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    劍葉龍血樹組織培養(yǎng)與快速繁殖的研究

    2021-12-13 04:57:43劉玉杰
    科技信息 2021年6期
    關(guān)鍵詞:快速繁殖組織培養(yǎng)

    劉玉杰

    摘要:用劍葉龍血樹的腋芽、頂芽或莖段作外植體,構(gòu)建了劍葉龍血樹組織培養(yǎng)再生體系。試驗(yàn)結(jié)果如下:劍葉龍血樹腋芽、頂芽或莖段誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L,誘導(dǎo)率達(dá)95%;選擇MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L的蔗糖+8g/L瓊脂培養(yǎng)基有利于芽的分化和增殖,在1/2MS+NAA 0.2mg/L+IBA0.4mg/L+活性炭的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根效果最好。

    關(guān)鍵詞:劍葉龍血樹;組織培養(yǎng);快速繁殖

    劍葉龍血樹(Dracaena cochinchinensis)是百合科龍血樹屬植物。莖粗大,分枝多,樹皮灰白色,光滑,葉聚生在莖、分枝或小枝頂端,花序軸密生乳突狀短柔毛,花絲扁平,莖部有紅棕色疣點(diǎn);花柱細(xì)長(zhǎng)。龍血竭為劍葉龍血樹的樹脂類藥材,是我國(guó)的傳統(tǒng)名貴中藥,內(nèi)服可以活血化瘀,止痛,主要用于治療冠心病、腦梗死等血栓性疾病;外用能止血,生肌斂瘡,主要用于各種皮膚或粘膜疾患。為了獲得更多的劍葉龍血樹的資源,我們采用組織培養(yǎng)的快速繁殖方法,可以很好的解決這個(gè)問(wèn)題,各種資料報(bào)道的組織培養(yǎng)方法[1-3],多數(shù)以海南龍血樹為材料,我們研究的主要對(duì)象是劍葉龍血樹,看是否也有同樣的效果。

    1 材料和方法

    1.1 外植體來(lái)源:

    實(shí)驗(yàn)材料劍葉龍血樹采自廣西憑祥,并在云南昆明移栽成活。在取龍血樹的外植體之前,先對(duì)龍血樹的整棵植株進(jìn)行消毒處理,方法是用1g/L的70%甲基托布津可濕性粉劑水溶液進(jìn)行噴灑,每隔3天噴一次,看到植株及盆土淋濕為止,連續(xù)噴灑3次。選取接種材料為優(yōu)良的腋芽或頂芽和莖段作為外植體。

    1.2 外植體的消毒

    外植體采集前控制水分、淋殺菌劑的預(yù)處理方法可降低材料的污染率,提高誘導(dǎo)的成功率。把取來(lái)的外植體在自來(lái)水上沖洗干凈后,在加有少量洗潔精的水中浸泡5min,自來(lái)水沖洗20min,再用75%的乙醇浸泡30s,隨后用無(wú)菌水沖洗3-4次,再放在飽和漂白粉水中消毒10min,無(wú)菌水沖洗4-5次;最后在0.1%升汞中消毒4min,用無(wú)菌水沖洗5次。在無(wú)菌條件下,借助手術(shù)刀,將消過(guò)毒的材料(用無(wú)菌濾紙吸干水分),切成0.5cm大小備用。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 MS培養(yǎng)基的配方與配制方法:

    在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,大量元素:KNO3、NH4NO3、MgSO47H20、KH2PO4、CaCl22H2O,大量元素按照擴(kuò)大20倍來(lái)配制母液。微量元素:MnSO44H20、ZnSO4 7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO42H2O、CuSO45H2O、CoCl26H2O,微量元素母液擴(kuò)大100倍。鐵鹽:Na2 -EDTA 、FeSO47H2O;有機(jī)物質(zhì):肌醇、甘氨酸、鹽酸硫胺素(VB1)、鹽酸吡哆醇(VB6),鐵鹽和有機(jī)物質(zhì)也是按照擴(kuò)大100倍來(lái)配制母液。

    1.3.2 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的配制:

    6-BA(母液):濃度為1mg/mL(溶于少量1mol/L鹽酸后以蒸餾水定容);NAA(母液):濃度為1mg/mL(先用少量95%乙醇溶解后以蒸餾水定容)。

    1.3.3 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制:

    分別取擴(kuò)大20倍的大量元素母液50ml,擴(kuò)大100倍的微量元素10ml,鐵鹽母液10ml,有機(jī)物質(zhì)母液10ml,6-BA母液3ml,NAA母液0.5ml,蔗糖20g,瓊脂8g,把馬鈴薯削皮切成小塊放在鍋里煮爛后,連同汁一起和上述物質(zhì)全部混合配制成1000ml的誘導(dǎo)培養(yǎng)基,煮沸后分裝滅菌。無(wú)菌檢測(cè)后,把外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

    1.3.4 芽體的增殖培養(yǎng)基以及壯芽培養(yǎng)基的篩選

    以從誘導(dǎo)培養(yǎng)基上長(zhǎng)出來(lái)的芽作近一步增殖繼代培養(yǎng)篩選試驗(yàn)的材料,選用基本培養(yǎng)基MS,分別加上濃度為0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mg/L的細(xì)胞分裂素6-BA和濃度為0.2mg/L 的NAA,蔗糖30g/L,共6種處理;放在(25士2)℃的培養(yǎng)室中培養(yǎng),每天光照10h,光照強(qiáng)度為1500-2500lx。培養(yǎng)28天后觀察試驗(yàn)結(jié)果,查看分化出芽的總數(shù)、生長(zhǎng)反應(yīng)情況。

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析討論

    2.1 初代培養(yǎng)

    把消過(guò)毒后的材料接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,外植體培養(yǎng)15天后,外植體邊緣開始萌動(dòng)出現(xiàn)愈傷組織,長(zhǎng)勢(shì)快;初代培養(yǎng)30天后愈傷組織為顆粒狀,繼續(xù)培養(yǎng),顆粒狀的組織最終形成叢生的小芽。將叢生的小芽和嫩綠色的愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的配方為:MS十6-BA 3.0 mg /L + NAA 0.5 mg/L的培養(yǎng)基。

    2.2 增值、繼代培養(yǎng)基篩選結(jié)果

    經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論,培養(yǎng)基中添加不同濃度的6-BA對(duì)芽的增殖影響很大,同時(shí)還影響芽的分化、增殖、伸長(zhǎng)和生長(zhǎng)。隨著濃度升高增殖倍數(shù)也在增加,芽的長(zhǎng)度則表現(xiàn)為隨濃度升高而降低。當(dāng)6-BA增加的濃度達(dá)到一定值,如達(dá)到2.5mg/L時(shí),芽的生長(zhǎng)開始表現(xiàn)不正常,部分出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。從表2的試驗(yàn)數(shù)據(jù),我們可以看到,在接種芽數(shù)一定的情況下,隨著6-BA濃度的增加,增殖芽樹在不斷的增加,增殖的倍數(shù)也在增加,但是平均的芽長(zhǎng)在逐漸的減少。最后,從總體的情況看,我們選擇2號(hào)培養(yǎng)基做為繼代培養(yǎng)基效果最好,在該培養(yǎng)基中培養(yǎng)出來(lái)的苗芽伸長(zhǎng)快,并且有一定的增值倍數(shù)。5號(hào)培養(yǎng)基為增殖培養(yǎng)基,因?yàn)樵谠撆囵B(yǎng)基中培養(yǎng)出來(lái)的苗芽生長(zhǎng)情況和增值倍數(shù)高。

    2.3 根誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選結(jié)果

    以1/2 MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,分別加入NAA0.5 mg/L、IBA 0-1.0 mg/L的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,將增殖獲得的叢生芽剪切成約2cm的莖段,接種于6種不同生根培養(yǎng)基上,每種培養(yǎng)基各接種20瓶,每瓶接種10株。接種約4周開始生根,30天后統(tǒng)計(jì)芽苗出根情況。以上培養(yǎng)基都添加蔗糖30.0 g/L,瓊脂0.8% ,活性炭0.1%, pH 5.5。

    經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出結(jié)論,僅添加NAA的培養(yǎng)基上,根較細(xì),出根早,植株生長(zhǎng)較弱,在一定濃度NAA條件下,隨著IBA濃度的不斷升高從0.2 mg/L到0.6 mg/L,根變粗壯、根量變多,且植株生長(zhǎng)健壯;隨著IBA濃度的進(jìn)一步提高到1.0 mg/L,根的生長(zhǎng)被抑制,根數(shù)降低,植株生長(zhǎng)也一般。因此,從試驗(yàn)結(jié)果可以看出,劍葉龍血樹的最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+ IBA 0.4 mg/L +NAA 0.5 mg/L生根率達(dá)100.0%。

    3、結(jié)論

    通過(guò)用劍葉龍血樹的頂芽或腋芽、莖段作外植體,建立了劍葉龍血樹的組織培養(yǎng)和再生體系。結(jié)果表明:劍葉龍血樹腋芽、頂芽或莖段誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L,誘導(dǎo)率達(dá)95%。選擇MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L的蔗糖+8g/L瓊脂培養(yǎng)基有利于壯芽;選擇MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L的蔗糖+8g/L瓊脂培養(yǎng)基有利于芽增殖繼代;培養(yǎng)45d左右,每個(gè)外植體分化形成的再生小植株數(shù)達(dá)8~20個(gè);在1/2MS+ IBA0.4mg/L + NAA0.2mg/L +活性炭0.1%的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根效果最好。

    參考文獻(xiàn):

    [1]靳靜晨,卜媚,羅雪楓,陳雄進(jìn),譚家壯.A tissue culture technique for rapid propagation of Dracaena cambodiana Pierre ex Gagnep.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2019.41(8):755-757.

    [2]何旭君,劉善輝,馮遠(yuǎn)來(lái) 林曉萍,張華通.海南龍血樹組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究.廣東林業(yè)科技,2016,22(1):22-25

    [3]吳繁花 朱文麗 莫饒 符常明.海南龍血樹的組織培養(yǎng).植物生理學(xué)通訊,2015,41(2):186-187.

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