隱丹參酮對慢性皮質(zhì)酮注射誘導抑郁小鼠的干預作用

陳明珠 廖婉婷 黃幼霞

泉州醫(yī)學高等?？茖W校藥學院，福建泉州 362011

抑郁癥是一類情感精神障礙性疾病，為全球三大疾病負擔之一[1]，其發(fā)生與皮質(zhì)酮（corticosterone，CORT）水平相關(guān)[2]。皮質(zhì)酮長期給藥能夠誘導小鼠產(chǎn)生抑郁樣行為，該模型可用于抗抑郁藥的篩選評價及機制研究[3-4]。藥物是治療抑郁癥的主要手段，中藥因安全性高、靶點多樣化等受到臨床廣泛關(guān)注。在治療抑郁癥的方劑中，丹參應用頻次很高[5]，其可改善利血平誘導的小鼠抑郁癥狀[6]。隱丹參酮是丹參中活性較強的成分，具有保護神經(jīng)細胞、抗氧化、抗腫瘤等作用[7-9]，在抗抑郁方面有一定的潛力。本研究通過慢性皮質(zhì)酮注射誘導小鼠抑郁模型，觀察隱丹參酮的抗抑郁作用，并探討其可能的機制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

隱丹參酮（上海源葉生物科技有限公司，含量≥97%，批號：S31670）；氟西汀膠囊（禮來蘇州制藥有限公司，批號：9833A）；皮質(zhì)酮（上海源葉生物科技有限公司，批號：S30265）；CORT、促腎上腺皮質(zhì)激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（上海信裕生物科技有限公司，批號：E202008）。

1.2 動物

KM 小鼠60 只，SPF 級，雄性，體重18～22 g。北京華阜康生物科技股份有限公司供應，合格證號：1103222011005746，動物許可證號為SCXK（京）：2019-0008。本研究經(jīng)泉州醫(yī)學高等?？茖W校倫理委員會批準，飼養(yǎng)于學校動物實驗中心，恒溫，恒濕，自由攝食飲水。

1.3 研究方法

60 只小鼠按隨機數(shù)字表法分為正常對照組、模型組、氟西汀組（20 mg/kg）、隱丹參酮低劑量組（10 mg/kg）、隱丹參酮中劑量組（20 mg/kg）、隱丹參酮高劑量組（40 mg/kg），每組10 只。正常對照組每天皮下注射生理鹽水10 ml/kg，其余五組每天給予皮質(zhì)酮20 mg/kg。皮質(zhì)酮給藥0.5 h 后，氟西汀組和隱丹參酮各劑量組灌胃給藥1 次，正常對照組和模型組給予等量的生理鹽水，連續(xù)給藥21 d。小鼠出現(xiàn)體重增長緩慢、糖水消耗比降低及行為絕望現(xiàn)象即建模成功[10-11]。

1.4 觀察指標

1.4.1 糖水偏好測試及體重增加值 小鼠禁食禁水24 h，給予預先稱重的2 %蔗糖水和純水各1 瓶，飲用2 h。測定液體消耗量，并計算糖水消耗比。糖水消耗比=蔗糖水溶液消耗量/（蔗糖水溶液消耗量+純水溶液消耗量）×100%。實驗第22 天測定小鼠體重增加值。

1.4.2 行為學測試 強迫游泳實驗：小鼠放入水溫（25±2）℃，長20 cm，寬20 cm，水深15 cm 的水桶中強迫游泳6 min。適應2 min 后，記錄后4 min 內(nèi)累計不動時間。曠場實驗：小鼠置于250 mm×250 mm 的曠場箱內(nèi)正中央方格，視頻分析系統(tǒng)記錄5 min 內(nèi)的中央格停留時間、直立次數(shù)、水平穿越格數(shù)、修飾次數(shù)。水迷宮實驗：參照文獻[12]進行定向航行試驗，記錄第5 天小鼠逃避潛伏期。第6 天進行空間探索實驗，記錄小鼠目標象限停留時間及站臺周圍活動路程。

1.4.3 CORT、ACTH、BNDF 檢測 采用1%戊巴比妥鈉麻醉小鼠，眼球取血，分離血清，然后將小鼠斷頭取腦，分離海馬組織和前額葉皮質(zhì)，制備勻漿，取上清液。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定CORT、ACTH 和BDNF 含量。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0 對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（）表示，多組計量資料比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t 檢驗。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組體重情況及行為學測評結(jié)果比較

2.1.1 各組體重增加值、糖水消耗比和不動時間比較 模型組體重增加值、糖水消耗比低于正常對照組，不動時間長于正常對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）。隱丹參酮各劑量組體重增加值高于模型組，隱丹參酮中、高劑量組糖水消耗比高于模型組，不動時間短于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.01 或P ＜0.05）。見表1。

表1 各組體重增加值、糖水消耗比和不動時間比較（）

表1 各組體重增加值、糖水消耗比和不動時間比較（）

注：與正常對照組比較，aaP ＜0.01；與模型組比較，bP ＜0.05，bbP ＜0.01

2.1.2 各組中央格停留時間、水平穿越格數(shù)、直立次數(shù)和修飾次數(shù)比較 模型組中央格停留時間長于正常對照組，水平穿越格數(shù)、直立次數(shù)、修飾次數(shù)少于正常對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）。隱丹參酮各劑量組中央格停留時間短于模型組，水平穿越格數(shù)、修飾次數(shù)多于模型組，隱丹參酮中、高劑量組直立次數(shù)多于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05 或P ＜0.01）。隱丹參酮中、高劑量組中央格停留時間短于隱丹參酮低劑量組，水平穿越格數(shù)、直立次數(shù)、修飾次數(shù)多于隱丹參酮低劑量組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）。見表2。

表2 各組中央格停留時間、水平穿越格數(shù)、直立次數(shù)和修飾次數(shù)比較（）

表2 各組中央格停留時間、水平穿越格數(shù)、直立次數(shù)和修飾次數(shù)比較（）

注：與正常對照組比較，aaP ＜0.01；與模型組比較，bP ＜0.05，bbP ＜0.01；與隱丹參酮低劑量組比較，cP ＜0.05，ccP ＜0.01

2.1.3 各組逃避潛伏期、目標象限停留時間和站臺周圍活動路程比較 模型組逃避潛伏期長于正常對照組，目標象限停留時間、站臺周圍活動路程短于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05 或P ＜0.01）。隱丹參酮中、高劑量組逃避潛伏期短于模型組，目標象限停留時間、站臺周圍活動路程長于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05 或P ＜0.01）。隱丹參酮高劑量組逃避潛伏期短于隱丹參酮低、中劑量組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。見表3。

表3 各組逃避潛伏期、目標象限停留時間和站臺周圍活動路程比較（）

表3 各組逃避潛伏期、目標象限停留時間和站臺周圍活動路程比較（）

注：與正常對照組比較，aP ＜0.05，aaP ＜0.01；與模型組比較，bP ＜0.05，bbP ＜0.01；與隱丹參酮低劑量組比較，cP ＜0.05；與隱丹參酮中劑量組比較，dP ＜0.05

2.2 各組血清CORT、ACTH 含量比較

模型組CORT 和ACTH 含量高于正常對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）。隱丹參酮各劑量組CORT 水平低于模型組，隱丹參酮中、高劑量組CORT、ACTH 水平低于隱丹參酮低劑量組，隱丹參酮高劑量組CORT 水平低于隱丹參酮中劑量組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.01 或P ＜0.05）。見表4。

表4 各組血清CORT、ACTH 含量比較（）

表4 各組血清CORT、ACTH 含量比較（）

注：與正常對照組比較，aaP ＜0.01；與模型組比較，bP ＜0.05，bbP ＜0.01；與隱丹參酮低劑量組比較，ccP ＜0.01；與隱丹參酮中劑量組比較，dP ＜0.05。CORT：皮質(zhì)酮；ACTH：促腎上腺皮質(zhì)激素

2.3 各組海馬、前額葉皮質(zhì)BDNF 含量比較

模型組海馬、前額葉皮質(zhì)BDNF 含量低于正常對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）。隱丹參酮中、高劑量組海馬、前額葉皮質(zhì)BDNF 含量高于模型組和隱丹參酮低劑量組，隱丹參酮高劑量組海馬BDNF 含量高于隱丹參酮中劑量組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜0.01）。見表5。

表5 各組海馬、前額葉皮質(zhì)BDNF 含量比較（pg/g，）

表5 各組海馬、前額葉皮質(zhì)BDNF 含量比較（pg/g，）

注：與正常對照組比較，aaP ＜0.01；與模型組比較，bbP ＜0.01；與隱丹參酮低劑量組比較，ccP ＜0.01；與隱丹參酮中劑量組比較，ddP ＜0.01。BDNF：腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子

3 討論

長期大量糖皮質(zhì)激素給藥會導致下丘腦-垂體-腎上腺軸（hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPA）功能紊亂，誘導動物產(chǎn)生抑郁樣行為[13-14]。與經(jīng)典的CUMS 模型比較，皮質(zhì)酮抑郁模型的造模周期短，且對動物的傷害較小[4]。抑郁的行為學檢測方法中，糖水偏好測試可以反映快感消失，曠場實驗能反映好奇和自我探索行為，強迫游泳實驗則能評價行為絕望程度[15-16]。

本研究結(jié)果顯示，隱丹參酮給藥后可明顯改善皮質(zhì)酮抑郁模型小鼠的行為學測評實驗結(jié)果，提示隱丹參酮具有一定治療作用。HPA 亢進是抑郁癥發(fā)病的重要原因，慢性應激促使HPA 過度激活，血清ACTH和CORT 大量分泌，高濃度的CORT 選擇性損傷大腦海馬神經(jīng)元，出現(xiàn)學習記憶障礙[17-19]，而小鼠的記憶力減退與抑郁樣表型之間存在關(guān)聯(lián)[20]。水迷宮測試可以評價小鼠的長期空間記憶能力[21]。本研究中，通過長期給予小鼠CORT，模擬HPA 亢進，結(jié)果顯示小鼠出現(xiàn)學習記憶能力障礙、血清ACTH 和CORT 含量增加，而隱丹參酮能夠?qū)惯@種現(xiàn)象，提示其能改善抑郁小鼠的空間記憶能力和認知障礙，該作用可能與調(diào)節(jié)HPA 有關(guān)。

BDNF 在海馬、大腦皮層、下丘腦等部位均有高表達量[22]，其對神經(jīng)元的存活、增殖分化及再生促進起重要作用[23]。研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者海馬及前額葉皮質(zhì)BDNF 表達水平減少[24]，抑郁癥的發(fā)生發(fā)展與腦內(nèi)BDNF 表達下調(diào)導致神經(jīng)元萎縮，進而引起神經(jīng)膠質(zhì)細胞缺失有關(guān)[25]。而抗抑郁藥物通過上調(diào)BDNF 水平，能改善抑郁相關(guān)癥狀[26-27]。本研究中，隱丹參酮可提高小鼠海馬、前額葉皮質(zhì)BDNF 表達水平，提示其抗抑郁作用與改善腦內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子有關(guān)。

綜上所述，隱丹參酮能改善皮質(zhì)酮誘導抑郁小鼠的抑郁樣行為，中、高劑量組效果較為明顯，其機制可能與調(diào)節(jié)HPA 和腦內(nèi)BDNF 表達水平有關(guān)。