基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探索消銀顆粒治療銀屑病的分子機(jī)制

魯有望，董榮靜，石 年，陳用軍

（1.湖北理工學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 黃石 435001；2.鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院/湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚科，湖北 黃石 435000）

銀屑?。ㄋ追Q牛皮癬）是一種常見(jiàn)的慢性炎癥性皮膚病，以鱗屑性紅斑伴瘙癢為主要特征。銀屑病是一種多基因、遺傳、免疫、環(huán)境等因素共同介導(dǎo)的免疫炎癥性皮膚病，目前被認(rèn)為是一種多系統(tǒng)代謝性疾病，常合并高血壓、2型糖尿病、冠心病等。銀屑病的全球平均發(fā)病率約為2%～4%，成人銀屑病的發(fā)病率在中國(guó)臺(tái)灣省約為30.3/10萬(wàn)人年，意大利約為321.0 / 10萬(wàn)人年，東亞約為0.14%，大洋洲約為1.99%，近年來(lái)銀屑病的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)［1］。目前國(guó)際指南推薦的治療方法主要包括局部治療、光療、常規(guī)全身治療、免疫抑制劑和生物療法等［2］。由于傳統(tǒng)藥物系統(tǒng)療法副作用明顯，而生物制劑費(fèi)用高昂，長(zhǎng)期用藥會(huì)導(dǎo)致患者依從性變差且經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)過(guò)重［3，4］。因此，使用具有較好臨床療效的中藥復(fù)方制劑作為治療銀屑病的替代或補(bǔ)充藥物成為可能［5］。

目前已知可用于治療銀屑病的中藥材有數(shù)百種，已批準(zhǔn)用于臨床的處方藥（消銀顆粒、克銀丸、消銀丸）及中藥湯劑（涼血消斑湯、清熱涼血方、四物湯）聯(lián)合其他西藥施治對(duì)尋常型銀屑病具有顯著療效［6～8］。根據(jù)中醫(yī)理論，銀屑病也稱“白疙”或“松皮癬”，主要分為“血熱證、血瘀證、血燥證、血毒證、血虛證”，是中醫(yī)中藥辨證論治的基本證型［9］。但是，中藥的具體治療機(jī)理和具體藥效靶點(diǎn)等仍不清楚。目前，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)可更進(jìn)一步明確中藥中的核心成分及可能的作用靶點(diǎn)，使開(kāi)發(fā)療效佳且靶點(diǎn)明確的中藥活性成分成為可能。

消銀顆粒由地黃、牡丹皮、赤芍、當(dāng)歸、苦參、金銀花、玄參、牛蒡子、蟬蛻、白鮮皮、大青葉、紅花、防風(fēng)等13味藥材制成，具有清熱涼血、養(yǎng)血潤(rùn)燥、祛風(fēng)止癢等功能，用于血熱風(fēng)燥型和血虛風(fēng)燥型白疵［10］。但是，對(duì)消銀顆粒治療銀屑病的有效成分與治療機(jī)制尚缺乏研究。因此，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合生物信息學(xué)技術(shù)，構(gòu)建“成分—靶點(diǎn)—通路—疾病”多維網(wǎng)絡(luò)，探索消銀顆粒治療銀屑病的潛在分子機(jī)制，為中藥復(fù)方的臨床應(yīng)用，以及銀屑病相關(guān)疾病的基礎(chǔ)與臨床研究提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 消銀顆?；钚猿煞趾Y選及作用靶點(diǎn)的獲取 通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)（Traditional chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP）［11］，數(shù)據(jù)庫(kù)檢索消銀顆粒的13種成分：地黃、牡丹皮、赤芍、當(dāng)歸、苦參、金銀花、玄參、牛蒡子、蟬蛻、白鮮皮、大青葉、紅花、防風(fēng)包含的活性成分。其中，對(duì)于成分的篩選條件設(shè)置為：生物利用度（Bioavailability，OB）≥30%、藥物相似性（Drug-like properties，DL）≥ 0.18，再利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//tcmspw.com/index.php）校正靶點(diǎn)蛋白為規(guī)范的基因名稱，刪除無(wú)靶點(diǎn)成分，整理得消銀顆粒的有效成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)信息。

1.2 消銀顆?；钚猿煞帧悬c(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 通過(guò)藥物靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)（Therapeutic target database TTD）、Drugbank、Disgenet、Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)獲取銀屑病相關(guān)的治療靶點(diǎn)，并取交集。

1.3 銀屑病差異基因表達(dá)分析 從基因表達(dá)（Gene expression omnibus，GEO）數(shù)據(jù)庫(kù)中下載銀屑病皮損及皮損旁組織轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)集（GSE13355），采用limma包比較銀屑病皮損與正常組皮膚的基因表達(dá)水平差異性（銀屑病組比正常組）。兩組按照adj.P.Value＜ 0.05 & log FC ＞ 1篩選。

1.4 消銀顆粒治療銀屑病的關(guān)鍵靶點(diǎn)基因GO功能與KEGG通路富集分析 成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)進(jìn)行映射，以獲得中藥復(fù)方治療銀屑病的潛在靶點(diǎn)。為說(shuō)明中藥復(fù)方治療銀屑病的潛在靶點(diǎn)在基因功能和信號(hào)通路中的作用，本項(xiàng)目使用R軟件Cluster Profiler包進(jìn)行基于基因本體（Gene ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）的富集分析，尋找差異表達(dá)基因集合內(nèi)大量基因共同的功能及相關(guān)通路。通過(guò)基因的富集分析預(yù)測(cè)中藥復(fù)方治療銀屑病的可能分子機(jī)制。

1.5 PPI 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 為了更好地分析靶點(diǎn)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（Protein-protein interaction，PPI），借助STRING Version 11.0數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/）構(gòu)建潛在靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)，限定物種為人（Homo sapiens），去除孤立靶點(diǎn)。再將PPI網(wǎng)絡(luò)圖導(dǎo)入Cytoscape3.6.1軟件進(jìn)行拓?fù)鋵傩苑治觯治鼍W(wǎng)絡(luò)圖中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)及度值，得到核心靶點(diǎn)。

1.6 消銀顆粒核心成分與關(guān)鍵靶基因的分子對(duì)接驗(yàn)證 采用Autodock Vina軟件（0.8）對(duì)核心靶點(diǎn)中度值最大靶點(diǎn)蛋白與中藥復(fù)方中的關(guān)鍵成分進(jìn)行分子對(duì)接分析。通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）獲取中藥小分子配體的三維結(jié)構(gòu)。從RCSB PDB結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)（www.rcsb.org/）中獲得靶點(diǎn)蛋白的三維結(jié)構(gòu)，用Pymol軟件去除受體蛋白中的溶劑。應(yīng)用Autodock Vina軟件在Windows環(huán)境下批量對(duì)接，得到結(jié)合能，用Discovery Studio 2016軟件對(duì)對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化分析。首先，從PDB得到關(guān)鍵靶點(diǎn)的蛋白結(jié)構(gòu)，包括FOS（2wt7）、IL-1B（5r87）、MMP-9（6esm）及CCL-2（1dom）的3D結(jié)構(gòu)，并去除其原本所帶有的小分子及水分子，通過(guò)PyMol完成蛋白質(zhì)加氫。從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中得到了聯(lián)系緊密的活性成分結(jié)構(gòu)，并且同樣使用autoDock對(duì)小分子進(jìn)行電荷平衡、可旋轉(zhuǎn)的鍵檢查。之后，通過(guò)選擇蛋白質(zhì)的盒子范圍，計(jì)算合適的位點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 消銀顆粒主要活性成分 消銀顆粒主要活性成分有198種，這里僅列舉排名前20的活性成分（見(jiàn)表2-1），主要包括槲皮素、木犀草素、山柰酚、漢黃芩素等。

表2-1 消銀顆粒主要活性成分表

續(xù)表2-1

2.2 消銀顆?；钚猿煞帧悬c(diǎn)對(duì)應(yīng)關(guān)系 在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)查詢消銀顆?；钚猿煞謱?duì)應(yīng)靶點(diǎn)。消銀顆粒中篩選出198種活性成分，在刪除重復(fù)后，此198種活性成分對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)蛋白共254個(gè)。采用軟件Cytoscape 3.6.1分析活性成分-靶點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系（見(jiàn)圖2-1）。

圖2-1 消銀顆粒活性成分-靶點(diǎn)圖（紅色代表消銀顆粒的13種成分，綠色代表198種活性成分，紫色代表活性成分對(duì)應(yīng)的254個(gè)靶點(diǎn)蛋白）

2.3 銀屑病皮損與正常皮膚差異基因表達(dá)

2.3.1 銀屑病差異表達(dá)基因篩選 我們?cè)贕EO數(shù)據(jù)庫(kù)篩選銀屑病相關(guān)數(shù)據(jù)集，比較數(shù)據(jù)集GSE13355銀屑皮損和正常組皮膚表達(dá)譜差異，采用limma包分析正常組和銀屑病組差異基因。取adj.P.Value＜ 0.05 & log FC ＞ 1作為篩選標(biāo)準(zhǔn)。得到差異表達(dá)基因635個(gè)，其中上調(diào)基因487個(gè)，下調(diào)基因148個(gè)（見(jiàn)圖2-2）。2.3.2 消銀顆粒治療銀屑病的關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選 我們通過(guò)TTD、Drugbank、Disgenet、Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)獲取銀屑病相關(guān)的治療靶點(diǎn)共4408個(gè)（見(jiàn)圖2-3A）。進(jìn)一步將獲取到的銀屑病差異表達(dá)基因與銀屑病相關(guān)治療靶點(diǎn)基因，消銀顆粒靶點(diǎn)基因取交集，共有24個(gè)基因交集，這些交集基因可能與消銀顆粒治療靶點(diǎn)相關(guān)（見(jiàn)圖2-3B）。

圖2-2 銀屑病差異基因火山圖

圖2-3 藥物靶點(diǎn)、銀屑病治療靶點(diǎn)、銀屑病差異基因交集

2.4 交集基因的 GO 功能與 KEGG通路富集分析 我們對(duì)24個(gè)交集基因進(jìn)行信號(hào)通路富集分析，用條形圖來(lái)展示 GO 富集分析 BP 、CC 、MF目錄下排名前10富集結(jié)果。可以看到排名前10的GO條目主要富集到趨化因子受體結(jié)合、細(xì)胞因子受體結(jié)合、對(duì)脂多糖和活性氧的反應(yīng)等（圖2-4A）。KEGG富集分析表明，這些基因與IL-17信號(hào)通路、TNF-信號(hào)通路等相關(guān)，推測(cè)消銀顆粒主要核心成分槲皮素可能作用于IL-17信號(hào)通路、TNF-信號(hào)通路抑制IL-17和TNF-7分泌發(fā)揮抗炎作用，從而改善銀屑病癥狀。我們用氣泡圖來(lái)展示KEGG富集結(jié)果（見(jiàn)圖2-4B）。

圖2-4 A. GO富集條形圖（縱坐標(biāo)表示Pathway條目，橫坐標(biāo)表示p值）；B. KEGG富集氣泡圖（縱坐標(biāo)表示富集的KEGG Term，橫坐標(biāo)p值）

2.5 消銀顆粒治療銀屑病的關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白相互調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 我們得到了24個(gè)中藥復(fù)方治療銀屑病的潛在靶點(diǎn)基因。其中，靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中聯(lián)結(jié)度最高的蛋白為FOS（2wt7）、IL-1B（5r87）、MMP-9（6esm）及CCL-2（1dom）。（見(jiàn)圖2-5）。

圖2-5 中藥復(fù)方治療銀屑病潛在靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)（顏色深淺代表關(guān)聯(lián)程度）

2.6 消銀顆粒核心成分槲皮素作用于FOS、IL-1B、MMP-9及CCL-2蛋白的分子對(duì)接驗(yàn)證結(jié)果 我們針對(duì)FOS、IL-1B、MMP-9及CCL-2蛋白及其配體槲皮素進(jìn)行分子對(duì)接。然后，使用Genetic算法得到計(jì)算的結(jié)果，最后利用PyMol軟件進(jìn)行可視化以及美化（見(jiàn)圖2-6）。

圖2-6 消銀顆粒核心成分槲皮素作用于FOS、IL-1B、MMP-9及CCL-2蛋白的分子對(duì)接驗(yàn)證

3 討論

消銀顆粒成分復(fù)雜，主要具有清熱涼血、養(yǎng)血、祛風(fēng)止癢、潤(rùn)燥等功能，臨床上廣泛應(yīng)用于治療輕-中度銀屑病，聯(lián)合其他制劑治療重度銀屑病亦有顯著療效。研究發(fā)現(xiàn)消銀顆粒聯(lián)合阿維A膠囊可有效改善中-重度銀屑病患者的臨床癥狀，并抑制機(jī)體炎性因子水平（IL-17、IL-22、TNF-α、VEGF等），降低復(fù)發(fā)率等作用［6，12，13］。消銀顆粒聯(lián)合卡泊三醇軟膏對(duì)改善銀屑病患者鱗屑、瘙癢癥狀更顯著［14］。但是，目前消銀顆粒具體活性成分以及確切治療靶點(diǎn)尚不清楚。

我們通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出中藥復(fù)方消銀顆粒的活性成分，并通過(guò)TCMSP和UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出活性成分的靶點(diǎn)。同時(shí)通過(guò)查找BATMANTCM、ETCM中草藥有效成分可能靶向的基因靶標(biāo)。通過(guò)TTD、Drugbank、Disgenet、Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)獲取銀屑病相關(guān)的治療靶點(diǎn)。比較正常皮膚和銀屑病患者皮損組織表達(dá)譜得到差異表達(dá)基因。然后篩選疾病靶點(diǎn)、差異基因求交集找到關(guān)鍵靶點(diǎn)，并對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行功能富集分析。對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)互作，PPI蛋白互作分析表明FOS、IL-1B、MMP-9及CCL-2處于蛋白互作的中心，與其他蛋白具有更多的聯(lián)系。最后使用AUTODOCK進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果表明，F(xiàn)OS、IL-1B、MMP-9及CCL-2與槲皮素具有較高的結(jié)合親和力。

我們進(jìn)一步對(duì)銀屑病差異表達(dá)基因、消銀顆粒關(guān)鍵靶點(diǎn)基因及銀屑病治療靶點(diǎn)基因三者取交集，共有24個(gè)基因存在交集，這些基因主要富集在經(jīng)典IL-17信號(hào)通路和TNF-α信號(hào)通路上，推測(cè)消銀顆粒的核心成分可能主要作用于此通路上。銀屑病組織病理學(xué)的典型特征即表皮或真皮內(nèi)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)（淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞），角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增生，表皮角化過(guò)度、角化不全和棘層增厚等。銀屑病發(fā)病或病情惡化時(shí)，活化的樹(shù)突狀細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α和IL-23等炎癥介質(zhì)。TNF-α是一種促炎癥細(xì)胞因子，可通過(guò)多種不同的途徑增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。TNF-α由多種細(xì)胞類型產(chǎn)生，包括巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，并在幾種不同的細(xì)胞類型上發(fā)揮其活性。TNF-α還可進(jìn)一步誘導(dǎo)其他炎性介質(zhì)和粘附分子產(chǎn)生，所有這些均與銀屑病病理機(jī)制相關(guān)［15］。TNF-α不僅能調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞的抗原遞呈功能，還能促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)，通過(guò)磷酸化NF-κB通路在銀屑病中起促進(jìn)炎癥作用［16］。TNF-α還可調(diào)節(jié)IL-23/Th17軸在銀屑病中促進(jìn)炎癥反應(yīng)，阻斷TNF-α可減輕銀屑病的炎性反應(yīng)，改善銀屑病皮損［20～21］。因此，TNF-α阻斷劑如依那西普，英夫利昔單抗，阿達(dá)木單抗等生物制劑的臨床成功并不令人驚訝。阻斷TNF-α信號(hào)通路的靶向生物制劑在銀屑病治療中具有顯著療效，但價(jià)格高昂仍然限制了其廣泛應(yīng)用。消銀顆粒的活性成分槲皮素可能作用于TNF-α信號(hào)通路抑制炎性因子分泌而具有一定療效。

最近研究認(rèn)為IL-23/IL-17軸可能是銀屑病發(fā)病機(jī)制的基礎(chǔ)。銀屑病患者中Th17細(xì)胞及IL-17水平顯著高于健康人群，由Th17細(xì)胞分泌的IL-23和IL-17在促進(jìn)銀屑病炎癥反應(yīng)中起重要作用。IL-17可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，引起銀屑病皮損炎癥和斑塊形成。IL-17、IL-22和TNF-α可以刺激角質(zhì)形成細(xì)胞、黑素細(xì)胞、成纖維細(xì)胞以及DCs產(chǎn)生TNF-α、IL-1β和IL-6［17］。IL-17還可促進(jìn)細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）和趨化因子（CCL20、CXCL1、CXCL3、CXCL5、CXCL6、CXCL8等）分泌并可進(jìn)一步招募DCs、記憶性T細(xì)胞和中性粒細(xì)胞到達(dá)損傷部位促進(jìn)炎癥反應(yīng)［18］。其中，CXCL1和CXCL8還可募集并增強(qiáng)皮膚中的中性粒細(xì)胞活性，故Th-17通路在銀屑病發(fā)病機(jī)制中是必不可少的。局部咪喹莫特可誘導(dǎo)小鼠銀屑病樣皮損，主要通過(guò)IL-23/Th-17軸介導(dǎo)［19］。使用抗IL-23抗體阻斷IL-23/IL-17軸可抑制銀屑病的病情進(jìn)展［20］。IL-17信號(hào)通路和Th-17細(xì)胞通路功能失調(diào)促進(jìn)了銀屑病的慢性炎癥，逆轉(zhuǎn)該通路是目前銀屑病臨床試驗(yàn)的重點(diǎn)。目前針對(duì)阻斷IL-17的生物制劑如蘇金單抗、Ixekizumab和Brodalumab在臨床具有顯著療效。通過(guò)KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)消銀顆粒主要活性成分可能針對(duì)IL-17信號(hào)通路具有抑制作用，從而協(xié)同治療銀屑病。

目前，生物制劑成本依舊是大多數(shù)患者考慮因素，長(zhǎng)期規(guī)律使用較為困難。消銀顆粒中核心成分主要作用于IL-17信號(hào)通路和TNF-α信號(hào)通路上，從而發(fā)揮抗炎、減少炎性因子分泌等治療作用。其核心成分中的槲皮素及其作用配體或可成為新的成分制劑應(yīng)用于銀屑病治療。槲皮素生物活性多樣，具有抗炎、抗菌、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用，是一種黃酮小分子化合物［21］。目前槲皮素在腫瘤、炎癥及動(dòng)脈粥樣硬化中的作用相繼報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素可減輕喉炎小鼠局部組織炎癥，主要通過(guò)平衡Th-17 /Treg以及降低Th-17細(xì)胞分化［22］。槲皮素可抑制人乳腺癌細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡［23］。研究還發(fā)現(xiàn)，槲皮素在結(jié)直腸癌中具有潛在化學(xué)預(yù)防作用［24］。槲皮素通過(guò)刺激人HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞ROS依賴的p53蛋白泛素化而增強(qiáng)砷誘導(dǎo)的凋亡［25］。槲皮素還可通過(guò)NF-κB通路改善咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮損炎癥反應(yīng)［26］。

我們得到的前24個(gè)中藥復(fù)方治療銀屑病潛在靶點(diǎn)，分 別 是FOS、IL-1B、MMP-9、CCL-2、CCL-8、CXCL-10等，推測(cè)可能其是消銀顆粒核心成分在銀屑病中的主要治療靶點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)IL-1B在銀屑病皮損和咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠皮損中顯著升高。此外，IL-1R信號(hào)通路與銀屑病的病情進(jìn)展和治療反應(yīng)相關(guān)，IL-1B-IL-1R信號(hào)通路可能通過(guò)直接調(diào)控真皮IL -17產(chǎn)生和刺激角質(zhì)形成細(xì)胞放大炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，參與皮膚炎癥和銀屑病的發(fā)?。?7］。研究發(fā)現(xiàn)，與健康皮膚相比，CCL2在銀屑病皮損中顯著增高，且CCL2介導(dǎo)的pDC招募到咪喹莫特誘導(dǎo)的炎癥皮損依賴于DC中的c-Jun［28］。在銀屑病患者中，角質(zhì)形成細(xì)胞是單核細(xì)胞趨化蛋白1（MCP-1/CCL2）的主要來(lái)源，CCL2在銀屑病皮損的角質(zhì)形成細(xì)胞中高表達(dá)，CCL2與主要在單核細(xì)胞表面表達(dá)的趨化因子受體CCR2結(jié)合后，單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞，并從血流中遷移到炎癥部位從而導(dǎo)致銀屑病的發(fā)生，因此推測(cè)CCL2可能是監(jiān)測(cè)銀屑病進(jìn)展的潛在生物標(biāo)志物［29］。

基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）參與了細(xì)胞外基質(zhì)組成的修飾，促進(jìn)血管生成和白細(xì)胞滲入真皮。皮損中MMP-9表達(dá)與銀屑病疾病活動(dòng)度相關(guān)［30］。此外，MMP-9與炎癥細(xì)胞的激活相關(guān)，其循環(huán)水平與銀屑病的嚴(yán)重程度相一致［31］。MMP-9的誘導(dǎo)可能是銀屑病發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制之一，在銀屑病患者血清中，MMP-9的含量升高［32］，且其分泌可能受TNF-α調(diào)控，在英夫利昔單抗單藥治療三周后，MMP-2、MMP-9、TNF-α和e -選擇素的水平降低，并伴隨臨床癥狀顯著改善，因此MMP-9水平與PASI之間具有顯著的相關(guān)性［31，33］。此外，中性粒細(xì)胞來(lái)源的MMP-9通過(guò)激活皮膚血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)血管舒張和增加通透性，從而促進(jìn)銀屑病病變的發(fā)展［34］。消銀顆粒可能通過(guò)抑制MMP-9而改善銀屑病癥狀。

FOS樣抗原1（fra1）是一種原癌基因，它是轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白1（AP-1）活性的負(fù)抑制物，具有轉(zhuǎn)化活性，在銀屑病皮損中，fra1蛋白表達(dá)量較高。fra1可通過(guò)抑制細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)HaCaT細(xì)胞體外生長(zhǎng)，提示fra1可能在銀屑病中起重要作用［35］。AP-1（Jun/Fos）由Jun、Fos和活化轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族組成的二聚體，是許多細(xì)胞功能的中央調(diào)節(jié)器。Fos和Jun蛋白在發(fā)育和調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞轉(zhuǎn)化的原型癌基因［36］。Jun蛋白控制細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)，Jun蛋白可通過(guò)轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控細(xì)胞因子的表達(dá)，如粒細(xì)胞集落刺激因子、IL-6和TNF-α，可能與炎癥性皮膚病（如銀屑?。┫嚓P(guān)。調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中的Jun/AP-1活性可以觸發(fā)趨化因子/細(xì)胞因子的表達(dá)，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞聚集到表皮，從而導(dǎo)致銀屑病皮損的病理改變。

我們進(jìn)一步對(duì)核心成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OS（2wt7）、IL-1B（5r87）、MMP-9（6esm）及CCL-2（1dom）在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中聯(lián)結(jié)度最高，說(shuō)明與藥物發(fā)揮作用最相關(guān)。我們針對(duì)FOS、IL1B、MMP9及CCL2蛋白及其配體槲皮素進(jìn)行分子對(duì)接。期待合成與槲皮素相關(guān)靶點(diǎn)明確的藥物運(yùn)用于銀屑病治療。

綜上所述，槲皮素可能作為一個(gè)潛在的藥物小分子，可能通過(guò)經(jīng)典的IL-17信號(hào)通路及TNF-α信號(hào)通路并作用于FOS、IL-1B、MMP-9及CCL-2蛋白起抗炎、促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡、抑制炎性因子趨化等途徑，在銀屑病中起治療作用。本研究旨在闡明中藥復(fù)方對(duì)治療銀屑病的分子機(jī)制，并為開(kāi)發(fā)療效佳且靶點(diǎn)明確的中藥活性成分提供理論依據(jù)。