散痹腦力寶中肉桂醛、丁香酚的薄層色譜鑒別及梔子苷HPLC含量測定

祁峰 陳蘇依勒 布音 額爾敦巴圖 蘇日嘎

摘要：目的 提高散痹腦力寶的質(zhì)量標準。方法 采用薄層色譜法鑒別處方中的肉桂醛及丁香酚，采用高效液相色譜法測定處方中梔子苷的含量。結(jié)果 色譜斑點清晰，無明顯干擾斑點，梔子苷回收率含量為98%～103%。結(jié)論 實驗所用方法可以用于控制散痹腦力寶的質(zhì)量。

關鍵詞：質(zhì)量控制;薄層鑒別;梔子苷;含量測定

【中圖分類號】R927?【文獻標識碼】B?【文章編號】1673-9026（2021）13-01

引言：散痹腦力寶為阿拉善盟蒙醫(yī)醫(yī)院（阿拉善盟蒙醫(yī)藥研究所）常用院內(nèi)制劑，由山沉香、梔子、肉桂、丁香等二十九味藥組成。主要用于“黑脈病”，“白脈病”，“薩病”，肌肉痙攣，經(jīng)絡不暢，筋脈拘攣，風濕痹痛，關節(jié)伸屈不利等癥。為此，本文采用薄層色譜法對方中肉桂的主要成分肉桂醛和丁香的主要成分丁香酚進行實驗，采用HPLC法測定了該方中梔子的有效成分梔子苷的含量。取得了較為滿意的結(jié)果，具體實驗如下：

1.儀器與試藥

1.1儀器：島津LC-20型高效液相色譜儀，MettlerToledo XS-205型十萬分之一天平，MettlerToledo XP-6型百萬分之一天平。

1.2試劑與試藥：桂皮醛對照品（批號：110710-201016）中國食品藥品檢定研究院，丁香酚對照品（批號：110725-200711）中國食品藥品檢定研究院，梔子苷對照品（批號：110749-201115，供含量測定用）中國食品藥品檢定研究院;硅膠G薄層層析板（批號：130708）天津思利達色譜技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn);散痹腦力寶（批號：20150508-054，20151103-089，20160225-017）由阿拉善盟蒙醫(yī)醫(yī)院（阿拉善盟蒙醫(yī)藥研究所）提供;乙腈為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2薄層色譜的鑒別[1]

2.1肉桂醛的鑒別[2]取三批散痹腦力寶供試品及陰性樣品各2.3g，加乙醇20ml，冷浸20分鐘，時時振搖，濾過，濾液蒸干，殘渣加1ml乙醇作為供試品溶液。另取桂皮醛對照品，加乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取供試品溶液2～5μl、對照品溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（17∶3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾（（圖1A和圖1B））。

2.2丁香酚的鑒別[3]取三批散痹腦力寶供試品及陰性樣品各1.6g，加乙醚10ml，振搖數(shù)分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加0.5ml乙醚作為供試品溶液。另取丁香酚對照品，加乙醚制成每1ml含16μ1的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性樣品無干擾（圖1C和圖1D）。

3高效液相色譜法[4]測定含量

3.1色譜條件的選擇：ODS-SP C-18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相：乙腈-水（15：85）;238nm;流速：1.0ml/min;柱溫：30℃;理論板數(shù)按梔子苷峰計算，應不低于1500。

3.2供試品溶液及對照品溶液的制備

3.2.1供試品溶液及陰性對照溶液的制備：取供試品粉末0.8g，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理（功率250W，頻率20kHz）20分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。取按處方比例并以相同工藝制備的缺梔子的陰性對照供試品，按供試品溶液制備法制得陰性對照溶液。

3.2.2對照品溶液的制備：取梔子苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。

3.3專屬性實驗

按“3.1”項色譜條件分別測定，梔子苷分離效果好，陰性對照色譜圖中在與梔子苷對照品以及供試品色譜圖中相對應的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其它組分對胡椒堿的測定無干擾（圖2）。

3.4線性關系考察

精密稱定梔子苷對照品3.734mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.2233679?g、0.3722798?g、0.52119172?g、0.67010364、0.8190156?g進樣，進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對進樣量進行回歸分析，結(jié)果梔子苷在0.2234～0.8190?g范圍內(nèi)呈良好的線性關系，回歸方程為：y=2E+06x-1441.8，R?=0.9999。標準曲線數(shù)據(jù)見表1。

3.5穩(wěn)定性實驗

取同一份供試品溶液，按“3.1”項色譜條件，分別在0h、4h、8h、12h、24h進行測定，結(jié)果梔子苷在24小時內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。

3.6精密度實驗

分別精密吸取10ul梔子苷對照溶液，重復進樣5次，測得梔子苷對照品峰面積的RSD=0.12%（n=5），表明系統(tǒng)精密度良好。

3.7重復性實驗

取同一供試品內(nèi)容物6份，各約0.8g，精密稱定，分別按“3.2.1”項下方法操作，測定每份含量，計算得供試品中梔子苷的平均含量2.515mg·g-1，RSD=1.90%（n=6）;表明該方法的重復性良好。

3.8加樣回收實驗

分別精密稱定已知梔子苷含量的供試品6份，各約0.4g，精密稱定，置50ml棕色量瓶中，加入甲醇40ml，加入精密稱定梔子苷對照品0.8006mg、0.8036mg、1.6052mg、1.6002mg、2.4038mg、2.3948mg，定容至刻度，按“3.1”項色譜條件測定每份供試品含量。結(jié)果表明：梔子苷的平均回收率為100.67%，RSD=1.78%（n=6）

3.9樣品含量測定

取本品按“3.1”“3.2”項下的方法處理，三批供試品的測定結(jié)果見表2。

4小結(jié)

散痹腦力寶由山沉香、梔子、肉桂、丁香等二十九味藥組成。肉桂醛、丁香酚的薄層鑒別較好，可納入薄層鑒別質(zhì)控標準。對蓽撥進行薄層鑒別時，陰性樣品有干擾，可能與其含有的生物堿類化合物過多有關，故文中未進行深入探討。文中梔子苷含量測定的方法重現(xiàn)性好、專屬性強，可為該藥的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)，也可為含梔子類蒙成藥制劑的定量分析提供參考。

參考文獻：

[1] 中華人民共和國藥典（第四部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020.59-60.

[2] 中華人民共和國藥典中藥材薄層色譜彩色圖集（第一冊）[S].北京：人名衛(wèi)生出版社，2009.251-253.

[3]中華人民共和國藥典中藥材薄層色譜彩色圖集（第三冊）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2019.82-85.

[4]中華人民共和國藥典（第四部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020.61-65.

基金項目：紅花益肝丸和散痹腦力寶兩種蒙藥制劑質(zhì)量標準項目[編號2021-（MB025）]

作者簡介：祁峰，1993年4月9日，男，蒙古族，出生于內(nèi)蒙古阿拉善盟阿拉善左旗，2016年9月畢業(yè)于中南民族大學，藥物制劑專業(yè)，獲工學學士學位。2017年1月工作于阿拉善盟蒙醫(yī)醫(yī)院（阿拉善蒙醫(yī)藥研究所）制劑中心。2019年任制劑中心藥品質(zhì)量檢查室主任。在職期間參與自治區(qū)級課題一項，盟級課題一項，其中盟級課題蒙藥扶正膏治療白細胞減少癥的臨床療效及應用研究被收入自治區(qū)科技局項目庫中。