基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接探討青龍衣治療白癜風(fēng)的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制

何 婷，王亞楠，王銀潔，謝寶琳，徐 靜，楊麗娟，莫 婷，楊 森，馬 力，高如宏

(1.寧夏回族醫(yī)藥研究所；2.銀川市興慶區(qū)健康教育所；3.銀川市中醫(yī)醫(yī)院，寧夏 銀川 750021；4.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

青龍衣即核桃(JuglansregiaL./JuglansmandshuricaMaxim.)的外果皮，始載于《開寶本草》。青龍衣苦、澀、平，主治脘腹疼痛、泄瀉久痢、癰腫瘡毒、頑癬、禿瘡、白癜風(fēng)等癥[1]。青龍衣治療白癜風(fēng)在古今醫(yī)書中均有記載，《本草綱目》曰：“治白癜風(fēng)：青胡桃皮一個(gè)，硫黃一皂子大。研勻，日日摻之，取效?！被蒯t(yī)藥經(jīng)典著作《回回藥方》也提到：“青胡桃皮，白礬，荊棘樹膠，合用治療渾身紫白癜風(fēng)用。”[2]近代亦有臨床文獻(xiàn)報(bào)道使用青龍衣治療白癜風(fēng)疾病[3-4]。但青龍衣治療白癜風(fēng)的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制并不明確，且未見相關(guān)研究報(bào)道。因此，本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)[5]的方法篩選青龍衣治療白癜風(fēng)的關(guān)鍵活性成分，探討其關(guān)鍵作用靶點(diǎn)和通路，通過分子對(duì)接進(jìn)一步驗(yàn)證關(guān)鍵靶點(diǎn)，初步闡明青龍衣治療白癜風(fēng)的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制，以期為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 青龍衣活性成分篩選

通過中國知網(wǎng)(CNKI)、PubMed等數(shù)據(jù)庫進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，收集青龍衣化學(xué)成分，再利用Pubchem、sci-finder等數(shù)據(jù)庫對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證，構(gòu)建化學(xué)成分庫。用ChemBioDraw Ultar 14.0 將化合物的結(jié)構(gòu)式保存為sdf格式。利用molsof軟件(http：//molsoft.com/mprop/)，得到各成分的ADME 參數(shù)即吸收(Absorption)、分布(Distribution)、代謝(Metabolism)及排泄(Excretion)，參數(shù)包括OB(Oral bioavailability)、DL(Druglikeness)等。由于青龍衣治療白癜風(fēng)為外用劑型，因此以類藥性DL≥0.18[6]作為活性成分篩選條件。

1.2 青龍衣活性成分作用靶點(diǎn)收集

Swiss Target Prediction(http：//www.swiss targetprediction.ch/)是基于小分子化合物結(jié)構(gòu)，從2D及3D結(jié)構(gòu)相似性角度，間接預(yù)測(cè)提交小分子化合物的作用靶點(diǎn)[7]。將“1.1”項(xiàng)下得到的青龍衣活性成分sdf格式導(dǎo)入Swiss target prediction平臺(tái)，設(shè)置種屬為“homo sapiens”，進(jìn)行反向?qū)樱A(yù)測(cè)青龍衣活性成分作用靶點(diǎn)，選取每個(gè)化合物的前15個(gè)靶點(diǎn)[8]。

1.3 白癜風(fēng)疾病相關(guān)靶點(diǎn)收集

以白癜風(fēng)、vitiligo為關(guān)鍵詞，分別從TTD數(shù)據(jù)庫(https：//db.idrblab.org/ttd/)，OMIM數(shù)據(jù)庫(https：//omim.org/)，Genecards數(shù)據(jù)庫(https：//www.genecards.org/)收集白癜風(fēng)疾病相關(guān)靶點(diǎn)。設(shè)定物種為“人類(Homo sapiens)”，去掉重復(fù)后，建立白癜風(fēng)疾病相關(guān)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫。

1.4 蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(Protein-protein interaction network，PPI network)可幫助預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)之間的潛在相互作用，有助于從系統(tǒng)角度研究疾病分子機(jī)制、發(fā)現(xiàn)新藥靶點(diǎn)[9]。STRING 數(shù)據(jù)庫(http：//string-db.org)可評(píng)估、整合蛋白-蛋白之間的相互作用，包括直接和間接關(guān)聯(lián)[10]。為明確青龍衣化學(xué)成分與治療白癜風(fēng)靶點(diǎn)之間潛在的相互作用關(guān)系，將“1.2”項(xiàng)下篩選出的青龍衣活性成分靶點(diǎn)和“1.3”項(xiàng)下篩選出的白癜風(fēng)靶點(diǎn)導(dǎo)入 STRING 數(shù)據(jù)庫，限定物種為人類(Homo sapiens)，設(shè)置較高置信度(High confidence)≥0.70，除去未相互連接的節(jié)點(diǎn)(Node)后，得到靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)圖，保存為TSV格式文件。將TSV導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1中，運(yùn)用CentiScaPe 2.2計(jì)算節(jié)點(diǎn)度值(Degree)，選取度值大于平均值兩倍的靶點(diǎn)作為核心靶點(diǎn)(Hub node)[11]。

1.5 青龍衣治療白癜風(fēng)靶點(diǎn)篩選

將“1.2”項(xiàng)下得到的青龍衣活性成分靶點(diǎn)，與“1.3”項(xiàng)下得到的白癜風(fēng)靶點(diǎn)進(jìn)行交集，作為青龍衣治療白癜風(fēng)的直接靶點(diǎn)。將“1.3”項(xiàng)下白癜風(fēng)靶點(diǎn)與“1.4”項(xiàng)下得到的核心節(jié)點(diǎn)(Hub node)取交集作為間接靶點(diǎn)，合并直接靶點(diǎn)與間接靶點(diǎn)，即得青龍衣治療白癜風(fēng)所有可能的作用靶點(diǎn)，利用Venny2.1.0 軟件，繪制韋恩圖。

1.6 GO功能富集分析

DAVID數(shù)據(jù)庫是強(qiáng)大的基因注釋工具，可通過該數(shù)據(jù)庫發(fā)掘基因與疾病的相關(guān)性，并對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行富集分析[12]。將“1.5”項(xiàng)下得到的青龍衣治療白癜風(fēng)靶點(diǎn)輸入DAVID 6.7數(shù)據(jù)庫(https：//david-d.ncifcrf.gov/summary.jsp)進(jìn)行GO功能富集分析。限定物種為人類(Homo sapiens)，分別選取生物過程(BP)、細(xì)胞組分(CC)、分子功能(MF)以P值升序排列的前10個(gè)富集過程，利用GraphGad Prinsm 7繪制GO 2級(jí)分類柱狀圖[13]。

1.7 青龍衣“關(guān)鍵成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將“1.1”項(xiàng)下得到的青龍衣活性成分和“1.5”項(xiàng)下得到的治療白癜風(fēng)靶點(diǎn)通過Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建“關(guān)鍵成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，并運(yùn)用軟件中的CentiScaPe 2.2進(jìn)行拓?fù)浞治?，?jì)算介數(shù)中心度(Betweenness centrality)，緊密中心度(Closeness centrality)和節(jié)點(diǎn)度值(Degree)，根據(jù)3項(xiàng)數(shù)值，以均大于中位數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)篩選青龍衣治療白癜風(fēng)的關(guān)鍵活性成分和關(guān)鍵作用靶點(diǎn)[14]。

1.8 分子對(duì)接驗(yàn)證

本研究采用薛定諤軟件中Maestro的Glide進(jìn)行對(duì)接。從RCSD PDB (http：//www.rcsb.org/)蛋白數(shù)據(jù)庫搜集靶點(diǎn)的蛋白晶體結(jié)構(gòu)[15]，從PubChem Compound(http：//www.ncbi.nlm.gov)下載靶點(diǎn)化合物的sdf格式，準(zhǔn)備對(duì)接。用Protein Prepare Wizard對(duì)蛋白質(zhì)晶體進(jìn)行預(yù)處理，用LigPrep模塊對(duì)靶點(diǎn)化合物結(jié)構(gòu)優(yōu)化，最后用標(biāo)準(zhǔn)精密(Standard precision，SP)分子對(duì)接，對(duì)接分?jǐn)?shù)(Docking score)絕對(duì)值越大，表示結(jié)合親和力越強(qiáng)[16]。將PDB蛋白晶體結(jié)構(gòu)中已有配體作為陽性對(duì)照，其與相應(yīng)靶點(diǎn)PDB蛋白的對(duì)接分?jǐn)?shù)為截?cái)嘀担蚍指哂诮財(cái)嘀档幕衔飫t認(rèn)為與該蛋白具有較好的結(jié)合親和力。以RMSD<2[17]為閾值評(píng)判對(duì)接方法的合理性。

2 結(jié)果

2.1 青龍衣活性成分篩選

對(duì)數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果進(jìn)行整理，共收集到92個(gè)青龍衣化學(xué)成分，符合“DL≥0.18” 的有79個(gè)即為青龍衣活性成分，主要集中于萘醌類、二芳基庚烷類、多酚類、萜類、黃酮類等化合物。

2.2 青龍衣活性成分作用靶點(diǎn)篩選

將篩選到的活性成分，輸入Swiss Target Prediction 網(wǎng)站進(jìn)行反向?qū)?，去重?fù)后得到342個(gè)活性成分作用靶點(diǎn)。

2.3 白癜風(fēng)疾病靶點(diǎn)篩選

從TTD數(shù)據(jù)庫中得到9個(gè)靶點(diǎn)，OMIM數(shù)據(jù)庫得到1個(gè)靶點(diǎn)，Genecards數(shù)據(jù)庫得到783個(gè)靶點(diǎn)，去重復(fù)后得到790個(gè)白癜風(fēng)疾病靶點(diǎn)。

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)分析

將STRING數(shù)據(jù)庫得到的蛋白相互作用信息導(dǎo)入Cytoscape進(jìn)行拓?fù)浞治?，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與白癜風(fēng)發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的靶蛋白ESR1、EGFR、CXCL8、IL2、JAK2等80個(gè)靶點(diǎn)的度(Degree)值均在中位數(shù)的2倍以上，表明這些蛋白在PPI網(wǎng)絡(luò)中具有關(guān)鍵地位，對(duì)青龍衣治療白癜風(fēng)具有重要意義。

2.5 將青龍衣活性成分對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)與白癜風(fēng)疾病靶點(diǎn)相交集

通過軟件Venny2.1.0映射，得到共有直接靶點(diǎn)47個(gè)。通過STRING數(shù)據(jù)庫進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用分析，共得到89個(gè)核心節(jié)點(diǎn)(Hub node)。將化合物靶點(diǎn)與核心節(jié)點(diǎn)(Hub node)相交集共得到間接靶點(diǎn)32個(gè)，最終確定79個(gè)青龍衣治療白癜風(fēng)潛在作用靶點(diǎn)，繪制維恩圖(見圖1)。

圖1 青龍衣治療白癜風(fēng)的直接與間接作用靶點(diǎn)

2.6 功能注釋與通路分析

通過DAVID數(shù)據(jù)庫，對(duì)青龍衣化學(xué)成分的對(duì)應(yīng)靶基因進(jìn)行GO功能注釋分析(見圖2)。GO結(jié)果顯示79個(gè)潛在靶點(diǎn)主要涉及159個(gè)GO功能，其中生物過程(BP)富集142個(gè)功能過程，主要涉及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)、磷酸鹽代謝過程、氮化合物代謝過程的正調(diào)控等；細(xì)胞組分(CC)相關(guān)的富集過程1個(gè)，為胞漿過程；分子功能(MF)相關(guān)的富集過程15個(gè)，主要涉及腺苷酸結(jié)合、酶結(jié)合、胰島素受體底物結(jié)合一氧化氮合酶調(diào)節(jié)活性、非膜生成蛋白酪氨酸激酶活性、蛋白酪氨酸激酶活性等過程。

注：BP：生物過程；CC：細(xì)胞組分；MF：分子功能。圖2 青龍衣治療白癜風(fēng)關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO富集

2.7 “關(guān)鍵成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

利用Cytoscape對(duì)青龍衣活性成分和治療白癜風(fēng)靶點(diǎn)進(jìn)行拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分析，篩選出關(guān)鍵活性成分21個(gè)，關(guān)鍵靶點(diǎn)27個(gè)(見表1)。

表1 青龍衣治療白癜風(fēng)的關(guān)鍵活性成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)

續(xù)表1

2.8 分子對(duì)接驗(yàn)證

通過文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，BCL2、EGFR、ESR、ACHE、MAOA、PTPN22(表1加粗)這幾個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)與白癲風(fēng)的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，且為目前研究熱點(diǎn)；另外醌類化合物為青龍衣的特征化學(xué)成分，其含量也較高，可能為青龍衣的藥效成分，故選擇6個(gè)醌類關(guān)鍵活性成分與以上靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。各個(gè)靶點(diǎn)PDB蛋白與對(duì)應(yīng)關(guān)鍵活性成分的分子對(duì)接得分見表2。

表2 關(guān)鍵活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)的對(duì)接得分

2.8.1 ESR1靶點(diǎn)與關(guān)鍵活性成分分子對(duì)接 結(jié)果顯示，ESR1與1,3-二羥基-2-甲氧基蒽醌、1,3-二羥基蒽醌、1-甲基-3,8-二羥基-6-甲氧基蒽醌的對(duì)接得分優(yōu)于配體(見表2)，且均與ESR1的殘基GLU353和LEU387形成氫鍵相互連接，說明化合物與靶點(diǎn)之間有較強(qiáng)的活性，ESR1可能是這3個(gè)關(guān)鍵活性成分的作用靶點(diǎn)。見圖3、圖4、圖5。

圖3 1,3-二羥基-2-甲氧基蒽醌與ESR1活性位點(diǎn)對(duì)接的3D(a)和2D(b)

圖4 1,3-二羥基蒽醌與ESR1活性位點(diǎn)對(duì)接的3D(a)和2D(b)

圖5 1-甲基-3,8-二羥基-6-甲氧基蒽醌與ESR1活性位點(diǎn)對(duì)接的3D(a)和2D(b)

2.8.2 MAOA與關(guān)鍵活性成分分子對(duì)接 結(jié)果顯示，MAOA與胡桃醌以及2,3-二甲基-5-羥基-1,4-萘醌的對(duì)接得分優(yōu)于配體(見表2)，且均通過氫鍵與MAOA殘基ASN181相互作用，說明MAOA可能是這兩個(gè)關(guān)鍵活性成分的作用靶點(diǎn)。見圖6、圖7。

圖6 2,3-二甲基-5-羥基-1,4-萘醌與MAOA活性位點(diǎn)對(duì)接的3D(a)和2D(b)

圖7 胡桃醌與MAOA活性位點(diǎn)對(duì)接的3D(a)和2D(b)

2.8.3 PTPN22與關(guān)鍵活性成分的分子對(duì)接 結(jié)果顯示，PTPN22與胡桃醌以及2,3-二氫-5-羥基-1,4-萘醌的對(duì)接得分優(yōu)于配體(見表2)，且均通過pi-pi共軛與PTPN22殘基ARG233相連接，PTPN22殘基ARG233、ALA229與CYS231相互作用形成氫鍵，pi-pi共軛連接和氫鍵連接增強(qiáng)了化合物與靶點(diǎn)蛋白的穩(wěn)定性，提高了彼此之間的結(jié)合親和力，PTPN22可能是這兩個(gè)關(guān)鍵活性成分的作用靶點(diǎn)。見圖8、圖9。

圖8 2,3-二氫-5-羥基-1,4-萘醌與PTPN22活性位點(diǎn)對(duì)接3D(a)和2D(b)

圖9 胡桃醌與PTPN22活性位點(diǎn)對(duì)接的3D(a)和2D(b)

2.8.4 BCL2與關(guān)鍵活性成分分子對(duì)接 結(jié)果顯示，BCL2與1,3-二羥基-2-甲氧基蒽醌和1,3-二羥基蒽醌的對(duì)接得分均優(yōu)于配體(見表2)，且均通過pi-pi共軛與BCL2殘基PHE63相連接，通過氫鍵與BCL2殘基ASP70相連接，BCL2可能是這兩個(gè)關(guān)鍵活性成分的作用靶點(diǎn)。見圖10、圖11。

圖10 1,3-二羥基-2-甲氧基蒽醌與BCL2活性位點(diǎn)對(duì)接的3D(a)和2D(b)

2.8.5 EGFR和ACHE與關(guān)鍵活性成分分子對(duì)接 結(jié)果顯示，1,3-二羥基-2-甲氧基蒽醌、1,3-二羥基蒽醌、1-甲基-3,8-二羥基-6-甲氧基蒽醌與EGFR的對(duì)接得分低于配體(見表2)，說明化合物與靶點(diǎn)之間的活性較弱，這3個(gè)關(guān)鍵活性成分的作用靶點(diǎn)可能不是EGFR。同理，2,3-二甲基-5-羥基-1,4-萘醌和2,3-二氫-5-羥基-1,4-萘醌這兩個(gè)關(guān)鍵活性成分的作用靶點(diǎn)也可能不是ACHE。

3 討論

白癜風(fēng)是由于某些不明原因造成黑色素細(xì)胞損傷，自表皮脫失而形成的白斑。其發(fā)病率約為1%～2%，該病治愈率低且復(fù)發(fā)率高，是世界公認(rèn)的疑難頑癥。迄今為止，其病因及發(fā)病機(jī)理尚未闡明[18-19]。青龍衣治療白癜風(fēng)歷史悠久且臨床效果較好，本研究對(duì)其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制進(jìn)行探究，初步得到21個(gè)關(guān)鍵活性成分和27個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，這些關(guān)鍵活性成分主要為二芳基庚烷類、醌類衍生物和黃酮類化學(xué)成分。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果顯示，關(guān)鍵活性成分主要作用于ESR1、BCL2、PTPN22、MAOA、EGFR、ACHE等靶點(diǎn)，這些靶點(diǎn)涉及白癜風(fēng)相關(guān)的多種病理因素，如遺傳、神經(jīng)內(nèi)分泌、氧化應(yīng)激、炎癥、凋亡等。

白癜風(fēng)患者ESR1基因內(nèi)含子1C/T 等位基因與正常人有顯著性差異[20]。有學(xué)者應(yīng)用含有雌激素的類固醇-甲狀腺激素混合物可成功治療白癜風(fēng)[21]。雌激素受體1(ESR1，Estrogen Receptor 1)是青龍衣治療白癜風(fēng)關(guān)鍵靶點(diǎn)中綜合評(píng)分最高的一個(gè)靶點(diǎn)(Degree=17)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果顯示青龍衣中的1-羥基-6-甲基蒽醌、1,3-二羥基蒽醌、核桃素A、核桃素C等9個(gè)化合物均可能作用于此靶點(diǎn)。分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了1,3-二羥基-2-甲氧基蒽醌、1,3-二羥基蒽醌、1-甲基-3,8-二羥基-6-甲氧基蒽醌對(duì)ESR1的作用活性。

乙酰膽堿酯酶(Acetyl cholinesterase，ACHE)是生物神經(jīng)傳導(dǎo)中的一種關(guān)鍵性酶。白癜風(fēng)患者表皮中存在ACHE，且活性降低，ACHE的減少導(dǎo)致乙酰膽堿ACh增加，ACh能抑制多巴氧化酶活性，進(jìn)而抑制黑色素生成，從而加重白癜風(fēng)患者表皮黑色素脫失[22]。在B16F10小鼠黑色素瘤細(xì)胞的黑色素生成過程中，也觀察到ACHE水平顯著降低[23]。另有學(xué)者認(rèn)為，ACHE通過氧化應(yīng)激途徑誘導(dǎo)細(xì)胞色素脫失[24]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果顯示，青龍衣中的2,3-二甲基-5-羥基-1,4-萘醌、2,3-二氫-5-羥基-1,4-萘醌、楓楊素等10個(gè)化合物均可能作用于此靶點(diǎn)，分子對(duì)接結(jié)果表明篩選的化合物可能與此靶點(diǎn)作用不強(qiáng)。

單胺氧化酶(Monoamine oxidase A，MAOA)是一種參與多巴胺降解的酶。多巴胺已被證明對(duì)黑素細(xì)胞有毒性，白癜風(fēng)患者的多巴胺水平表達(dá)升高。研究[25]發(fā)現(xiàn)，在活躍期白癜風(fēng)患者的皮損部位，MAOA的mRNA水平和蛋白水平均顯著增加。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果顯示，青龍衣中的2,3-二甲基-5-羥基-1,4-萘醌、4-甲氧基-5-羥基-1-四氫萘酮、胡桃醌、槲皮苷、芹菜素5個(gè)化合物可能作用于此靶點(diǎn)。分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了胡桃醌、2,3-二甲基-5-羥基-1,4-萘醌對(duì)MAOA的作用活性。

蛋白酪氨酸磷酸酶非受體22型(Protein tyrosine phosphatase non-receptor type 22，PTPN22)代表了自身免疫性疾病的候選基因[26]。研究[27-28]發(fā)現(xiàn)，PTPN22基因中的單核苷酸多態(tài)性是白癜風(fēng)的易感因素，PTPN22+1858C/T等位基因在白癜風(fēng)患者中出現(xiàn)的頻率顯著高于正常對(duì)照，認(rèn)為是罹患白癜風(fēng)的危險(xiǎn)因素。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果顯示，青龍衣中的胡桃醌、2,3-二氫-5-羥基-1,4-萘醌、對(duì)苯二酚等可能作用于此靶基因。分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了胡桃醌、2,3-二氫-5-羥基-1,4-萘醌對(duì)PTPN22的作用活性。

研究表明，白癜風(fēng)皮損黑素細(xì)胞減少或消失的機(jī)制之一可能為細(xì)胞凋亡[29]，有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，白癜風(fēng)非白斑區(qū)黑素細(xì)胞凋亡增加的同時(shí)，抗凋亡因子BCL2的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平也隨之上調(diào)，可能為代償性保護(hù)性調(diào)節(jié)反應(yīng)[30]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果顯示，青龍衣中的1,3-二羥基-2-甲氧基蒽醌、1,3-二羥基蒽醌、大黃素可能作用于BCL2靶點(diǎn)，分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了1,3-二羥基-2-甲氧基蒽醌和1,3-二羥基蒽醌對(duì)BCL2的作用活性。

綜上，白癲風(fēng)發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，青龍衣治療白癲風(fēng)療效確切，但其作用機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，限制了其應(yīng)用，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法，對(duì)青龍衣治療白癜風(fēng)多成分、多靶點(diǎn)作用方式進(jìn)行了系統(tǒng)研究，借助分子對(duì)接技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，初步預(yù)測(cè)了其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與作用靶點(diǎn)。青龍衣中主要特征成分醌類成分胡桃醌、1,3-二羥基-2-甲氧基蒽醌、1,3-二羥基蒽醌、1-甲基-3,8-二羥基-6-甲氧基蒽醌、2,3-二甲基-5-羥基-1,4-萘醌、2,3-二氫-5-羥基-1,4-萘醌是青龍衣治療白癲風(fēng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，其作用靶點(diǎn)可能為ESR1、MAOA，PTPN22，BCL2，其作用機(jī)制可能是增加雌激素釋放，降低多巴胺水平，抑制蛋白酪氨酸磷酸酶非受體22型，抑制細(xì)胞凋亡。該研究可為青龍衣治療白癜風(fēng)的后續(xù)研究，以及開發(fā)治療白癜風(fēng)的藥物提供依據(jù)。