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    紅顏草莓的離體培養(yǎng)與快速繁殖

    2016-01-27 14:39:25李慧
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年11期
    關(guān)鍵詞:快速繁殖草莓

    摘要:以紅顏草莓的莖尖作為外植體,研究了外植體的消毒方法、激素組合對(duì)其離體培養(yǎng)與快速繁殖的影響。結(jié)果表明,幼莖段在0.1%氯化汞+3滴吐溫-80溶液中浸泡5 min滅菌效果最好;莖尖以0.35 mm大小為宜;誘導(dǎo)叢生芽的最適培養(yǎng)基為:MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;誘導(dǎo)試管苗生根的最適培養(yǎng)基為:1/2MS+0.1 mg/L IBA。

    關(guān)鍵詞:草莓;離體培養(yǎng);不定芽;快速繁殖

    中圖分類號(hào): S668.404+.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號(hào):1002-1302(2015)11-0066-03

    收稿日期:2015-04-14

    基金項(xiàng)目:2014年江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程(編號(hào):SXGC[2014]141)。

    作者簡(jiǎn)介:李慧(1971—),女,江蘇宿遷人,碩士,教授,主要從事園藝作物的組織培養(yǎng)研究。E-mail:lihui710623@163.com。紅顏又稱日本99、紅頰,是日本靜岡縣用章姬與幸香雜交育成的早熟草莓栽培品種。葉片大、新莖分枝多,結(jié)果能力強(qiáng),果實(shí)品質(zhì)好,果粒個(gè)大,果形、果色、價(jià)格明顯優(yōu)于豐香草莓。是春節(jié)前后集采摘、鮮食為一體的休閑旅游消費(fèi)農(nóng)產(chǎn)品,深受廣大果農(nóng)和顧客的喜愛。但是,紅顏草莓苗不抗白粉病,不易育苗,幼苗一旦染病,幾天內(nèi)將全軍覆沒。因此,試管苗的繁育將有很大的市場(chǎng)前景。

    1材料與方法

    1.1材料

    試驗(yàn)于2014年12月至2015年4月進(jìn)行。供試材料紅顏草莓苗引自淮安怡園果蔬種植專業(yè)合作社(實(shí)生苗2014年9月栽植在江蘇聯(lián)合職業(yè)技術(shù)學(xué)院淮安生物工程分院花卉實(shí)訓(xùn)中心的無土栽培槽內(nèi))。

    1.2試驗(yàn)方法

    1.2.1表面滅菌試驗(yàn)于晴天的下午取供試紅顏草莓剛抽出的匍匐莖的幼莖段(母株要健壯、無病),流水沖洗泥土、灰塵。在無菌條件下,先用75%乙醇浸泡20~30 s,無菌水沖洗3~4次,再轉(zhuǎn)入0.1%氯化汞溶液+2滴吐溫-80分別浸泡8、5、4、2 min,無菌水沖洗5~8次。在以上的過程中要不斷搖動(dòng),以去除附在外植體表面的氣泡。用消毒濾紙吸干水珠后,將莖尖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,調(diào)整pH值至5.6~5.8。每個(gè)滅菌處理各接種50瓶,1個(gè)外植體/瓶,20 d后觀察記錄外植體的污染、死亡、無菌成活生長(zhǎng)等情況。

    1.2.2莖尖分化能力試驗(yàn)取“1.2.1”節(jié)試驗(yàn)最佳處理,在雙目顯微解剖鏡下剝?nèi)グ陀兹~,將莖尖接種于MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培養(yǎng)基中[1]。接種外植體1個(gè)/瓶,30 d后觀察記錄莖尖分化情況。

    1.2.3芽誘導(dǎo)試驗(yàn)取“1.2.2”節(jié)試驗(yàn)中最佳的莖尖剝制處理分別接種于以0.5 mg/L 6-BA為基礎(chǔ)的附加不同種類生長(zhǎng)素(0.2 mg/L)配成的培養(yǎng)基、以0.2 mg/L NAA為基礎(chǔ)的附加不同種類生長(zhǎng)素及細(xì)胞分裂素(0.5 mg/L)配成的培養(yǎng)基中[2],每個(gè)處理各接種30瓶,1個(gè)外植體/瓶,30 d后開始調(diào)查記錄幼芽分化情況。

    1.2.4繼代培養(yǎng)與擴(kuò)大繁殖將長(zhǎng)至1~2 cm的叢生芽每4~6株切成1塊,轉(zhuǎn)入不同濃度配比的6-BA和NAA配成的繼代培養(yǎng)基中。每種處理接種20瓶,4塊/瓶,培養(yǎng)20 d后統(tǒng)計(jì)每瓶幼苗數(shù)量,并計(jì)算出增殖率。

    1.2.5根誘導(dǎo)試驗(yàn)用1/2MS附加不同濃度(mg/L)IBA,有0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L及不加IBA的5個(gè)處理,接入幼苗3周后觀察記錄根的生長(zhǎng)情況。

    培養(yǎng)基均加3%蔗糖,在1.0~1.1大氣壓下熱壓滅菌20 min。培養(yǎng)溫度(25±2) ℃。每日光照12 h,光照度2 000 lx 。

    2結(jié)果與分析

    2.1不同消毒劑對(duì)紅顏幼莖滅菌的效果

    在草莓組織培養(yǎng)中常用滅菌劑的種類很多。我們?cè)眠^次氯酸鈉10%水溶液(含有效氯0.4%~0.5%),浸泡接種材料10~15 min;次氯酸鈣(漂白粉),用其飽和上清液,浸泡接種材料15~30 min;過氧化氫10%~12%水溶液,浸泡10~20 min ;新潔爾滅5%~10%水溶液,浸泡10~15 min;氯化汞0.1%水溶液,浸泡8~10 min。其中,前4種滅菌劑對(duì)接種材料比較安全,不會(huì)使活組織中毒死亡,但因滅菌時(shí)間較長(zhǎng),常常使接種材料的外層氧化變褐,影響培養(yǎng)效果。氯化汞有很強(qiáng)的殺菌能力,但浸泡時(shí)間稍長(zhǎng)會(huì)造成接種材料中毒。即使在氯化汞處理完后,用無菌水沖洗7~8次,仍然有少量殘留在外植體上,導(dǎo)致外植體死亡。

    用0.1%氯化汞溶液浸泡處理5 min,外植體染菌率為0,成活率為78%;4 min浸泡莖段,外植體總?cè)揪蕿?8%,死亡7個(gè);當(dāng)莖段浸泡2 min后,外植體死亡數(shù)為3個(gè),但總?cè)揪矢哌_(dá)56%(表1)。

    觀察中發(fā)現(xiàn)4種處理外植體在接種1周內(nèi)都有不同程度褐化現(xiàn)象并導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢,10 d后成活的外植體褐化現(xiàn)象消失(圖1、圖2)。這可能是因?yàn)槭褂靡掖歼M(jìn)行表面消毒時(shí),乙醇毒害所致。

    2.2不同大小的莖尖對(duì)形態(tài)發(fā)生能力的影響

    剝制后的紅顏莖尖接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,7 d后開始膨大,并在外植體表面產(chǎn)生愈傷組織,20 d后部分愈傷組織上可形成幼芽。從表2可以看出,小于或等于0.1 mm的莖尖,無形態(tài)發(fā)生能力;當(dāng)莖尖達(dá)0.2 mm時(shí),只有有限的生長(zhǎng);莖尖大小達(dá)0.35 mm,帶有最后1對(duì)較大的葉原基,而沒有頂端下組織時(shí),莖尖的分化率最高;如果切取0.5 mm的莖尖,發(fā)現(xiàn)莖尖直接形成單株苗,形成愈傷組織的百分率顯著下降。

    2.4不同濃度6-BA和NAA對(duì)幼苗增殖的影響

    增殖培養(yǎng)基的篩選中,附加6-BA 0.5 mg/L分化反應(yīng)正常,雖然在相同的時(shí)間里新芽分化量相對(duì)較少,而長(zhǎng)成正常幼苗的數(shù)量卻明顯較多。當(dāng)6-BA濃度超過1.0 mg/L時(shí),新芽分化量很大,也都能長(zhǎng)出葉片,只是葉片簇生在一起成球狀,不能長(zhǎng)成正常幼苗(表5)。從表5可以看出,2號(hào)培養(yǎng)基對(duì)幼苗增殖的生長(zhǎng)分化最為有利。

    此外,轉(zhuǎn)苗過程中去掉原生葉片有利于新苗分化,在擴(kuò)大繁殖中剔除愈傷組織,有利于新苗增殖和生長(zhǎng)。

    2.5不同濃度IBA對(duì)試管苗生根的影響

    從表6可以看出,以IBA 0.1 mg/L濃度處理的生根率最高,為100%,平均根條數(shù)為2.3條。不加IBA及IBA超過02 mg/L,多數(shù)苗都是先于苗基切口處產(chǎn)生愈傷組織,隨后在愈傷組織上分化生根。當(dāng)生根苗移出栽植后,苗基的愈傷組織很快干死,使苗與根間形成了1個(gè)隔離層,成活率大大降低。

    3討論

    本試驗(yàn)以紅顏草莓為供試材料,研究其莖尖經(jīng)脫分化后多數(shù)為愈傷組織上生根 0.50愈傷組織上生根 注:不同處理參試苗為150個(gè),培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

    誘導(dǎo)不定芽發(fā)生的因子,旨在提高草莓不定芽發(fā)生率。在植物離體形態(tài)發(fā)生中,影響器官分化的因素很多,但以植物激素的調(diào)控為主[3-6]。不同植物種類,控制其不定芽發(fā)生的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類、濃度以及它們之間的組合不同,本試驗(yàn)中為BA與NAA的不同濃度組合。從不定芽發(fā)生的動(dòng)態(tài)觀察中可知,不定芽發(fā)生高峰期集中在接種后20~40 d的時(shí)間段內(nèi),50 d以后再生的不定芽,其芽體弱小,生長(zhǎng)速度慢。這可能是由于隨著時(shí)間的延長(zhǎng),培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)消耗大;同時(shí),外植體自身分泌物的積累限制了不定芽的分化及生長(zhǎng),也可能與愈傷組織內(nèi)某些生理生化物質(zhì)的積累有關(guān)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]李慧. 草莓莖尖離體培養(yǎng)研究[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2004(2):10-12.

    [2]李慧,吳松,孫其文,等. 顛茄的離體培養(yǎng)與快速繁殖研究[J]. 北方園藝,2007(12):192-194.

    [3]張寧寧,夏明霞,張瓊,等. 卡特蘭組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(4):42-44.

    [4]李林軒,韋瑩,黃浩,等. 紅芽大戟組織培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(4):60-62.

    [5]譚文澄,戴策剛. 觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M]. 北京:中國(guó)林業(yè)出版社,1991.

    [6]王菲彬,王斐,管玲玲,等. 植物激素對(duì)東方百合試管苗鱗片分化不定芽的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(6):53-55.樊琛,徐旺燁,李丹丹,等. PCR方法檢測(cè)大腸桿菌iss基因的缺陷及改進(jìn)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(11:69-70.

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