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    一種簡(jiǎn)易改良細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)在胸腹腔積液患者診斷與治療中的應(yīng)用價(jià)值

    2021-12-21 15:49:40白菊萍張菊梅
    甘肅科技縱橫 2021年10期
    關(guān)鍵詞:靶向治療

    白菊萍 張菊梅

    【摘要】目的:探索細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)在胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法:選取我院老年性胸腹腔積液標(biāo)本129例作為研究對(duì)象,均進(jìn)行常規(guī)涂片、液基細(xì)胞學(xué)制片、細(xì)胞蠟塊制作石蠟切片,經(jīng)染色后進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。結(jié)果:改良細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)操作流程簡(jiǎn)單,不需要特殊設(shè)備,且能夠有效提升胸腹腔積液惡性細(xì)胞檢出率及細(xì)胞學(xué)檢查的應(yīng)用范圍,此次研究胸腹腔積液標(biāo)本129例,經(jīng)細(xì)胞學(xué)檢查良性病變91例(70.5%),轉(zhuǎn)移性腫瘤35例(27.2%),原發(fā)性腫瘤3例(2.3%)。結(jié)論:胸腹腔積液細(xì)胞蠟塊技術(shù)避免了傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)涂片檢查的局限性,通過細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)的實(shí)施,使細(xì)胞蠟塊成為細(xì)胞學(xué)檢查通向組織病理及分子病理的橋梁,為臨床疾病的診斷和治療提供更多可靠依據(jù)。

    【關(guān)鍵詞】 ?胸腹腔積液 ?脫落細(xì)胞學(xué) ?細(xì)胞蠟塊制作 細(xì)胞免疫化學(xué) ?靶向治療

    中圖分類號(hào):R561.3

    胸腹腔積液是晚期或復(fù)發(fā)惡性腫瘤的嚴(yán)重并發(fā)癥之一[1],也是許多惡性腫瘤及一些良性病變的常見臨床表現(xiàn)[2],對(duì)于伴發(fā)胸腹腔積液的惡性腫瘤來說,胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查關(guān)系到腫瘤的分型、分期、治療方案的選擇和預(yù)后判斷等,同時(shí)對(duì)胸腹腔積液中檢出的惡性腫瘤細(xì)胞可進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)和藥物敏感基因檢測(cè)等[3]。胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查,可以初步判定疾病的性質(zhì),具有簡(jiǎn)便易行,患者痛苦少,不需要特殊設(shè)備等優(yōu)點(diǎn),是胸腹腔積液患者診斷及鑒別診斷的重要手段之一。隨著微創(chuàng)無創(chuàng)診療及免疫組化、分子生物學(xué)等精準(zhǔn)施治技術(shù)的發(fā)展,細(xì)胞學(xué)檢查在胸腹腔積液患者疾病診斷、鑒別診斷、判斷轉(zhuǎn)移性腫瘤的組織來源以及為患者提供靶向治療依據(jù)等應(yīng)用中越來越凸顯其重要性[4],但常規(guī)胸腹腔積液細(xì)胞涂片檢查的陽性率普遍偏低,加之傳統(tǒng)方法涂片因細(xì)胞堆積、分布不均、含紅細(xì)胞多、惡性細(xì)胞量少[5],且無法保存有效的診斷細(xì)胞成分,繼而無法進(jìn)行疾病診斷、鑒別診斷及免疫靶向治療所需要的細(xì)胞免疫化學(xué)、特殊染色、分子基因檢測(cè)等,給胸腹腔腫瘤性積液疾病的診斷及鑒別診斷帶來了不少困擾,限制了胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查在臨床中的廣泛應(yīng)用。胸腹腔積液細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)就是將送檢的胸腹腔積液,通過技術(shù)流程的處理,制作成細(xì)胞蠟塊,將其細(xì)胞成分保存于蠟塊中,從而將細(xì)胞蠟塊進(jìn)行常規(guī)石蠟切片、HE染色、細(xì)胞免疫化學(xué)染色、特殊染色,靶向藥物敏感基因檢測(cè)等檢查,判斷胸腹腔積液中細(xì)胞的性質(zhì)、類型,達(dá)到對(duì)腫瘤細(xì)胞精確診斷的技術(shù)。經(jīng)過大量臨床病例的探索研究,分析總結(jié)了一種高效、快速、操作流程簡(jiǎn)單的細(xì)胞蠟塊制作技術(shù),現(xiàn)將技術(shù)要點(diǎn)及操作流程介紹如下:

    1一般資料與方法

    1.1一般資料

    選取我院2019年9月—2020年8月送檢的老年性胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查的樣本共129例作為研究對(duì)象。年齡55—85歲,男性患者73例,女性患者56例,男女之比約為1.3:1。

    1.2主要技術(shù)流程及方法

    1.2.1標(biāo)本送檢量

    建議臨床盡可能抽取100mL以上的胸腹腔積液送檢,如果抽取的樣本量少于100mL,則應(yīng)全部送檢。

    1.2.2送檢時(shí)間的要求

    胸腹腔積液離體后半小時(shí)內(nèi)送檢到相關(guān)檢查科室處理,如暫時(shí)不能送檢應(yīng)將標(biāo)本冷藏于1-4℃冰箱內(nèi),但冷藏時(shí)間不應(yīng)超過24 h。

    1.2.3存放送檢樣本容器的要求

    建議存放于硬質(zhì)不吸水密閉潔凈容器(推薦使用鹽水瓶),不建議使用軟質(zhì)引流袋存放及送檢。

    1.2.4 抗凝與預(yù)固定

    通常不需要抗凝和預(yù)固定處理,但若要長(zhǎng)距離轉(zhuǎn)送或隔日處理則建議使用10%0.106mol/L枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑抗凝,并采用50% 酒精與漿膜腔積液1:1混合預(yù)固定。

    1.2.5細(xì)胞蠟塊制作流程與方法

    (1)將送檢的胸腹腔積液標(biāo)本靜止放置20~30 min待自然沉降后,傾去或吸除上清液,留底部液體約100mL進(jìn)行離心處理,(每份樣本用1~2支離心管),推薦使用具有自動(dòng)平衡功能的垂直離心機(jī)。同時(shí)吸取沉淀物進(jìn)行常規(guī)涂片及液基細(xì)胞學(xué)制片經(jīng)巴氏染色或HE染色后做對(duì)照,如圖1、圖2所示。

    (2)離心管建議用50~100 mL一次性尖底離心管進(jìn)行離心處理,初次離心用2500~3000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速離心5min(高轉(zhuǎn)速,短時(shí)間);如果沉淀物少可重復(fù)離心(2000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速),離心5 min;如果沉淀物血液含量大于沉淀物的1/2時(shí),建議使用清洗步驟,(即使用1%冰醋酸酒精液處理,并進(jìn)行第二次離心沉淀,如圖3所示。

    (3)離心沉淀完成后,用吸管將上清液吸除,只留沉淀物于離心管底部,然后向離心管沉淀物中加入10%中性福爾馬林液30~50mL,放置振蕩器上輕輕振蕩混勻。

    (4)然后將混勻后的沉淀物低速離心(800~1000轉(zhuǎn)/分)15~20min后,取出離心管放樣本架上靜止固定2 h以上。

    (5)待常規(guī)取材時(shí)用長(zhǎng)把小勺從離心管中取出細(xì)胞團(tuán)塊(如果體積較小,需用濾紙包裹),放入包埋盒,如圖4所示,與當(dāng)日取材后的組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)脫水后制片、閱片。

    (6)對(duì)閱片中細(xì)胞學(xué)檢出惡性細(xì)胞或可疑惡性細(xì)胞的切片,用相應(yīng)的細(xì)胞蠟塊切片做細(xì)胞免疫化學(xué)染色、特殊染色或切取細(xì)胞蠟塊組織進(jìn)行分子病理或靶向基因檢測(cè)。細(xì)胞蠟塊切片HE染色效果如圖5所示,細(xì)胞免疫化學(xué)染色效果如圖6所示,(各種染色及分子、靶向基因檢測(cè)具體操作方法不在此敘述)。

    3研究結(jié)果

    (1) 129例老年性胸腹腔積液經(jīng)細(xì)胞學(xué)檢查良性病變91例(70.5%),轉(zhuǎn)移性腫瘤35例(27.2%)原發(fā)性腫瘤3例(2.3%),檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)見表1。

    (2) 35例惡性胸腹腔積液經(jīng)免疫組化染色腫瘤分型結(jié)果統(tǒng)計(jì)見表2。

    4討論

    細(xì)胞蠟塊是進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué),特殊染色,分子病理及未來研究等檢查的有效檢材,與傳統(tǒng)涂片聯(lián)合使用可以提高檢測(cè)的敏感性和特異性[6],此項(xiàng)技術(shù)制作細(xì)胞蠟塊流程簡(jiǎn)單,方法可靠,不需要特殊設(shè)備就能有效提高胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查的陽性率和準(zhǔn)確性,對(duì)檢出的惡性腫瘤細(xì)胞不但能夠做到準(zhǔn)確分型,而且能夠?yàn)榛颊邆€(gè)體化治療提供精準(zhǔn)的檢測(cè)依據(jù)。

    與傳統(tǒng)細(xì)胞涂片檢查相比具有以下重要臨床意義:(1)增加了目標(biāo)細(xì)胞的數(shù)量、密度,并能使目標(biāo)細(xì)胞得到有效保存,既能重復(fù)多次切片檢查,又能輔助腫瘤性積液免疫細(xì)胞化學(xué),特殊染色等檢測(cè),有效提高了胸腹腔積液患者腫瘤性疾病診斷的陽性率。(2)對(duì)檢出的腫瘤性積液通過免疫細(xì)胞化學(xué)、特殊染色等檢查對(duì)腫瘤細(xì)胞類型能夠做到準(zhǔn)確分型,為腫瘤患者精準(zhǔn)化治療提供更多參考依據(jù)。目前胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)的制片方法有傳統(tǒng)手工涂片、液基細(xì)胞學(xué)制片、細(xì)胞學(xué)印片等技術(shù)[7],都存在陽性率低和無法進(jìn)行后續(xù)的輔助診斷檢查等諸多弊端,通過此方法將胸腹腔積液標(biāo)本制作成細(xì)胞蠟塊,有效彌補(bǔ)了細(xì)胞學(xué)檢查的不足,大大提高了胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查的陽性率和應(yīng)用范圍,為惡性腫瘤患者提供更為準(zhǔn)確,有效的診斷及治療依據(jù),值得在癌癥防治工作及臨床醫(yī)療機(jī)構(gòu)中大力推廣使用。

    參考文獻(xiàn)

    [1]隋燕霞,柳雨,蔣娜,等.142例惡性胸水細(xì)胞蠟塊的免疫組化檢測(cè)及分子病理檢測(cè)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2017,33(3):292-296.

    [2] 嚴(yán)俊,江鶯,許惠利.恩度治療惡性胸腹腔積液的研究進(jìn)展[J].實(shí)用癌癥學(xué)雜志,2012,27(5):538-539,5.

    [3]羅闊,陳曉品.腫瘤靶向治療的新型細(xì)胞載體分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2014,11(4):524-525.

    [4]梁飛,姜敏,德真一等.胸腹腔積液細(xì)胞蠟塊在腫瘤來源診斷及肺腺癌基因檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊,2019,46(1):10-13.

    [5]劉華軍,鄭奎海.胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢查涂片方法的改進(jìn)[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè)),2012,14(12):263.

    [6] 黃榕芳,何誠(chéng),朱偉峰.細(xì)胞蠟塊技術(shù)與傳統(tǒng)涂片技術(shù)在胸腔積液病理診斷中的應(yīng)用效果比較[J].福建醫(yī)藥雜志,2016,38(02):94-96.

    [7]范紅蕓,韓燁,王貝,等.細(xì)胞蠟塊對(duì)惡性胸腹水的診斷價(jià)值[J].中外醫(yī)療,2019,38(21):34-36.

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