超聲波輔助酶解法提取一點紅多糖測定研究

吉月蕓 陳 文 王湘君 蘇利興 黃曉玲 吳玥函 張瀚分

①海南熱帶海洋學院海洋理學院 ②海南熱帶海洋學院水產與生命學院

經(jīng)查閱大量相關文獻，可知一點紅多糖的功效主要有抗腫瘤、抑制炎癥、顯著提高免疫力等。一點紅多糖的提取技術有酶法、酸法、微波、超聲波提取法和熱水提取法等[2]。本文擬采用超聲波-酶輔助提取一點紅多糖，通過溫度、時間、料液比等單因素變量進行正交試驗，對多糖進行提取，采取響應面優(yōu)化、極差分析和方差分析確定最佳提取方案，為一點紅多糖后續(xù)的研究提供一點借鑒[1]。

1 前言

一點紅，又稱為紅花草，屬菊科，是中國傳統(tǒng)的中藥材，在我國民間被廣泛的使用。其不僅是花紅片、醒脾養(yǎng)兒沖劑等主要的原料藥材，并且還常常被用來作為野菜、涼茶等使用[4]。一點紅產于我國云南、貴州、海南、安徽、四川、湖南、湖北等多個地區(qū)。在全球大概有100多個種類，多產于亞洲、非洲熱帶亞熱帶，些許產于美洲[3]。一點紅喜潮濕、溫暖陰涼的生活環(huán)境，常常生長于濕潤、疏松的地方，但也耐干旱、耐貧瘠，可以在干燥的荒坡上生長。一點紅味道有些許苦還有點微辛，我們主要摘取其嫩葉食之，因為它有清熱解毒作用；可以防治感冒風熱，能治療咳嗽、急性扁桃體炎、泄瀉、尿道炎等疾病。查閱大量文獻可知一點紅的研究價值很廣泛，且應用價值非常高，其中一點紅黃酮的研究比較熱門，而對其含有的多糖的研究非常匱乏。一點紅的多種功效用途使人們對其研究不斷深入，本文通過擬用超聲波-酶輔助提取一點紅多糖，為后續(xù)的發(fā)展研究提供一些借鑒。

2 一點紅研究現(xiàn)狀

一點紅具有較高的藥理價值，有顯著提高免疫力、抵抗病毒、抑制炎癥、抗輻射等作用[5,13]。為此，一點紅受到諸多學者的關注，越來越多的人對一點紅進行不斷深入的研究，比如倪小智[3]采用最常見的熱水浸提法研究出最佳提取方案，以作用溫度、料液比、作用時間、次數(shù)為單因素，提取一點紅多糖，研究結果為：作用溫度為70℃、液料比30:1、提取2次、作用時間2h時工藝最佳。田培燕、陳應康[11]等探討研究一點紅對STZ誘導糖尿病大鼠是否有降低血糖的功效，若有則探究其作用機理；經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)：一點紅有降低糖尿病大鼠血糖、對胰腺細胞進行保護、治療糖尿病與其并發(fā)癥狀等功效。賴紅芳[12]等研究出一點紅多糖最佳提取工藝，利用超聲波法、正交實驗的方法，觀察一點紅多糖提取，即用料液比為1:20、作用功率60 W、作用時間60 min、提取溫度50 ℃，此時提取一點紅多糖的產率最高；實驗結果表明：超聲波法提取一點紅，其所得產率較高、省時、有效成分的破壞極小等優(yōu)點，有一定的推廣性。

3 一點紅多糖提取綜述

3.1 一點紅多糖的提取方法

經(jīng)查閱文獻可知，熱水浸提法[6]提取多糖成本較低、工藝簡單不需要特殊儀器設備，是目前工業(yè)上應用最多的方法，但是提取率低、并且需要耗費較多的時間和原料；堿解法[9]與熱水浸提法相比，堿解法的提取時間短，多糖的產率高，但堿解法提取液中會殘留有較多雜質，提取液稠度增大，難以通過過濾的方法將雜質去除，這對成品有較大的影響；微波提取技術[7]是一種新式多糖提取技術，其作用時間短、成本低、多糖產率高。但微波提取時間過長會破壞多糖的結構，降低多糖的活性；超聲波提取法[10]能以最快速度破壞所提取物質的細胞，可以防止其他的有效成分被破壞。用其提取多糖時，高效省時、可以在很大程度上提高多糖的提取率，且它所需溶劑較少、操作簡單易懂、對環(huán)境的污染度小。酶解法[8-9]提取多糖有兩種提取方法，即為單酶提取和復合酶提取，都是以破解細胞使得細胞能釋放出多糖，優(yōu)勢在于酶解法需要時間較短，作用條件溫和，能有效分解一點紅細胞壁，使多糖能釋放出來。

超聲波輔助提取法[14]對細胞的破壞能力極強，而酶解法能夠很好的保留多糖的活性。如果將兩種提取的方法結合起來，可以更好的體現(xiàn)出兩種提取方法的優(yōu)勢。為此本文研究擬用超聲波輔助酶解法提取一點紅多糖，且超聲波輔助酶解法可以成為日后提取多糖的一個研究方向。

3.2 擬用超聲波輔助酶解法提取多糖

對一點紅樣品進行預處理，制取備用溶液，以提取溫度、時間、功率、料液比為單因素變量，結合極差、方差分析及響應面優(yōu)化來確定一點紅多糖的最優(yōu)提取參數(shù)。采用超聲波輔助酶解法提取一點紅多糖，使用HPLC法檢測一點紅多糖含量，計算粗多糖的提取率。

4 結論

目前，一點紅多糖已經(jīng)成為新時代發(fā)展的一個研究熱點，其含有的多種功效用途使得人們的研究不斷深入，且一點紅在我國多個地區(qū)分布廣泛，其原料價格低廉易得，而多糖在人體中又充當著不可或缺的重要部分，使得其在醫(yī)藥方面的市場及前景有非常大的空間。本實驗以提取時間、溫度、料液比、功率為單因素變量，結合極差、方差分析及響應面優(yōu)化來確定一點紅多糖的最優(yōu)提取參數(shù)，且擬用超聲波輔助酶解法提取其多糖，旨在為其深入研究提供一些參考。