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    真菌毒素分子印跡聚合物的制備及與其快檢技術(shù)聯(lián)用的研究進展

    2021-12-24 11:23:21趙民娟佘永新
    糧食與飼料工業(yè) 2021年3期
    關(guān)鍵詞:黃曲霉印跡毒素

    張 樂,李 壯,趙民娟,李 輝,邵 華,佘永新,金 芬,王 靜

    (中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所,北京 100081)

    我國是一個農(nóng)業(yè)大國,人們以植物源性食物為主,谷物、瓜果、蔬菜是營養(yǎng)膳食中必不可少的結(jié)構(gòu)單元,這些可為人類提供每天所必須的營養(yǎng),但同時其質(zhì)量是否安全放心也成為我們現(xiàn)在所擔(dān)心的問題。真菌毒素是真菌生物產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物。霉菌主要是由曲霉菌、青霉菌、鐮刀菌、鏈格胞菌以及克勞維普斯等產(chǎn)生[1]。毒素的產(chǎn)生主要取決于產(chǎn)地、氣候以及儲藏條件[2]。因此,真菌毒素在很多食物以及加工產(chǎn)品中都可以見到,并且它們在加工和處理過程中很穩(wěn)定。但大多數(shù)的真菌毒素還是來自于種植過程中[3]。對人類和動物造成的危害,主要是通過食用的過程。即使霉菌毒素只存在于痕量水平的濃度,它們在食品中的積累是一個全球性的問題,不僅影響人類和動物健康,也會引發(fā)經(jīng)濟后果[4]。

    真菌毒素污染谷物較多,例如玉米是許多國家的主食,鐮刀菌是主要的產(chǎn)毒菌,在成熟顆粒上生長可能會導(dǎo)致真菌毒素的污染。在波蘭,從玉米種類中分離出的真菌只有2%~10%屬于鐮刀菌屬;但在非洲尤其是南非,玉米谷物中的伏馬菌素的含量很高。玉米中的伏馬菌素與食管癌有著很高的相關(guān)度[5]。由于它們的毒性作用,攝入也就意味著對人類健康有一定的風(fēng)險。有數(shù)據(jù)統(tǒng)計,全世界每年約有25%的食物受到不同程度的真菌毒素污染,每年由于霉變污染導(dǎo)致真菌毒素引起的農(nóng)產(chǎn)品和工業(yè)原料的損失達數(shù)百億美元[6]。

    我國展青霉素在水果、飲料、酒類中的限量標(biāo)準(zhǔn)是50 μg/kg,對脫氧雪腐鐮刀菌烯醇在谷物中的限量指標(biāo)是1 000 μg/kg,黃曲霉毒素B1在玉米及其制品中的限量是20 μg/kg,在糙米等中的限量是10 μg/kg,在小麥、大麥及其他谷物中的限量卻是5 μg/kg,黃曲霉毒素M1在乳及乳制品中的限量指標(biāo)是0.5 μg/kg,赭曲霉毒素A在谷物中的限量指標(biāo)是5.0 μg/kg,玉米赤霉烯酮在谷物中的限量指標(biāo)是60 μg/kg。相比FAO,我國在食品中規(guī)定的限量指標(biāo)較高,同樣也說明真菌毒素在我國的食品中污染較為嚴(yán)重。常見的真菌毒素檢測方法有快速篩檢法和儀器確證法,快速篩檢法有基于抗原抗體識別的酶聯(lián)免疫吸附法[7]、表面等離子共振技術(shù)[8]、納米技術(shù)[9]及熒光檢測技術(shù)[10-11]等;儀器確證法主要以色譜法為主,有液氣色譜法、液氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法及薄層色譜法等。謝瑜杰[12]建立了HPLC-MS/MS同時測定牛奶中6種玉米赤霉烯酮類化合物的檢測方法,具有靈敏度高,重現(xiàn)性好的特點。黃思瑜等[13]建立了UPLC-MS/MS同時測定香辛料中7種真菌毒素的方法,該方法的優(yōu)點是前處理簡單、凈化效果好、靈敏度高和高通量檢測。萬亞美等[14]建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測青貯玉米中9種真菌毒素的方法,具有快速靈敏,準(zhǔn)確可靠的特點。孫娟[15]等建立了測定谷物中12種常見真菌毒素的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法,該方法具有前處理簡單、凈化效果好、靈敏度高和檢測速度快的優(yōu)點。這些方法雖然應(yīng)用比較廣泛,但是依然存在一些問題,如色譜法儀器昂貴,操作復(fù)雜,時間長且分離物極性相差較小時,分離效果不好。免疫檢測技術(shù)對分析物的檢測靈敏度很高,但是檢測成本昂貴,檢測過程要求高,使用的真菌毒素全抗原和抗體均為生物材料,受外界環(huán)境影響大,所以這就限制了該方法的應(yīng)用[16]。所以需要一種快速的前處理方法處理真菌毒素。

    分子印跡技術(shù)(MIT)也稱為分子模板技術(shù),是以目的分子或者結(jié)構(gòu)類似物為模板與功能單體在交聯(lián)劑的作用下通過共價或非共價合成高度交聯(lián)的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)聚合物的技術(shù),通過此方法合成的聚合物稱為分子印跡聚合物。用有機溶劑萃取去除模板分子,在聚合物的網(wǎng)絡(luò)中留下在形狀、大小和功能上與模板分子互補的特定識別位點。但是,可能很難完全去除模板分子,從而導(dǎo)致假陽性結(jié)果,所以可以使用模擬物也就是假模板來代替聚合反應(yīng)期間分析物本身[17-18]來制備聚合物。分子印跡聚合物也經(jīng)常看作是亞分子生物化學(xué)中天然抗體、受體、酶的替代物[19]。

    我們重點介紹近年來研究的新型毒素,鏈格孢霉毒素-桔霉素的分子印跡聚合物的制備技術(shù),以及納米技術(shù)與分子印跡技術(shù)等雜化技術(shù)在真菌毒素檢測中的最新應(yīng)用現(xiàn)狀,并分析分子印跡技術(shù)在檢測真菌毒素中的應(yīng)用前景以及有待解決的問題。

    1 主要真菌毒素MIP聚合物的制備及其應(yīng)用

    1.1 展青霉毒素

    展青霉毒素是公認(rèn)的食品污染物,它們可能會給人類和動物帶來潛在的健康危害[20]。它是由青霉菌、曲霉菌等產(chǎn)生,主要污染水果如蘋果、蘋果汁以及其相關(guān)產(chǎn)品,谷物、芝士以及蔬菜[21]。FAO對展青霉素建立的PMTDI為0.4 μg/kg。由于展青霉毒素用作模板分子的價格昂貴并且毒性較大,故在制備展青霉毒素分子印跡聚合物時大都選用其結(jié)構(gòu)類似物作為替代模板分子來降低實驗的安全風(fēng)險。趙民娟等[22]采用沉淀聚合法,使用2-吲哚酮和6-羥基煙堿作為模板分子,合成了用于展青霉素檢測的MIP聚合物,將所研制的MIP聚合物作為一種選擇性吸附劑,應(yīng)用于固相萃取法測定低濃度的展青霉素。該方法相比于QuEChERS方法,可以更有效的去除樣品中的雜質(zhì),減少基質(zhì)效應(yīng),表現(xiàn)出較好的回收率、特異性、精密度和重現(xiàn)性。MI-SPE方法在食品中具有廣闊的應(yīng)用前景。Nafiseh等[23]用展青霉毒素作為模板分子,高過氧化活性的AgNPs@ZnMOF復(fù)合材料作為分子印跡聚合物的有效載體,制備MIP,用于展青霉毒素的選擇性測定。由于展青霉毒素的電子捕獲特性,它顯著的降低了AgNPs@ZnMOF復(fù)合材料的催化活性,MIP的選擇性識別特性與AgNPs@ZnMOF復(fù)合材料的類過氧化物活性及靈敏的熒光檢測系統(tǒng)相結(jié)合,設(shè)計出展青霉毒素探針,此方法具有能在不受模擬化合物干擾的情況下,在復(fù)雜介質(zhì)中選擇性的測量感光度的優(yōu)點。趙民娟等[24]首次利用雙模板分子即2-吲哚酮和6-羥基煙酸為虛擬模板分子合成了展青霉毒素分子印跡聚合物,采用沉淀聚合法制備展青霉毒素分子印跡聚合物。將此聚合物做為填料制備的 MI-SPE 柱對果汁樣品中展青霉素進行分離富集,有大大降低 HPLC-MS/MS 檢測中的基質(zhì)干擾的優(yōu)點。

    1.2 鏈格孢霉毒素

    鏈格孢霉毒素是谷物中的相關(guān)污染物,但也見于油籽、番茄、蘋果、柑橘類水果、橄欖和其他幾種水果和蔬菜中。鏈格孢菌會導(dǎo)致這些商品在冷藏運輸和儲存過程中甚至在低溫下變質(zhì)。西紅柿對真菌侵染的敏感性很高,特別是鏈格孢屬物種。Rico-Yuste等[25]以3,8,9-三羥基-6h-二苯并[b,d]吡喃6酮(S2)為鏈格孢霉毒素、鏈格孢菌(AOH)和鏈格孢單甲醚(AEM)的替代模板劑,4-乙烯基吡啶(4-VP)和甲基丙烯酰胺(MAM)為功能單體,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)為交聯(lián)劑,制備了有選擇性的鏈格孢霉毒素分子印跡多孔聚合物微球。

    1.3 赭曲霉毒素

    赭曲霉毒素A(OTA)是由部分曲霉菌和青霉菌產(chǎn)生的有毒代謝物,存在于各類飼料原料中,對動物和人類的健康會產(chǎn)生危害,產(chǎn)生腎毒性、肝毒性、致畸、致癌等[26],Pichon等[27]以改變了赭曲霉毒素的氨基酸亞結(jié)構(gòu)的產(chǎn)物為模板,聚甲基丙烯酸甲酯為功能單體,乙烯二甲基丙烯酸甲酯為交聯(lián)劑合成了赭曲霉毒素-MIP聚合物。López-puertollano等[28]以O(shè)TA的羧基化衍生物為模板分子,丙烯酸為功能單體,采用固相合成法將OTA固定在玻璃微珠上制備MIP納米材料。

    1.4 黃曲霉毒素

    黃曲霉毒素主要是黃曲霉、寄生曲霉產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素有很多種,其中黃曲霉毒素B1最為常見且毒性也最強[29]。Arak等[30]以5,7-二甲氧基香豆素為模板,采用本體聚合法合成了分子印跡聚合物MIP,制備了不同摩爾比的模板劑與功能單體和交聯(lián)劑,得到了最佳的工作摩爾比為1∶4∶20。此實驗得出的結(jié)論是本體聚合制備MIP后所得顆粒的性質(zhì)均較不規(guī)則,導(dǎo)致了高表面積,這是此方法的不足之處;但優(yōu)點在于使用MIP和CTB可以防止黃曲霉毒素對肝組織的毒性作用,并且MIP可能有效的與其他霉菌毒素結(jié)合。Sergeyeva等[19]以黃曲霉毒素B1為模板分子,合成了選擇性MIP膜。所制備的聚合物可作為熒光傳感器中的高靈敏度識別元件,使用計算模擬方法可選擇能夠與黃曲霉毒素B1形成強絡(luò)合物的功能單體。結(jié)果表明,烯丙胺、丙烯酰胺、乙基甲基丙烯酸酯、N,N-二甲基丙烯酰胺和2-丙烯酰胺-2-甲基-1-丙磺酸與FAB1相互作用,顯示出高結(jié)合能。該方法還可以對黃曲霉毒素分子和不同功能單體之間形成的配合物的結(jié)構(gòu)進行可視化,這能夠預(yù)測MIP膜中納米結(jié)合位點的潛在結(jié)構(gòu);并且MIP膜可有效地用于水溶液中黃曲霉毒素B1的提取和傳感器原型中黃曲霉毒素B1的定量,提供高選擇性檢測,檢測限為14 ng/ml。其優(yōu)點是所開發(fā)的傳感器系統(tǒng)易于使用,價格低廉,并提供了高度敏感和選擇性的黃曲霉毒素實時檢測。Chmangui等[31]研究了以5,7-二甲氧基香豆素(DMC)為模板分子,甲基丙烯酸(MAA)為功能單體進行MIP合成。MIP-QDs(量子點)復(fù)合物可作為非乳飲料總黃曲霉毒素的篩選方法,所制備的熒光探針對黃曲霉毒素(B1、B2、G1和G2)具有選擇性。此熒光法的優(yōu)點是簡單且廉價,可用于食品中總黃曲霉毒素的篩選。Jiang等[32]以黃曲霉毒素B1為模板分子,電聚合對氨基苯硫酚功能化納米金,研制出一種敏感的電化學(xué)印跡傳感器,用于檢測黃曲霉毒素B1。以鐵氰化物/鐵氰化物溶液為氧化還原探針,采用線性掃描伏安法研究了所研制的黃曲霉毒素B1檢測傳感器的性能。此實驗是一種基于MIP聚合物/AuNPS雜化膜的黃曲霉毒素B1敏感電化學(xué)傳感器的研究,其優(yōu)點在于此MIP雜化傳感器具有良好的靈敏度和重復(fù)性,有望成為食品中黃曲霉毒素B1選擇性電化學(xué)檢測的有效方法。Guo等[33]以5,7-二甲氧基香豆素為模板分子,以3-氨基丙基三乙氧基硅烷為功能單體,制備了包覆CdTe量子點的分子印跡聚合物(MIP@CdTe QDs)、模板分子、功能單體,交聯(lián)劑的最佳摩爾比為4∶20∶15,采用傅里葉變換紅外光譜、透射電鏡、熒光光譜對復(fù)合材料進行表征。該方法可快速檢測復(fù)雜基體中其他微量外源性有害物質(zhì)。Rui等[34]以黃曲霉毒素結(jié)構(gòu)類似物為模板分子,介孔二氧化硅FDU-12作載體制備了高選擇性分子印跡聚合物FDU-12@MIPs,通過掃描電鏡、能量散射X射線,傅里葉變換紅外光譜對聚合物進行表征。該方法的優(yōu)點是可以用于實際樣品中黃曲霉毒素的富集。Song等[35]以6-甲基-4-苯基色滿-2-酮為虛擬模板,甲基丙烯酸、甲基丙烯酸脫水甘油酯為功能單體,采用懸浮聚合法制備了一種生物相容性好的分子印跡聚合物,用掃描電鏡和粒度分布對所得聚合物進行表征。此方法的不足在于回收率較低,但優(yōu)點是可以對谷物樣品中的黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A進行替代選擇。

    1.5 伏馬菌素B1

    伏馬菌素B1(FB1)是一種主要由黃萎病菌和增生病菌產(chǎn)生的有毒次生代謝物,污染玉米、大米等糧食,也會危害人體健康[36]。Munawar等[37]以伏馬菌素為模板,利用計算機技術(shù)設(shè)計納米材料,分析不同丙烯酸單體與FB1分子之間的互相作用,選擇出結(jié)合率最高的丙烯酸單體乙二醇甲基丙烯酸酯磷酸酯、N,N-二乙基-甲基丙烯酸氨基乙酯,通過親和層析實驗測定單體與模板的結(jié)合,驗證了單體對FB1的親和力。采用固相合成法制備納米球,得到的樣品具有高選擇性,不顯示與其他毒素的交叉反應(yīng),回收率高。

    1.6 桔霉素

    桔霉素是一種具有高毒性且致癌、致畸、致突變的真菌毒素,主要產(chǎn)生于青霉、曲霉、紅曲霉的代謝過程,污染谷物等植物食品。在體內(nèi)大量蓄積,會導(dǎo)致腎臟器官病變,致畸、致癌。Lee等[38]以1-萘酚為虛擬模板,二乙烯基苯為交聯(lián)劑,采用兩步沉淀法制備了桔霉素分子印跡聚合物粒子,測定的水稻回收率較低,但此復(fù)合膜可作為水稻提取物中桔霉素的一種有價值的使用材料。劉桂洋[39]以1-羥基-2-萘甲酸為假模板分子,修飾有介孔碳-金納米顆粒功能復(fù)合物的石英晶體金電極表面電聚合鄰氨基苯硫酚形成分子印跡聚合物膜,從而特異性檢測桔霉素。該方法對桔霉素有很好的壓電響應(yīng),檢出限低,顯示出良好的選擇識別能力、抗干擾能力、重現(xiàn)性以及長期穩(wěn)定性,并成功應(yīng)用于谷物樣品中痕量桔霉素的加標(biāo)回收實驗,這種壓電傳感器為食品中痕量桔霉素的檢測提供了一種新的方法。Atar等[40]采用印跡伏安傳感器測定黑麥樣品中的桔霉素,此方法的優(yōu)點是檢測限低,且對桔霉素具有較高靈敏度。李鴻英[41]采用本體聚合方法以3,5-二羥基-2-萘甲酸為假模板分子,甲基丙烯酸為功能單體,在酶標(biāo)板孔表面直接紫外引發(fā)合成了對桔霉素分子印跡聚合物膜,成功將分子印跡技術(shù)應(yīng)用于免疫分析中,建立了一種食品中桔霉素分子印跡仿生酶聯(lián)免疫吸附法。所合成的分子印跡聚合物膜對桔霉素具有良好的特異性吸附能力和較快的吸附速度。王倩[42]以桔霉素的結(jié)構(gòu)類似物1,4-萘二甲酸為模板分子,3-氨基丙基三乙氧基硅烷作為功能單體,采用將表面分子印跡技術(shù)與溶膠-凝膠技術(shù)二者相結(jié)合的途徑,合成了能夠較好的識別待測物桔霉素的分子印跡材料。該聚合物對桔霉素具有較高的飽和吸附容量,并且傳質(zhì)速度快,具有很好的實用性。齊云宵[43]用水熱法合成六方相上轉(zhuǎn)換熒光納米材料,合成了對桔霉素有較高選擇性的分子印跡材料,在最優(yōu)條件下合成的熒光分子印跡聚合物,隨桔霉素濃度的增大,聚合物的猝滅程度增大,通過做3種樣品的添加回收實驗,驗證了此檢測方法的可行性。

    2 真菌毒素分子印跡快速檢測技術(shù)研究進展

    隨著人們生活質(zhì)量的提高,對真菌毒素越來越關(guān)注,目前對真菌毒素的檢測技術(shù)也是有很多,鄒淼等[44]利用超高相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對糧油中16種真菌毒素進行了檢測,劉勝利[45]用液相色譜技術(shù)對黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、單端孢霉烯族毒素、伏馬菌素、赭曲霉毒素、雜色曲霉毒素進行了檢測,鄒笑航[46]利用改進的酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA)對黃曲霉毒素B1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮進行了檢測。檢測技術(shù)各有千秋,但是這些檢測技術(shù)的缺點非常明顯,前處理很復(fù)雜,實驗儀器昂貴,實驗成本較高,這就使得這個方法不能對大量樣品進行快速篩查。酶聯(lián)免疫法可以對樣品進行快速篩查,陽性樣本可以進行儀器確證,成本低,可廣泛利用;但是專一性不強,準(zhǔn)確度低[47],所以需要高效、快速、經(jīng)濟、適合大批量檢測的技術(shù)。

    2.1 酶聯(lián)免疫技術(shù)

    免疫親和是利用抗原和抗體之間的高度特異性的親和力來實現(xiàn)目標(biāo)物的分離和純化,有特異型強,選擇性好,富集效率高等特點,王韋崗[48]等建立了一種復(fù)合免疫親和柱-在線光化學(xué)衍生-高效液相色譜同時測定谷物及其制品中9種真菌毒素的檢測方法。該方法具有重現(xiàn)性好、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確的特點,適用于谷物及其制品中9種真菌毒素殘留的分析檢測。鄒沫君[49]等建立了同時測定玉米制品中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的免疫親和柱凈化高效液相色譜方法。該方法具有操作簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性佳等優(yōu)點,適用于同時檢測玉米制品中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮。免疫層析技術(shù)是一種結(jié)合了免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)的檢測分析方法,以膠體金作為標(biāo)記物的層析技術(shù),作為快速檢測試紙條廣泛用于各個領(lǐng)域。沙志聰[50]等構(gòu)建了一種基于量子點標(biāo)記的免疫層析試紙條用于檢測谷物中赭曲霉毒素A的殘留量,通過活化酯法將羧基功能化的量子點(QD)與赭曲霉毒素A多克隆抗體(Ab)偶聯(lián)制備量子點抗體偶聯(lián)物(QD-Ab),該方法操作簡便、檢測快速、結(jié)果準(zhǔn)確靈敏,易于判斷,可以滿足谷物中赭曲霉毒素A殘留量現(xiàn)場快速檢測的要求。適配體是一種良好的抗體代替品,是單鏈DNA或RNA,可以特異性的結(jié)合到目標(biāo)分子上,與抗體相比有顯著的優(yōu)勢,且生產(chǎn)成本低。Shim等[51]報道了一種基于適配體的快速、簡便、現(xiàn)場檢測黃曲霉毒素B1的方法,他們使用一種針對AFB1的生物素修飾的適配體和一種能與該適配體雜交的單一DNA探針 (Cy5)作為熒光材料,分別以鏈霉親和素和抗Cy5抗體,作為實驗區(qū)和控制區(qū),并將其用于被AFB1污染的玉米樣品中,該方法的優(yōu)點是操作簡單,可現(xiàn)場測定,是一種簡便的快檢技術(shù)。Ma等[52]制備一種對AFB1具有該親和特異性的ssDNA序列,通過特異性實驗得到親和性高的AFB1適配體序列,利用AFB1適配體建立了檢測AFB1的熒光生物傳感器,對純品和花生油樣檢測,結(jié)果良好。

    2.2 納米傳感器技術(shù)

    張文剛[53]利用MIPs修飾Mn-ZnS來構(gòu)建磷光納米傳感器(MIP-Mn:ZnS)以檢測蘋果汁中的PAT,本方法的分析結(jié)果與(HPLC)的檢測結(jié)果基本一致,表明方法具有良好的準(zhǔn)確性和可行性。并且此研究構(gòu)建了一種簡單、快速、可行的蘋果汁中展青霉素非免疫磷光檢測方法,可為復(fù)雜食品基質(zhì)中展青霉素的快速檢測提供一定的理論及技術(shù)依據(jù)。Wang等[54]制備了一種基于Ru(bpy)32+(RuSi NPs)的二氧化硅納米顆粒的電化學(xué)傳感器,檢測赭曲霉毒素A的MIP分子,所制備的傳感器對目標(biāo)分子具有很高的靈敏度和選擇性,較低的檢測限,并且成功的應(yīng)用在玉米中檢測赭曲霉毒素A。Yola[55]研究了一種基于納米銀顆粒的分子印跡伏安傳感器,該伏安傳感器應(yīng)用到葡萄汁和葡萄酒中,具有良好的選擇性和回收率。王慶玲[56]將電化學(xué)發(fā)光傳感器與分子印跡技術(shù)相結(jié)合測定玉米中的赭曲霉毒素A,既提高了電致發(fā)光的選擇性,又提高了分子印跡技術(shù)的靈敏度。Magro等[57]合成了一種表面活性磁赤鐵礦納米粒子(SAMNs),利用SAMNs表面三價鐵原子的有效性,在生物機制中識別和磁性去除紅曲中的桔霉素。該納米粒子在水中很穩(wěn)定,沒有任何表面修飾和涂層衍生化,具有選擇性結(jié)合多個生物分子的能力。Shao[58]等將Au@Au-Ag NNSs納米顆粒與Fe3O4MNPs偶聯(lián),用于對赭曲霉毒素A進行檢測,可以明顯的引起拉曼強度的變化。與純金屬納米顆粒相比,Au@Au-Ag NNSs納米顆??捎行г鰪娎盘柗肿拥睦鼜姸龋⑿〉募{米間隙,有助于傳感系統(tǒng)的靈敏度,是一種綠色、簡便、經(jīng)濟的方法。此研究中赭曲霉毒素A的檢測限低至0.004 ng/ml。此方法的優(yōu)點是快速、靈敏、低成本。

    2.3 熒光技術(shù)

    量子點(QDs)是一種半導(dǎo)體納米晶體,是一種新型的半導(dǎo)體熒光材料,具有高量子產(chǎn)率和窄發(fā)射光譜,利用QDs 優(yōu)異的光學(xué)特性,將 QDs 和 MIPs 相結(jié)合制成 QDs@ MIPs可用于分子的光敏化研究,在量子點表面進行分子印跡制備的聚合物具有易成型和高選擇性的特點[59]。閆禎[60]開發(fā)了一種兼具選擇性和熒光信號的分子印跡聚合物,能高選擇、高靈敏地識別痕量赭曲霉毒素A。光纖傳感器是一種將被測物的信號轉(zhuǎn)變成可被測量到的光信號的傳感儀器,它具有體積小、重量輕、靈活性和魯棒性,與建立在芯片上的傳感器相比,將傳感器集成在光纖上并使用易于測量的光學(xué)元件,可以在困難的環(huán)境中進行遠程測試[61]。以赭曲霉毒素A的結(jié)構(gòu)類似物HNA-Phe為模板,3-氨基丙基三乙氧基硅烷為功能單體,合成了對赭曲霉毒素A具有高選擇性的熒光分子印跡聚合物(UCNPs@SiO2@MIPs),此實驗的結(jié)果與HPLC結(jié)果有較好的一致性,所建立的方法準(zhǔn)確可行,并且此方法的優(yōu)點在于不使用大型儀器,操作簡單。樊超[62]基于分子印跡技術(shù)和量子點熒光特性,研究開發(fā)了一種基于離子液體穩(wěn)定CdSe/ZnS量子點的熒光分子印跡聚合物,能高選擇、高靈敏地識別真菌毒素玉米赤霉烯酮。馬慧穎[63]等將量子點表面分子印跡技術(shù)和光纖傳感技術(shù)相結(jié)合制備出熒光猝滅型量子點表面分子印跡傳感器,用于快速高效的檢測大分子、小分子物質(zhì)。該方法的優(yōu)點在于既具備分子印跡技術(shù)優(yōu)越的預(yù)定性、識別性,又兼具光纖傳感器的高穩(wěn)定性、高靈敏性和抗干擾能力。在食品安全中有很大的應(yīng)用前景。

    2.4 拉曼光譜技術(shù)

    拉曼光譜可以定性和定量的測定真菌毒素的化學(xué)官能團及其衍生物,有操作簡單,損耗少,快速,重復(fù)性好,靈敏度高等特點。但常規(guī)的拉曼技術(shù)存在信號弱的問題,所以可以將被檢測物質(zhì)吸附在金、銅、銀或者一些不常用的堿金屬上,來增加信號強度[64]。張晶晶等[65]以青霉素為MIP模板,采用恒電位技術(shù)在玻碳電極表面一步電沉積制備石墨烯-納米金-殼聚糖的分子印跡電化學(xué)傳感器(PG-MIP-rGO/AuNPs/CS),對表面增強拉曼光譜(SERS)性能進行了表征。該傳感器對青霉素的SERS響應(yīng)靈敏,最低檢測限為1.1×10-8mol/L (S/N=3)。同時,制備的分子印跡SERS傳感器可以被成功用于實際環(huán)境水樣中青霉素殘留的測定。

    3 問題與展望

    作為多功能材料,MIPs的模板靈活性及物理穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性比其他檢測技術(shù)突出,因此,MIPs在樣品預(yù)處理、色譜分離、化學(xué)和生物傳感器等領(lǐng)域引起了廣泛的關(guān)注。迄今為止,基于MIPs的各種小分子、蛋白質(zhì)和離子的研究已經(jīng)迅速開展。雖然在真菌毒素的檢測方面應(yīng)用逐漸增加,仍有較多問題有待解決:①新的印跡材料較少,有待開發(fā)新材料。②在真菌毒素的檢測中使用較多的是虛擬模板,這與真正的模板分子存在一定的差別,得到的聚合物可能存在得不到預(yù)期的使用效果。③分子印跡合成的聚合物有一定的不可控性,重現(xiàn)性不好。④分子印跡聚合物中的功能單體與交聯(lián)劑的選擇范圍較少,開展新的功能單體提高MIPs的選擇識別性,提供更高的識別位點,更高的吸附容量。⑤加強分子印跡技術(shù)與傳感器等新技術(shù)的聯(lián)用,與新技術(shù)聯(lián)用后可以彌補單獨使用的缺漏,提高檢測結(jié)果。分子印跡技術(shù)是目前發(fā)展較快的技術(shù)之一,隨著現(xiàn)在科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,相信分子印跡技術(shù)在真菌毒素的檢測方面將發(fā)揮更大的作用。

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