甘肅地區(qū)回、漢族新生兒苯丙酮尿癥和先天性甲低篩查指標(biāo)切割值研究

王興 郝勝菊 劉芙蓉 李婕 孫小紅

摘要：目的探討甘肅地區(qū)回、漢族新生兒苯丙酮尿癥（phenylketonuria，PKU）和先天性甲狀腺功能低下（Congenital hypothyroidism，CH）篩查中苯丙氨酸（Phenylalanine，PHE）和促甲狀腺激素（Thyrotropin，TSH）檢測(cè)指標(biāo)切割值。方法收集2020年1月～2020年12月間，甘肅省新篩中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行新生兒疾病篩查的回族新生兒檢測(cè)數(shù)據(jù)，并隨機(jī)抽取部分漢族新生兒檢測(cè)數(shù)據(jù)作對(duì)照，用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析兩族新生兒疾病篩查數(shù)據(jù)的差異性，采用百分位數(shù)法建立各自檢測(cè)指標(biāo)的切割值。結(jié)果共篩查17916例回族新生兒樣本和抽取20000例漢族新生兒樣本，PHE和TSH檢測(cè)數(shù)據(jù)均呈非正態(tài)分布;經(jīng)Mann-Whitney U檢驗(yàn)提示回、漢族新生兒群體的PHE、TSH濃度檢測(cè)值存在差異（P<0.05）;PHE、TSH兩指標(biāo)切割值在回、漢族新生兒群體中分別為2.18mg/dl、8.26μu/ml和1.93mg/dl、9.77μu/ml。結(jié)論新生兒疾病篩查指標(biāo)PHE、TSH的切割值在回、漢族新生兒群體中存在差異性，應(yīng)建立不同民族群體的切割值。

關(guān)鍵詞： 甘肅地區(qū);新生兒疾病篩查;切割值

中圖分類號(hào)：R722.11

新生兒兩病篩查是我國(guó)出生缺陷三級(jí)預(yù)防的重要重要環(huán)節(jié)，通過(guò)對(duì)新生兒干血斑樣本PHE和TSH指標(biāo)的檢測(cè)，篩查出群體中PKU和CH患兒，以實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早治療，降低疾病致殘率的目的[1、2]。篩查指標(biāo)切割值的建立，意在確保陽(yáng)性患兒檢出的同時(shí)降低假陽(yáng)性率，以達(dá)到衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)效率的最大化。國(guó)內(nèi)大多數(shù)省市新篩中心實(shí)驗(yàn)室已根據(jù)當(dāng)?shù)厝巳旱臋z測(cè)數(shù)據(jù)建立了篩查指標(biāo)切割值[3]，但因我國(guó)民族眾多，各民族間存在遺傳、生活習(xí)慣背景的差異性，因此篩查實(shí)驗(yàn)室建立轄區(qū)內(nèi)各民族群體的篩查指標(biāo)切割值可為新生兒疾病篩查提供更加精準(zhǔn)的指導(dǎo)意見(jiàn)。

對(duì)象和方法

1.1 ?研究對(duì)象：收集2020年1月～2020年12月間，甘肅地區(qū)各地州市送往省新篩中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行新生兒疾病篩查的回族新生兒樣本，并隨機(jī)抽取同期漢族新生兒樣本作對(duì)照。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)省新篩中心醫(yī)務(wù)人員審核，符合《新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范》[2]要求采集送檢的17916例回族新生兒初篩樣本和20000例漢族新生兒樣本。

1.2 ?方法

1.2.1 ?樣本采集和發(fā)送：樣本采自出生72h并充分哺乳的新生兒足跟血，專用濾紙片收集3個(gè)直徑大于8mm血斑，室溫下自然晾干，2℃～6℃存放，一周內(nèi)送至甘肅省新生兒疾病篩查中心。

1.2.2 ?儀器與試劑：使用的儀器均采自PerkinElmer公司，全自動(dòng)打孔器Wallac DBS Puncher 9、GSP分析儀、Wallac 1420VIC-TOR分析儀，PHE檢測(cè)使用芬蘭雷勃公司PHE熒光檢測(cè)試劑盒、TSH檢測(cè)使用GSP分析儀配套TSH檢測(cè)試劑盒。

1.2.3 ?方法：（1）PHE檢測(cè)：①取樣，用打孔器打取直徑3.2mm的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣品血斑置于96孔萃取板內(nèi);②萃取，各孔加入80%乙醇80μl，室溫下1000r/min振蕩萃取30min;③移板，每孔吸取50μl萃取液移至試劑盒內(nèi)自帶96孔反應(yīng)白板，加入反應(yīng)混合液50μl（琥珀酸緩沖液：氨基酸熒光增強(qiáng)液：茚三酮試劑=5：1：2，現(xiàn)用現(xiàn)配）室溫振蕩混勻1min;④孵育，放入60℃恒溫孵育箱孵育反應(yīng)60min;⑤加銅試劑，每孔加入4℃銅試劑200μl，室溫靜置15min;⑥上機(jī)檢測(cè)，在15min內(nèi)用Wallac 1420VIC-TOR分析儀進(jìn)行檢測(cè)（激發(fā)波長(zhǎng)390nm，發(fā)射波長(zhǎng)485nm），其熒光強(qiáng)度與苯丙氨酸濃度（mg/dL）成正比。（2）TSH檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照GSP分析儀和試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備，用全自動(dòng)打孔器打取直徑3.2mm的質(zhì)控品和待測(cè)樣品血斑置于試劑盒自帶的96孔U型底萃取板中，上機(jī)自動(dòng)檢測(cè)。

1.2.4 ?質(zhì)量控制：每一個(gè)反應(yīng)板都帶有PerkinElmer公司提供的室內(nèi)質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3 ?結(jié)果判斷：檢測(cè)指標(biāo)Phe濃度≥2 mg/dl為PAH初篩陽(yáng)性，Tsh濃度≥8μu/ml為CH初篩陽(yáng)性。

1.4 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行檢驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)分析，百分位數(shù)法確立切割值;兩組數(shù)據(jù)間比較，根據(jù)數(shù)據(jù)分布情況選擇T檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn)，P<0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

2.1 PHE、TSH篩查結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)PHE、TSH篩查數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性分布檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示兩指標(biāo)數(shù)據(jù)均呈非正態(tài)分布。經(jīng)Mann-Whitney U檢驗(yàn)提示PHE、TSH兩個(gè)檢測(cè)指標(biāo)在17916例回族新生兒和20000例漢族新生兒群體中存在差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PPHE=0.000;PTSH=0.005）。

2.2 回、漢族新生兒干血斑樣本PHE、TSH篩查指標(biāo)切割值

因篩查數(shù)據(jù)為非正態(tài)分布，采用百分位數(shù)法統(tǒng)計(jì)回、漢族新生兒干血斑樣本PHE、TSH篩查指標(biāo)切割值，兩個(gè)檢測(cè)指標(biāo)的均值、中位數(shù)、上限P95、P97.5、P99具體情況如下（表1）。

2.3 不同切割值初篩陽(yáng)性率比較

本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行PHE、TSH切割值分別為2mg/dl、8μu/ml，將篩查數(shù)據(jù)百分位數(shù)的99%作為新切割值，即回族新生兒為2.18mg/dl、8.26μu/ml，漢族新生兒為1.93mg/dl、9.77μu/ml，對(duì)比不同切割值情況下原樣本篩查的初篩陽(yáng)性病例（表2）。根據(jù)篩查樣本隨訪結(jié)果顯示，在本文統(tǒng)計(jì)的P99切割值下尚未發(fā)現(xiàn)漏篩患兒。

3討論

新生兒疾病篩查是降低出生缺陷的有效途徑，我國(guó)于1994年頒布《中華人民共和國(guó)母嬰保健法》將新生兒PKU和CH篩查列入國(guó)家法規(guī)，推進(jìn)這兩種疾病在新生兒中的篩查工作，并取得良好效果[4]。甘肅省地處我國(guó)西北地區(qū)，新生兒篩查工作起步較晚，2009年才在省內(nèi)實(shí)現(xiàn)全面開(kāi)展新生兒PKU和CH篩查工作。經(jīng)過(guò)近十余年的發(fā)展，從新篩普及率到疾病篩查種類均有了大幅提升[5-7]。

根據(jù)王治國(guó)團(tuán)隊(duì)關(guān)于臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間驗(yàn)證的建議[8]，各實(shí)驗(yàn)室因結(jié)合當(dāng)?shù)厝巳禾攸c(diǎn)，建立適合當(dāng)?shù)鼐歪t(yī)人群的正常參考范圍。同時(shí)，國(guó)內(nèi)多個(gè)學(xué)者還根據(jù)季節(jié)、孕周、采血時(shí)間等不同因素探討了對(duì)新篩項(xiàng)目切割值的影響[9-12]。本實(shí)驗(yàn)室作為省新篩中心篩查實(shí)驗(yàn)室，承擔(dān)著全省大部分新篩工作，隨著篩查技術(shù)不斷提升，已建立本省新生兒群體各項(xiàng)篩查項(xiàng)目的正常參考范圍和切割值[13-15]，但尚無(wú)對(duì)新生兒群體按照民族進(jìn)行篩查項(xiàng)目的切割值研究。本文對(duì)2020年送往甘肅省新篩中心實(shí)驗(yàn)室的回族新篩樣本和同期抽調(diào)的漢族樣本進(jìn)行比較研究，兩族新生兒群體在PHE和TSH兩項(xiàng)指標(biāo)的篩查數(shù)據(jù)中存在差異性，提示在新篩工作中有必要建立各自的切割值。由于篩查數(shù)據(jù)呈非正態(tài)性分布，采用99%百分位數(shù)建立回、漢族新生兒群體PHE和TSH切割值，分別為2.18mg/dl、8.26μu/ml和1.93mg/dl、9.77μu/ml。在新設(shè)立的切割值中僅漢族新生兒PHE切割值較現(xiàn)行切割值有所降低，對(duì)原篩查結(jié)果按新切割值進(jìn)行重新評(píng)估，初篩陽(yáng)性新生兒由1052例下降到761例，且未出現(xiàn)漏篩病例，說(shuō)明新的切割值具有可行性。

綜上所述，回族作為甘肅地區(qū)主要的少數(shù)民族，在新生兒疾病篩查群體中占有較大比例，因新生兒群體遺傳背景的差異性，建立各族群篩查項(xiàng)目的切割值可為新生兒疾病篩查工作提供更精準(zhǔn)的指導(dǎo)，降低假陽(yáng)性率，提高公共衛(wèi)生效率。

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