血清miR-210水平與妊娠期高血壓疾病患者不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性

劉洋 樊天云 封淼

（南陽市第一人民醫(yī)院產(chǎn)二科，河南 南陽 473000）

妊娠期高血壓疾病（Hypertensive disorders in pregnancy，HDP）在婦產(chǎn)科發(fā)病率較高[1]，對患者心、腎、肝等重要器官均可造成一定損傷，嚴(yán)重者可引起多器官組織功能衰竭。同時(shí)，HDP會增加胎盤早剝、術(shù)后感染等不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)，甚至可危及母嬰生命安全[2]。因此，探索與HDP不良妊娠結(jié)局有關(guān)的因素，并實(shí)施針對性早期監(jiān)測與干預(yù)尤為關(guān)鍵。研究表明，在HDP發(fā)展過程中，免疫因素較為重要[3]。

微小核糖核酸（miRNA）是一種內(nèi)源性非編碼 RNA，可調(diào)節(jié)多種基因表達(dá)，參與免疫應(yīng)答、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等[4]，對人體生理活動產(chǎn)生影響。其中miR-210是一種常見miRNA，參與調(diào)控細(xì)胞的生長、免疫應(yīng)答，可作為子癇前期妊娠的潛在診斷標(biāo)志物[5]；miR-210異常表達(dá)也可能對診斷 HDP有一定價(jià)值[6]。但miR-210是否參與了HDP不良妊娠結(jié)局病理過程尚不明確?；诖?，本研究重點(diǎn)分析血清 miR-210水平與HDP患者不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究的執(zhí)行獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)同意，前瞻納入2018年5月至2019年5月我院收治的93例HDP患者作為研究對象，患者與家屬對此次研究知情同意。研究對象年齡24-39歲，平均年齡 28.10±3.23歲；孕前體重指數(shù) 18.12-25.97 kg·m-2，平均孕前體重指數(shù) 22.20±0.48 kg·m-2；分娩孕周32-38 w，平均分娩孕周35.40±1.11 w；疾病類型：妊娠期高血壓35例，子癇前期15例，慢性高血壓伴子癇前期11例，慢性高血壓32例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《妊娠期高血壓疾病診治指南（2015）》[7]中HDP診斷標(biāo)準(zhǔn)；妊娠期首次出現(xiàn)高血壓；單胎妊娠。

排除標(biāo)準(zhǔn)：病情嚴(yán)重需要終止妊娠；合并腎臟、肝臟疾??；合并其他妊娠并發(fā)癥，如妊娠期糖尿病；子癇家族史；合并病毒感染。

1.2 方法

1.2.1 基線資料收集

收集基線資料，包括年齡、孕前體重指數(shù)、分娩孕周、疾病類型等。

1.2.2 血壓檢測方法

使用電子血壓計(jì)（飛利浦，BP700C型）測定患者舒張壓、收縮壓并比較。

1.2.3 miR-210檢測

采集2 mL空腹靜脈血，常溫靜置30 min，3000 r·min-1離心（半徑 12 cm）10 min，-80℃下保存待測。加入1 mL的Trizol RNA，提取RNA，使用紫外分光光度計(jì)對 RNA總純度進(jìn)行檢測達(dá)標(biāo)（純度良好區(qū)間范圍為 1.8-2.0）后，使用 Takara反轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，正向引物序列：5'-CAATAACTCTCCGTGTGACAGC-3'，反向引物序列：5'-TATGGTTGTTCTCGTCTCCTTCTC-3' ，長度為 77 bp，存于 4℃冰箱內(nèi)，使用 Applied Bioststems 7500實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)進(jìn)行擴(kuò)增和基因型檢測，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性3 min，95℃變性12 s，60℃復(fù)性40 s，72℃延伸20 s，持續(xù)40個(gè)循環(huán)。重復(fù)三次取平均值，采用2-△△Ct法計(jì)算血清miR-210 相對表達(dá)量，即 △ Ct=Ct（miR-210）-Ct（U6）。

1.2.4 不良妊娠結(jié)局評估方法

根據(jù)《婦產(chǎn)科學(xué)第8版》[8]標(biāo)準(zhǔn)評估，包括新生兒不良結(jié)局（胎兒窘迫、宮內(nèi)發(fā)育遲緩、新生兒感染、新生兒窒息等）與產(chǎn)婦不良結(jié)局（早產(chǎn)、胎盤早剝等）。按照妊娠結(jié)局分為不良妊娠結(jié)局組和對照組（無不良妊娠結(jié)局）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS24.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料均經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，組間用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)；血清miR-210表達(dá)水平與HDP患者不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性采用 Logistic回歸分析；繪制受試者工作曲線（Receiver operator character，ROC）得到曲線下面積（Area under the cure，AUC），檢驗(yàn)血清miR-210表達(dá)水平檢測用于HDP患者不良妊娠結(jié)局預(yù)測的價(jià)值，AUC值＞0.9表示預(yù)測性能較高，0.71-0.90表示有一定的預(yù)測性能，0.5-0.7表示預(yù)測性能較差；P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不良妊娠結(jié)局發(fā)生情況和基線資料

93 例HDP患者中21例妊娠結(jié)局不良，不良妊娠結(jié)局發(fā)生率為22.58%（21/93），其中，11例（52.38%）早產(chǎn)，9例（42.86%）胎兒窘迫，6例（28.57%）宮內(nèi)發(fā)育遲緩，3例（14.29%）新生兒感染，2例（9.52%）新生兒窒息。

對比不良妊娠結(jié)局組與對照組的基線資料發(fā)現(xiàn)，兩組年齡、孕前體重質(zhì)量指數(shù)、分娩孕周、初產(chǎn)婦占比、疾病類型分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不良妊娠結(jié)局組舒張壓、收縮壓、血清miR-210水平明顯高于對照組 (P＜0.05)，見表1。

表1 兩組基線資料比較（±SD）

表1 兩組基線資料比較（±SD）

相關(guān)因素 不良妊娠結(jié)局組 對照組 t/ χ2 P例 21 72年齡（歲） 28.25±3.23 28.06±3.22 0.238 0.813孕前體重指數(shù)（kg·m-2） 22.15±0.52 22.21±0.47 0.503 0.617分娩孕周（w） 35.42±1.15 35.39±1.08 0.110 0.912初產(chǎn)婦 是 13（61.90） 48（66.67） 0.163 0.686否 8（38.10） 24（33.33）疾病類型妊娠期高血壓 8（38.10） 27（37.50）0.276 0.964子癇前期 4（19.05） 11（15.28）慢性高血壓伴子癇前期 2（9.52） 9（12.50）慢性高血壓 7（33.33） 25（34.72）舒張壓（mmHg） 103.07±6.12 96.01±5.19 5.264 ＜0.001收縮壓（mmHg） 161.01±7.36 154.06±8.61 3.356 0.001 miR-210 5.48±0.79 3.73±0.35 14.626 ＜0.001

2.2 血清 miR-210與不良妊娠結(jié)局關(guān)系 Logistic回歸分析

將血清miR-210表達(dá)作為協(xié)變量，將HDP患者妊娠結(jié)局作為因變量（1=不良妊娠結(jié)局，0=妊娠結(jié)局良好），初步經(jīng)二元Logistic回歸分析檢驗(yàn)后，將其他基線資料（年齡、孕前體重指數(shù)、分娩孕周、初產(chǎn)婦、疾病類型、舒張壓、收縮壓）納入，構(gòu)建多元回歸模型.

結(jié)果顯示，校正各個(gè)資料之間的影響后，舒張壓、收縮壓、血清miR-210過表達(dá)均與HDP患者不良妊娠結(jié)局有關(guān)，可能是HDP患者不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)因子（OR＞1，P＜0.05），其中miR-210的風(fēng)險(xiǎn)因子OR值最大，且為18.488，可能作為獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子，見表2。

表2 血清miR-210與不良妊娠結(jié)局關(guān)系Logistic回歸分析結(jié)果

2.3 血清miR-210表達(dá)預(yù)測HDP患者不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)價(jià)值分析

繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，血清miR-210表達(dá)預(yù)測 HDP患者不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn) AUC（0.800，95%CI=0.653-0.946）、標(biāo)準(zhǔn)誤（0.075，P＜0.001）、cut-off值3.345、特異度0.903、靈敏度0.857、約登指數(shù)0.760，有一定預(yù)測價(jià)值，見圖1。

圖1 血清miR-210表達(dá)預(yù)測HDP患者不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)ROC曲線圖

3 討論

HDP發(fā)病率高，對孕產(chǎn)婦和胎兒的影響均較大，可致孕產(chǎn)婦死亡[9]。HDP發(fā)病后，血壓升高會引起小動脈痙攣，對胎盤供血產(chǎn)生影響，從而導(dǎo)致早產(chǎn)、胎兒發(fā)育遲緩等不良妊娠結(jié)局發(fā)生[10]。

本研究顯示，HDP患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)較高。舒張壓、收縮壓高水平均可能是增加HDP患者不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)的主要因素。血壓水平控制效果不佳將影響患者的抗凝血和凝血功能，增加血管痙攣風(fēng)險(xiǎn)，內(nèi)皮損傷越嚴(yán)重，對產(chǎn)婦及胎兒帶來的不利影響也更為顯著[11-12]。但是，血壓水平高本身就是HDP患者主要病理特征，對妊娠結(jié)局的影響已被證實(shí)，且有部分患者可能存在血壓水平控制理想，但是妊娠結(jié)局仍較差的情況，還需要研究其他可能的風(fēng)險(xiǎn)因子。

miR-210可在多種疾病中異常表達(dá)，包括惡性腫瘤、心血管疾病等[13-14]。研究發(fā)現(xiàn)，miR-210在HDP患者中過表達(dá)，且表達(dá)水平與HDP患者病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[15]。可見，miR-210可能參與了HDP患者疾病的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，不良妊娠結(jié)局組血清miR-210水平高于對照組。進(jìn)一步經(jīng)單項(xiàng) Logistic回歸分析后建立多元回歸模型行多因素分析，結(jié)果顯示，血清miR-210過表達(dá)與HDP患者不良妊娠結(jié)局有關(guān)。

可能的原因?yàn)椋涸贖DP發(fā)病時(shí)，缺氧環(huán)境會誘導(dǎo)miR-210表達(dá)，造成17β-羥基類固醇脫氫酶1水平降低從而促進(jìn)雌酮（E）轉(zhuǎn)化為雌二醇（E2），因而miR-210過表達(dá)也會間接造成E2減少[16]。對于孕產(chǎn)婦，E2作用較大，可以舒張血管、抑制炎癥反應(yīng)，也利于減輕氧化因子造成的破壞[17]。而miR-210水平升高后，機(jī)體血管內(nèi)皮損傷加重，將增加胎盤供血障礙，增加不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)[18]。此外，miR-210過表達(dá)也會對VEGF誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移造成一定的阻礙，從而導(dǎo)致血管再生障礙，對胎盤內(nèi)血管樣結(jié)構(gòu)的生成產(chǎn)生刺激，增加不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)[19]。不僅如此，miR-210對 VECF表達(dá)產(chǎn)生的影響也會對滋養(yǎng)細(xì)胞造成增殖分化的影響和侵入功能的障礙，從而降低胎盤血液供應(yīng)，增加不良妊娠結(jié)局[20]。最后ROC曲線結(jié)果顯示，血清miR-210表達(dá)預(yù)測HDP患者不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)的AUC為0.800，有一定預(yù)測價(jià)值。但目前已知的miRNA種類繁多，除miR-210外，其他種類的miRNA是否也與HDP患者的不良妊娠結(jié)局有關(guān)尚待發(fā)現(xiàn)與驗(yàn)證。

綜上所述，血清miR-210過表達(dá)可能與HDP患者不良妊娠結(jié)局相關(guān)，可增加不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)，檢測血清miR-210水平可預(yù)測HDP患者不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)。