3M PetrifilmTM快速菌落總數(shù)測試片的評價

林 杰，鄭 晶，柯 璐，徐 珊，陳 彬，張溫玲，曾維楊

(福州海關(guān)技術(shù)中心//福建省檢驗檢疫技術(shù)研究重點實驗室，福建 福州 350003)

菌落總數(shù)是用來判定食品被細菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，它反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對被檢樣品作出適當?shù)男l(wèi)生學評價。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣，因此菌落總數(shù)在食品原料、加工過程以及成品的微生物檢驗中作為衛(wèi)生指標菌需要進行監(jiān)測[1-3]。由于商品化測試片方法具有簡便、易于識別菌落、可以節(jié)約大量培養(yǎng)基配制和操作時間，因此近年來得到廣泛應(yīng)用，相關(guān)產(chǎn)品也有不少[4-7]。3M PetrifilmTM快速菌落總數(shù)測試片與國家標準GB 4789.2—2016比較，培養(yǎng)時間從48 h縮短到24 h，能更快出具結(jié)果，以便于更快地判定食品的安全性。為了更加科學規(guī)范的使用測試片，根據(jù)SN/T 3256—2012《食品微生物檢驗方法確認技術(shù)規(guī)范》和SN/T 2775—2011《商品化食品檢測試劑盒評價方法》的要求，對3M PetrifilmTM快速菌落總數(shù)測試片進行評價試驗，評估其在食品中菌落總數(shù)檢測的準確性和適用性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

菌株：弗氏檸檬酸桿菌 ATCC8090、大腸桿菌ATCC8739、金黃色葡萄球菌ATCC6538、蠟樣芽孢桿菌ATCC11778、奇異變形桿菌 ATCC43071，均購自上海漢尼生物技術(shù)有限公司。

試劑：平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基， 3M PetrifilmTM快速菌落總數(shù)測試片，營養(yǎng)肉湯，生理鹽水。

1.2 儀器與設(shè)備

KD-TBC-300M電子天平，福建科迪技術(shù)有限公司；Stomacher3500拍擊式均質(zhì)器，英國SEWARD；恒溫培養(yǎng)箱，德國BINDER。

1.3 方法

1.3.1標準菌株及菌懸液的制備

將標準菌株弗氏檸檬酸桿菌ATCC8090、大腸埃希氏菌ATCC8739、金黃色葡萄球菌ATCC6538、蠟樣芽孢桿菌ATCC11778、奇異變形桿菌 ATCC43071分別復活后，混合接種于營養(yǎng)肉湯中， 37℃混合培養(yǎng) 18～24 h備用。

1.3.22種方法對比線性和準確度

根據(jù)SN/T 3256—2012《食品微生物檢驗方法確認技術(shù)規(guī)范》和SN/T 2775—2011《商品化食品檢測試劑盒評價方法》的要求，選擇5類15種樣品進行試驗。其中選擇8種自然污染樣品進行試驗，另外選擇7種樣品進行人工污染，將1.3.1混合培養(yǎng)液以適當?shù)谋壤♂尯螅锤?、中、?個接種水平添加到樣品中混勻制備成測試樣品，2個水平之間差一個數(shù)量級。每種樣品同時按照3M PetrifilmTM快速菌落總數(shù)測試片方法和GB 4789.2—2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定》進行檢測，自然污染樣品結(jié)果見表1，人工污染樣品結(jié)果見表2。

續(xù)表1

續(xù)表1

表2 7種人工污染樣品兩種方法測試結(jié)果

續(xù)表2

1.3.3測試片耐變性

耐變性是指對同一樣品用一個分析方法，在各種正常檢測條件下進行分析，保證該分析方法的可行性。耐變性評價由以下步驟組成：確定可能影響檢測結(jié)果的因素，對每一種因素稍作改變，采用合適的方法進行耐變性檢驗。對于菌落總數(shù)檢測而言，培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間是2個主要影響因素，因此選用2個污染水平純牛奶樣品對培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間兩個變量進行耐變性試驗，結(jié)果見表5。

1.3.4測試片批間變異

為了驗證測試片的穩(wěn)定性，取3個不同批號測試片對2個污染水平奶粉樣品進行批間變異試驗，結(jié)果見表6。

1.3.5實驗室間協(xié)同試驗

選用牛奶樣品，添加弗氏檸檬酸桿菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、奇異變形桿菌等 5種菌混合培養(yǎng)物，制備成高、中、低3個接種水平的凍干樣品，發(fā)送8家實驗室進行協(xié)同試驗。每一接種水平樣品同時用測試片方法和參考方法進行測試，每一接種水平樣品做5個平行，檢測結(jié)果見表7和表8。

2 結(jié)果和分析

2.1 線性和準確度

微生物學檢測數(shù)據(jù)通常不是正態(tài)分布的，為了獲得更加對稱的分布，所以將計數(shù)結(jié)果轉(zhuǎn)化成對數(shù)形式，比較測試片方法與參考方法的一致性。

對每種食品2種方法的測試結(jié)果作回歸曲線圖，得出線性方程和相關(guān)系數(shù)，以考察測試片方法與參考方法的相關(guān)性。用t檢驗比較2種方法的差異性，結(jié)果見表3。用標準偏差和相對標準偏差考察方法的重復性，結(jié)果見表4 。

表3 線性方程、相關(guān)系數(shù)和t值

表4 重復性分析結(jié)果

續(xù)表4

從表3可見，5類15種食品相關(guān)系數(shù)均大于0.97，t值均小于t0.05(15)=2.131，說明3M PetrifilmTM快速菌落總數(shù)測試片方法和參考方法GB 4789.2—2016無顯著性差異。從表4可見5類15種食品測試片法的標準偏差在0.009～0.093，相對標準偏差在0.25%～5.21%；參考方法的標準偏差在0.008～0.100，相對標準偏差在0.30%～5.67%。兩種方法的標準偏差和相對標準偏差無顯著差異，可以說明3M PetrifilmTM快速菌落總數(shù)測試片方法準確度較高。

2.2 測試片耐變性

耐變性試驗及分析結(jié)果見表5。

表5 耐變性試驗及分析結(jié)果

經(jīng)驗證，培養(yǎng)溫度選擇35℃和37℃，培養(yǎng)時間選擇22 h和26 h對檢測結(jié)果的標準偏差s與在重復性條件下得到的標準偏差s無顯著差異，表明測試片對培養(yǎng)溫度36±1℃和培養(yǎng)時間24±2 h的耐變性范圍不影響檢測結(jié)果。

2.3 測試片批間變異

批間變異試驗及分析結(jié)果見表6。

表6 批間變異試驗及分析結(jié)果

三個不同批號測試片測試結(jié)果的標準偏差s與在重復性條件下得到的標準偏差s沒有明顯差別，說明不同批號產(chǎn)品無顯著差異。

2.4 實驗室間協(xié)同試驗

協(xié)同實驗室內(nèi)重復性分析結(jié)果見表7和表8。

表7 協(xié)同實驗室內(nèi)重復性分析結(jié)果

表8 協(xié)同實驗室間重復性和再現(xiàn)性結(jié)果

經(jīng)柯克倫檢驗剔除離群值后統(tǒng)計協(xié)同實驗室間重復性和再現(xiàn)性[8]，8家實驗室對高、中、低3個接種水平樣品的5個平行測試，結(jié)果2個方法的重復性值r和再現(xiàn)性值R比較接近，說明2種測試方法無顯著差異。

3 結(jié)論

通過5大類15種食品2種檢測方法的比對試驗，重復性結(jié)果和統(tǒng)計t檢驗結(jié)果，以及8家實驗室協(xié)同試驗結(jié)果重復性和再現(xiàn)性分析，均說明3M PetrifilmTM快速菌落總數(shù)測試片和國家標準GB 4789.2—2016在食品檢測上無顯著性差異。耐變性結(jié)果表明，測試片在檢測的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間范圍內(nèi)對檢測結(jié)果沒有影響；批間變異結(jié)果表明不同批號測試片的檢測結(jié)果無顯著差異，說明測試片穩(wěn)定性良好。綜上所述， 3M PetrifilmTM快速菌落總數(shù)測試片檢測結(jié)果準確，產(chǎn)品性能穩(wěn)定，能滿足食品菌落總數(shù)的檢測要求。