎損傷，其機(jī)制與抑制AGE－RAGE信號(hào)通路相關(guān)。