紫花杜鵑及其混淆品的微性狀及顯微鑒別研究

夏 靜，鄭夏生，張慧曄*，林蔚蘭，植柏毅，王德勤

（1. 廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515；2. 廣州中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院 藥用植物生理生態(tài)研究所，廣東 廣州 510006）

紫花杜鵑是嶺南地區(qū)民間常用于止咳的一種藥材，來(lái)源于杜鵑花科植物廣東紫花杜鵑（嶺南杜鵑）Rhododendron mariaeHance 的干燥葉或帶葉嫩枝[1]，味微苦、辛，性微溫，具有止咳、祛痰的功效，主要用于治療慢性支氣管炎、咳嗽多痰、氣喘、跌打損傷、對(duì)口瘡等癥[2]。紫花杜鵑曾被收載于1977 年版《中國(guó)藥典》（一部）和《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（第三冊(cè)）。

紫花杜鵑藥材主要來(lái)源于野生資源采集，與其近緣種外觀十分相似，很難區(qū)分。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)部分藥農(nóng)將南昆杜鵑R. naamkwanenseMerr.、杜鵑R.simsiiPlanch.、滿山紅R. mariesiiHemsl. et Wils.等作紫花杜鵑采集，廣東省云浮市、福建省武平縣等小型藥材種植基地將廣東杜鵑R. kwangtungenseMerr.et Chun、溪畔杜鵑R. rivulareHand.-Mazz. 等近緣物種當(dāng)做紫花杜鵑移栽種植。為保障中藥飲片、中成藥生產(chǎn)和臨床安全用藥安全，亟需開(kāi)展紫花杜鵑及其混淆品的物種鑒別研究。通過(guò)微性狀能簡(jiǎn)捷、直觀地觀察到一些肉眼辨識(shí)不清的外觀特征，可用于易混淆品的鑒別[3-5]。目前尚缺乏紫花杜鵑及其混淆品的微性狀比較研究及鑒別方法[3]，本研究利用顯微技術(shù)對(duì)紫花杜鵑及近緣混淆品的微性狀比較分析，旨在為紫花杜鵑藥材鑒別提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

共收集6 種杜鵑屬植物樣品，由廣州白云山和紀(jì)黃埔中藥有限公司高級(jí)制藥工程師張慧曄鑒定，具體信息見(jiàn)表1，藥材標(biāo)本及臘葉標(biāo)本保存于國(guó)家中醫(yī)藥管理局南藥資源綜合開(kāi)發(fā)國(guó)際重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

表1 實(shí)驗(yàn)樣品信息表Tab. 1 Experimental sample information table

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

尼康D7000 型數(shù)碼照相機(jī)（日本尼康公司）；徠卡EZ4HD 型體視顯微鏡（德國(guó)徠卡公司）；MZ201型體視顯微鏡（廣州市明美光電技術(shù)有限公司）；蔡司Axio scope A1 型顯微鏡（德國(guó)卡爾蔡司公司）；奧林巴斯BX41 型雙目顯微鏡（奧林巴斯＜中國(guó)＞有限公司）；拍照軟件MShot Image；圖像處理軟件Adobe Photoshop CS3。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 微性狀特征鑒別 采用體視顯微鏡觀察樣品的莖、葉、花及果實(shí)等各部位微性狀特征，采用自動(dòng)景深疊加拍攝。

1.3.2 顯微特征鑒別 參考2020 年版 《中國(guó)藥典》（四部）顯微鑒別法[6]，對(duì)樣品的莖、葉表面和粉末進(jìn)行制片，觀察各部位組織結(jié)構(gòu)及特征。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫花杜鵑及其混淆品的原植物形態(tài)特征

紫花杜鵑及其混淆品的原植物形態(tài)特征見(jiàn)表2，除杜鵑為冬季落葉外，其余均為常綠灌木。6 種近緣種植物中，除南昆杜鵑具有比較典型的倒披針形葉片外，組內(nèi)其它植物葉片為卵形、狹卵形、橢圓形，種間差異不明顯；杜鵑花萼裂片明顯，卵形或長(zhǎng)卵形，（4 ～ 5） mm ×（2 ～ 4） mm；溪畔杜鵑花萼裂片狹三角形，2 ～ 5 mm，其它4 種植物花萼裂片不明顯。杜鵑花色、雄蕊數(shù)目與其它種明顯不同，杜鵑花為紅色、雄蕊10 枚，其它為紫色或粉紫色、雄蕊5 枚。

表2 紫花杜鵑及其混淆品的原植物形態(tài)特征Tab. 2 Morphological characteristics of R. mariae and its adulterants

2.2 紫花杜鵑及其混淆品的微性狀特征

2.2.1 紫花杜鵑的微性狀特征 由紫花杜鵑的微性狀特征可知，紫花杜鵑葉片正面中脈被糙伏毛，葉背面散生紅棕色糙伏毛，以中脈為多，中脈和葉脈在葉面凹陷，葉背隆起；葉柄密被紅棕色糙伏毛；花梗密被銹色柔毛，花萼不明顯，被銹色柔毛；莖表面可見(jiàn)多數(shù)黃棕色糙伏毛，30° ～ 60°著生；子房密被絹狀紅棕色長(zhǎng)糙伏毛；花絲無(wú)毛或有時(shí)下部被極稀疏微毛；蒴果密被紅褐色糙伏毛，見(jiàn)圖1。

圖1 紫花杜鵑的微性狀特征Fig. 1 Micro-chracters of R. mariae

2.2.2 紫花杜鵑混淆品的微性狀特征 由表3 可知，紫花杜鵑及其混淆品的微形態(tài)特征差異明顯。紫花杜鵑、杜鵑和南昆杜鵑小枝和葉柄均被糙伏毛，

表3 紫花杜鵑及其混淆品的微性狀特征Tab. 3 Micro-chracters of R. mariae and its adulterants

無(wú)腺頭毛或剛毛，紫花杜鵑被紅棕色糙伏毛，混淆品杜鵑和南昆杜鵑莖皮上的毛邊緣和先端多呈絲狀開(kāi)裂；廣東杜鵑、溪畔杜鵑、乳源杜鵑的嫩莖或花梗有腺頭毛和剛毛，且剛毛多與莖呈60° ～ 90°著生，可明顯區(qū)分真?zhèn)巍?/p>

2.3 紫花杜鵑及其混淆品的顯微特征

2.3.1 紫花杜鵑的顯微特征 紫花杜鵑葉上表皮細(xì)胞多邊形，垂周壁式樣平直-弓形；下表皮細(xì)胞多邊形，垂周壁式淺波狀，氣孔長(zhǎng)橢圓形，不定式，副衛(wèi)細(xì)胞有環(huán)紋角質(zhì)層紋；木質(zhì)化非腺毛眾多，紅棕色，由數(shù)十個(gè)細(xì)胞組成，長(zhǎng)118 ～ 975 μm；偶見(jiàn)簇晶散在；莖表皮非腺毛長(zhǎng)55 ～ 330 μm，葉柄非腺毛長(zhǎng)81 ～253 μm，見(jiàn)圖2。2.3.2 紫花杜鵑混淆品的顯微特征 由表4 可知，紫花杜鵑及其混淆品的的葉片上下表皮細(xì)胞形狀、垂周壁樣式差異不大，葉片或多或少均能觀察到簇晶，其中以杜鵑和南昆杜鵑最多。木質(zhì)化非腺毛、腺毛形態(tài)和長(zhǎng)度存在較大差異。5 個(gè)混淆品中，溪畔杜鵑、廣東杜鵑、乳源杜鵑均有腺毛，其中，溪畔杜鵑的腺毛柄部較長(zhǎng)，乳源杜鵑腺毛較多；木質(zhì)化腺毛也有較大區(qū)別，廣東杜鵑莖上非腺毛基部有乳頭狀隆起，溪畔杜鵑花萼非腺毛多彎曲；杜鵑、南昆杜鵑、乳源杜鵑的木質(zhì)化非腺毛邊緣或先端均成絲狀開(kāi)裂，且南昆杜鵑花萼非腺毛先端多呈魚(yú)尾狀不規(guī)則分叉，辨識(shí)度非常高，與正品紫花杜鵑平滑且長(zhǎng)的木質(zhì)化非腺毛相區(qū)別。

圖2 紫花杜鵑的顯微特征Fig. 2 Microscopic characteristics of R. mariae

表4 紫花杜鵑及其混淆品的顯微特征Tab. 4 Microscopic characteristics of R. mariae and its adulterants

3 討論

傳統(tǒng)的表觀性狀鑒別在花果期時(shí)鑒定起來(lái)較容易，但紫花杜鵑藥材采收時(shí)間為4 月至5 月，紫花杜鵑花期為1 月至4 月，加之采收部位為嫩枝葉，全年均可采集，采收的藥材往往缺乏花、果，給辨識(shí)帶來(lái)困難。研究發(fā)現(xiàn)杜鵑花科植物中，一些廣布種的葉形變異較大，無(wú)法利用葉形來(lái)區(qū)分紫花杜鵑及近緣種[7]；葉型、花、果實(shí)等器官特征也變化較大，種間差異不明顯。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，雖然紫花杜鵑及近緣種的毛被疏密情況種內(nèi)差異也很大，但毛被著生的角度、類(lèi)型、長(zhǎng)短、形態(tài)等具有一定規(guī)律。

有學(xué)者將廣東杜鵑R. kwangtungense作為溪畔杜鵑R. rivulare的變種處理[8]，筆者通過(guò)比較鑒定，發(fā)現(xiàn)兩者在表觀形態(tài)、微性狀和顯微特征中均存在明顯差異，依照《中國(guó)植物志》的觀點(diǎn)，認(rèn)為它們應(yīng)該屬于兩個(gè)差別較大的獨(dú)立的種。

4 結(jié)論

紫花杜鵑具扁平糙伏毛、不具剛毛、腺頭毛，毛被與莖干成30° ～ 60°著生，顯微鏡下可見(jiàn)木質(zhì)化非腺毛較長(zhǎng)，且先端平滑，基部呈半球形隆起；其混淆品毛被著生的角度、類(lèi)型、長(zhǎng)短、形態(tài)等與之不同，顯微鏡下木質(zhì)化非腺毛、腺毛形態(tài)和長(zhǎng)度也有明顯差異。采用微性狀和顯微特征，可快速、簡(jiǎn)便地鑒別紫花杜鵑及其近緣混淆品，為紫花杜鵑藥材質(zhì)量控制提供依據(jù)。