腎移植細胞毒交叉配型實驗的臨床分析及其意義

胡海亮，李 寧，許 偉，劉淑均，程 越，廖貴益，卞茂紅，鐘 濤

慢性腎臟病是一個全球性的健康問題，中國成人的慢性腎臟病患病率約為10%，而腎移植手術逐漸成為腎臟終末期治療的重要手段之一，腎源的匱乏是制約腎移植手術的主要因素，僅僅通過公民逝世捐贈遠遠不能滿足臨床移植需求。親屬活體捐贈可以很大程度上緩解腎源的匱乏，移植前的檢測則顯得至關重要，因為移植排斥是影響移植腎存活的重要因素之一。補體依賴的細胞毒交叉配型實驗( complement dependent cytotoxic crossmatch，CDC)是可以預防急性排斥反應發(fā)生的實驗之一，故通過對供受者淋巴毒交叉配型實驗結果進行分析，分析分布情況并總結臨床意義。

1 材料與方法

1.1 病例資料

收集2019年6月—2020年12月在該院泌尿外科擬進行腎移植潛在受者的臨床資料，回顧參與供受者淋巴毒交叉配型實驗檢測344例，其中男235例，女109例，受者年齡13～63(37.38±10.12)歲；親屬活體供腎者年齡39～71(54.29±7.21)歲。所有受者均明確診斷為慢性腎功能不全尿毒癥期，術前群體反應性抗體檢測均為陰性。

1.2 CDC交叉配型實驗步驟

實驗操作見文獻，簡述步驟如下：采用淋巴細胞分離液分離出淋巴細胞，洗滌1次后調節(jié)至適當濃度備用。設定對照孔(包含陰性對照、血清對照、補體對照和陽性對照)及不低于3個檢測孔，按對照孔和檢測孔布局分別加樣，檢測孔內包含無菌礦物油、已調好濃度的淋巴細胞、受者血清及兔補體；加完樣后，輕輕振蕩，37 ℃孵育60 min；對照孔和檢測孔均加入熒光終止劑，放置15～30 min；最后，應用倒置相差熒光顯微鏡，對200個淋巴細胞中死亡的淋巴細胞計數(shù)并示以死淋巴細胞百分比(percent of dead lymphocyte，PDL)。

1.3 CDC交叉配型結果判定

根據(jù)供腎來源分為公民逝世后器官捐贈(donation after cardiac death , DCD)組與親屬活體供腎(living donation between relatives, LDR)組。根據(jù)PDL分為低風險組(PDL≤9)，也稱為CDC陰性，高風險組(PDL>9)，也稱為CDC陽性。

2 結果

2.1 受者性別、年齡、血型分布情況

受者性別分布見圖1A，344例受者中，男女比例是2.16 ∶1，在不同性別受者中，風險組間對比差異無統(tǒng)計學意義。受者年齡分布見圖1B，344例受者平均年齡(37.38±10.12)歲。其中年齡≤20歲有12例(約3.49%)，年齡21～50歲有297例(約86.92%)，年齡>50歲有35例(約10.17%)。在低風險組中，年齡31～40歲受者例數(shù)最多，高風險組中，年齡41～50歲受者例數(shù)最多，且年齡≤40歲受者，其低風險組例數(shù)顯著低于高風險組(

P

<0.01)(見圖1B)。受者血型分布情況如圖1C，在不同風險組中，其血型分布對比差異無統(tǒng)計學意義。

圖1 受者性別、年齡、血型分布情況A：受者性別分布情況；B：受者年齡分布情況；C：受者血型分布情況；與低風險組比較：**P<0.01

2.2 比較不同性別、年齡、血型受者PDL值

在低風險組中對比受者PDL，男、女性受者間差異無統(tǒng)計學意義；對比高風險組中的受者PDL，男性受者顯著高于女性受者，對比差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.05)，見表1。在不同風險組中對比受者PDL，不同血型間對比差異均無統(tǒng)計學意義；在低風險組中對比受者PDL，年齡41～50歲組明顯高于21～30歲組和31～40歲組，其差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.05)，其他組間相比差異無統(tǒng)計學意義。在高風險組中對比受者PDL，年齡>50歲組顯著低于41～50歲組，相比差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.05)，其他組間相比差異無統(tǒng)計學意義，見表2。

表1 不同性別受者的PDL值對比

表2 受者不同血型的PDL對比

2.3 LDR組供者性別、年齡、血型分布情況

94例LDR組供者性別分布如圖2A，不同性別在不同風險組間對比差異無統(tǒng)計學意義。LDR組供者年齡分布見圖2B，在不同年齡分組中，其不同風險組對比差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.05)。供者血型分布情況見圖2C。在不同血型供者中，其不同風險組對比差異無統(tǒng)計學意義。

圖2 供者性別、年齡、血型分布情況

2.4 比較不同供者性別、年齡、血型的受者PDL值

在低風險組中對比受者PDL，女性供者顯著低于男性供者，相比差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.05)。而在高風險組中對比受者PDL，男性供者低于女性供者，但是兩者相比差異無統(tǒng)計學意義(表3)。在低風險組，各個年齡段對比其受者PDL，相比差異均無統(tǒng)計學意義，而高風險組中受者PDL年齡>50歲組最低；在低風險組中對比受者PDL，不同血型供者相比差異均無統(tǒng)計學意義。見表4。

表3 不同性別供者對應受者PDL對比

表4 不同供者年齡、血型的供者對應受者PDL對比

2.5 供受者血型是否相同的受者分布及其PDL結果分析

供受者血型是否相同分布情況見表5，無論供受者血型是否相同，其不同風險組對比差異無統(tǒng)計學意義。在不同風險組中，不論供受者血型是否相同，其受者PDL對比差異無統(tǒng)計學意義。

表5 供受者血型是否相同情況及對應受者PDL對比

2.6 供受者關系分布情況

供受者關系分布如表6，在不同腎來源組中，不同風險組對比差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.05)；在低風險組中，LDR受者PDL顯著低于DCD組，相比差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.01)，而在高風險組中，對比受者PDL，兩組對比差異無統(tǒng)計學意義。

表6 不同腎源對應受者PDL對比

86例有血緣關系分布情況如表7，是否有血緣關系，不同風險組對比差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.05)。在低風險組中對比受者PDL，母親供腎顯著低于父親供腎，對比差異有統(tǒng)計學意義(

P

<0.01)，并且受者PDL中，母親供腎在LDR組最低。

表7 LDR組及其對應受者PDL對比

3 討論

腎功能終末期患者最理想的治療方法是腎移植，而移植后1年內出現(xiàn)的移植物丟失則會給患者及家屬帶來經(jīng)濟和身心健康雙重損害，隨著各項檢測的完善及新型免疫抑制劑的應用，移植術后發(fā)生排斥反應率降至10%～15%。在腎移植中，供受者之間交叉配型結果與術后發(fā)生急性排斥反應及早期移植物丟失的風險有關，淋巴細胞毒交叉配型實驗是移植前重要且必須的實驗，其CDC陽性是增加腎移植術后急性排斥反應的發(fā)生率和移植腎丟失率風險的重要指標。有針對性地選擇CDC陰性的供者，有利于減少受者腎移植術后急性排斥反應及早期移植物丟失，既降低慢性腎臟病患者病痛，也減少患者家庭的心理及經(jīng)濟壓力。

該研究中男性受者235例，女性受者109例，男性受者多于女性，臨床醫(yī)師可能認為女性致敏因素較多，如懷孕，故在選擇受體時，有意識地偏重于男性受者。也有研究顯示男性受者發(fā)生排斥反應風險高于女性。在該研究中，在不同風險組中，無性別差異，反映女性受者不是移植風險更高的人群。該研究中，年齡<20歲組受者低風險比例最大，且其PDL值低，暗示受者年齡<20歲時行腎移植術，其術后排斥風險較低，與文獻報道稍有不符，可能與該研究中年齡<20歲組的供者均是其父母有關，當供者是父母時，其移植本身的排斥率較低。隨著受者年齡增大，高風險組中受者比率逐漸增大，可能與供者來源有關。該研究中，受者血型例數(shù)排序為A型>O型>B型>AB型，O型受者PDL陰性數(shù)最多。在低風險組中，血型間對比差異無統(tǒng)計學意義，在高風險組中，B型受者最多，血型間對比差異無統(tǒng)計學意義，反映不同風險組，受者血型不是影響受者PDL的因素之一，與研究一致。

選擇供者有一定要求，該研究中LDR組中女性供者數(shù)量多于男性。在低風險組中，女性比率高于男性，并且對其受者PDL比較，女性供者顯著低于男性供者，反映出女性是LDR組的主要人群。對供者為父母進行進一步比較，母親供腎對應的受者PDL顯著低于父親供腎，反映出母親是親屬活體捐贈主要人群，與文獻一致。供者年齡一般選擇在18～65歲，無相關基礎病，當供者身體素質好時，年齡可適當放寬，但是許多移植中心依然傾向選擇年輕供者，該研究低風險組中，顯示老年供者的PDL值較低，年齡均超過55歲，與文獻報道一致，反映出供者年齡不是獨立的風險因素。但是有文獻報道供者超過55歲，其受者遠期預后較差，供者年齡是影響預后的獨立危險因素。

該研究中，供者血型以O型最多，AB型最少，但是不同血型供者例數(shù)相比差異均無統(tǒng)計學意義，在低風險組中LDR，其受者PDL值比較結果反映出供者的不同血型不影響親屬活體捐贈；當受者PDL為陰性時，不論供受者血型是否一致，對受者PDL結果影響甚小，反映出供者血型不是腎移植中主要風險因素。該研究中親屬活體移植比例稍低于澳大利亞活體移植(占30%)，遠低于日本活體移植(高達80%)，與其他國家相比差距較大，該研究中LDR組中低風險組約占89.36%，而在DCD組中低風險組約占48.8%，比較其受者PDL，LDR組顯著低于DCD組，與文獻報道一致，暗示親屬活體供腎優(yōu)于公民逝世后器官供腎，并且能夠更快地提供腎源，及時有效解決腎衰竭患者的病痛。