山慈菇的化學成分研究

司函瑞，陳小玲，付東興，王園園，李平亞※，鐘淑霞※

（1.吉林大學藥學院，吉林長春130021；2.吉林大學第一附屬醫(yī)院，吉林長春130021）

蘭科植物杜鵑蘭[Cremastra appendiculata（D.Don）Makino]的干燥假鱗莖是藥材山慈菇的基源之一[1]。山慈菇主要產(chǎn)于山西、甘肅、長江流域及長江流域以南，多生長于海拔900～3 600 m的山坡林下和溪邊陰濕地。近年來，我國秦嶺淮河以南地區(qū)人們將其用于煲湯和泡茶，其化學成分主要有菲類、聯(lián)芐類和有機酸類等[2]，具有降壓、抗菌和抗腫瘤等功效，臨床上多有應用，是一種重要的藥材。本文從山慈菇80%乙醇的提取物中分離得到15個化合物，分別鑒定為正三十二烷醇（Ⅰ）、麥角甾醇（Ⅱ）、5-羥甲基糖醛（Ⅲ）、羊毛甾（Ⅳ）、沒食子酸（Ⅴ）、shancigusinⅠ（Ⅵ）、天麻素（Ⅶ）、1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基芐基）-4-甲基-2-異丁基蘋果酸（Ⅷ）、1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基芐基）-4-乙基-2-異丁基蘋果酸、5'-methoxyisolariciresinol-9'-O--D-xylopyranoside（Ⅹ）、山藥素Ⅲ（Ⅺ）、-谷甾醇（Ⅻ）、葛根素（XIII）、芥子酸（XIV）和木犀草素（XV），其中化合物Ⅱ、Ⅹ和XIII為首次從杜鵑蘭屬中分離得到，化合物Ⅱ、Ⅹ、XIII和XIV為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

見表1。

表1 實驗儀器及試劑Table 1 Experimental equipments and reagents

2 提取與分離

將藥材山慈菇干燥后稱取4.5 kg，用80%乙醇加熱回流3次，每次2 h，合并提取液，回收溶劑后得浸膏390.1 g。將浸膏用水分散開，分別用石油醚、乙酸乙酯和水飽和正丁醇萃取。合并各萃取液，回收試劑后得各萃取層稠膏：石油醚層18.9 g、乙酸乙酯層37.2 g、正丁醇層80.1 g。石油醚層稠膏反復經(jīng)正相硅膠柱色譜，石油醚:丙酮（50:1、30:1、20:1、15:1、10:1）梯度洗脫，TLC跟蹤各柱色譜流分后合并得到Fr.A。Fr.A經(jīng)正相硅膠色譜柱洗脫得化合物Ⅰ（3.7 mg）和化合物Ⅱ（9.3 mg）。乙酸乙酯層稠膏經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮系統(tǒng)（50:1、30:1、10:1、5:1、0:1）和二氯-甲醇系統(tǒng)（10:1、5:1、1:1）梯度洗脫得到12個組分Fr.B～Fr.M,Fr.B用ODS反相硅膠柱色譜和重結(jié)晶技術得到化合物Ⅲ（4.7 mg）、Ⅳ（7.2 mg）、Ⅴ（2.9 mg），F(xiàn)r.D用正相硅膠得到化合物Ⅵ（9.2 mg）、Ⅶ（8.6 mg），F(xiàn)r.E經(jīng)正相硅膠和半制備液相得到化合物Ⅷ（5.6 mg）、Ⅸ（6.4 mg）。Fr.G經(jīng)Sephadex LH-20得到化合物Ⅹ（7.9 mg）。Fr.K經(jīng)半制備液相和重結(jié)晶等技術得到化合物Ⅺ（16mg）、Ⅻ（26.4 mg）。正丁醇層稠膏經(jīng)大孔樹脂D101以乙醇-水（30:1、60:1、90:1、1:0）梯度洗脫得到4個組分Fr.N～Fr.Q，F(xiàn)r.N經(jīng)過ODS反相和半制備液相得到化合物XIII（4.7 mg）、XIV（5.2 mg），F(xiàn)r.Q經(jīng)過Sephadex LH-20和半制備液相得到XV（6.3 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,CDCl3）3.64（2 H,t,J=6.8Hz,H-1）,1.58（2H,m,H-2）,1.27（58H,brs,H-3～H-31）,0.89（3H,t,J=6.8Hz,H-32）;13C-NMR（150MHz,CDCl3）:63.07（C-1）,32.74（C-2）,31.92（C-3）,29.69,29.44,29.35,25.75（C-4～C-30）,22.68（C-31）,14.09（C-32），以上波譜數(shù)據(jù)與文獻[3]報道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅰ為正三十二烷醇。

化合物Ⅱ，白色針晶（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,DMSO-d6）:5.56（1H,d,J=4.8Hz,H-6）,5.38（1H,m,J=4.8Hz,H-7）,5.19（2H,m,H-22,H-23）,3.61（1H,m,H-3）,1.04（3H,d,J=6.6Hz,H-21）,0.94（3H,s,H-19）,0.91（3H,d,J=6.8Hz,H-26）,0.84（3H,d,J=6.8Hz,H-28）,0.82（3H,d,J=5.6Hz,H-27）,0.63（3H,s,H-18）;13C-NMR（150MHz,DMSO-d6）:140.93（C-8）,140.66（C-5）,134.85（C-22）,132.25（C-23）,119.11（C-6）,116.65（C-7）,70.59（C-3）,55.90（C-17）,54.94（C-14）,45.61（C-9）,42.33（C-24）42.15（C-13）,38.78（C-12）,37.30（C-1）,37.05（C-10）,33.82（C-25）,32.19（C-2）,28.27（C-16）,23.08（C-15）,21.07（C-11）,20.84（C-21）,20.20（C-26）,19.77（C-27）,17.12（C-28）,16.81（C-19）,12.16（C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]報道數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定化合物Ⅱ為麥角甾醇。

化合物Ⅲ，棕色油狀物（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:9.54（1H,s,H-5）7.42（1H,d,J=3.6Hz,H-2）,6.60(1H,d,J=3.6Hz,H-3）,4.53（2H,s,CH2O）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:179.91（CHO-）,162.23（C-5）,153.82（C-2）,124.79（C-3）,110.82（C-4）,57.69（CH2）。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅲ為5-羥甲基糠醛。

化合物Ⅳ，白色針晶（石油醚-丙酮）。1H-NMR（600 MHz,CDCl3）:5.12（1H,t,J=7.0Hz,H-24）3.23（1H,m,H-3）,1.71（3H,s,H-27）,1.60（3H,s,H-26）,1.01（3H,s,H-29）,0.99（3H,s,H-19）,0.93（3H,d,J=6.7 Hz,H-20）,0.91（3H,s,H-28）,0.83（3H,s,H-18）,0.71（3H,s,H-30）;13C-NMR（150MHz,CDCl3）:134.78（C-8）,134.45（C-9）,130.26（C-25）,125.96（C-24）,79.05（C-3）,52.28（C-17）,48.10（C-5）,47.26（C-14）,35.65（C-1）,32.91（C-12）,30.40（C-15）,28.14（C-16）,26.50（C-2）,26.01（C-7）,25.44（C-26）,21.12（C-11）,19.32（C-19）,18.01（C-21）,15.00（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅳ為羊毛甾醇。

化合物Ⅴ，無色結(jié)晶（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.06（2H,s,H-3,H-7）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:167.45（C-1）,146.40（C-4,C-6）,137.97（C-5）,120.42（C-2）,108.70（C-2,C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅴ為沒食子酸。

化合物Ⅵ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.64（1H,d,J=16.0 Hz,H-7）,7.53（2H,d,J=8.2 Hz,H-2,H-6）,7.34（2H,d,J=8.2 Hz,H-2',H-6'）,7.10（4H,d,J=8.2 Hz,H-3,H-5,H-3',H-5'）,6.40（1H,d,J=16.0 Hz,H-8）,5.14（1H,s,H-7'）,4.92（1H,d,J=7.2 Hz,H-1″）,4.91（1H,d,J=7.2 Hz,H-1'''）,3.89（2H,d,J=12.0 Hz,H-6″,H-6'''）,3.71（2H,dd,J=12.0Hz,5.4 Hz,H-6″,H-6'''）,3.49（2H,m,H-5″,H-5'''）,3.47（2Hm,H-2″,H-2'''）,3.46（2H,m,H-3″,H-3'''）,3.44（2H,m,H-4″,H-4'''）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:167.86（C-9）,160.55（C-4）,159.61（C-4'）,145.62（C-7）,130.61（C-1'）,130.35（C-2',C-6'）,130.24（C-2,C-6）,129.34（C-1）,118.45（C-3,C-5）,118.32（C-3',C-5'）,116.51（C-8）,101.91（C-1'''）,101.71（C1″）,77.73（C-3″,C-3'''）,77.69（C-5″,C-5'''）,74.55（C-2″,C-2'''）,71.92（C-4″）,71.83（C-4'''）,68.61（C-7'）,62.19（C-6″,C-6'''''）。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道數(shù)據(jù)對照基本一致，故確定化合物Ⅵ為shancigusinⅠ.

化合物Ⅶ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.06（2H,d,J=8.5Hz,H-3,H-5）,6.89（2H,d,J=8.5Hz,H-2,H-6）,4.52（1H,s,H-1'）,4.42（2H,s,H-7）,3.77（1H,m,J=12.1Hz,3.7Hz,H-6'）,3.45（1H,dd,J=12.1Hz,3.7Hz,H-6'）,3.36（4H,m,H-2'～H-5'）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:132.82（C-4）,129.56（C-3,C-5）,117.82（C-2,C-6）,102.59（C-1'）,78.28（C-3'）,78.16（C-5'）,75.09（C2'）,71.55（C-4'）,64.97（C-7）,62.68（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道數(shù)據(jù)基本一致,故確定化合物Ⅶ為天麻素。

化合物Ⅷ，白色粉末（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.36（2H,d,J=8.4Hz,H-2',H-6'）,7.26（2H,d,J=8.4Hz,H-2',H-6'）,5.10（1H,d,J=11.6Hz,H-7'）,5.07（1H,d,J=11.6Hz,H-7'）,4.92（1H,d,J=7.4Hz,H-1'''',H-1'''）,3.90（1H,dd,J=1.8Hz,12.0Hz,H-6''''）,3.47（1H,m,H-2'''',H-2'''''）,3.45（1H,m,H-3'''',H-3'''''）,3.45（1H,m,H-5'''',H-5'''''）,3.41（1H,m,H-4'''',H-4'''）,2.91（1H,d,J=15.7Hz,H-3）,2.62（1H,d,J=15.7Hz,H-3）,1.62（1H,m,H-6）,1.58（1H,m,H-5）,1.47（1H,m,J=5.6Hz,14.0Hz,H-5）,0.93（3H,d,J=6.5Hz,H-7）,0.86（3H,d,J=6.5Hz,H-8）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:175.34（C-1）,171.80（C-4）,159.37（C-4'）,136.72（C-1'）,131.67（C-2',C-6'）,117.92（C-3',C-5'）,102.44（C-1''''）,78.28（C-3'''',C-3'''）,78.09（C-5'''',C-5'''''）,76.80（C-2）,75.04（C-2'''',C-2'''''）,71.51（C-4'''',C-4'''''）,68.12（C-7'）,62.65（C-6'''',C-6'''''）,46.35（C-5）,44.64（C-3）。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物Ⅷ為1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基芐基）-4-甲基-2-異丁基蘋果酸。

化合物Ⅸ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,CD3OD）:7.36（2H,d,J=8.4 Hz,H-2',H-6'）,7.26（2H,d,J=8.4 Hz,H-2',H-6'）,5.12（2H,d,J=11.6Hz,H-7'）,5.07（1H,d,J=11.6Hz,H-7'）,4.92（1H,d,J=7.4Hz,H-1'''',H-1'''）,3.90（1H,dd,J=1.8Hz,12.0Hz,H-6''''）,3.72（1H,m,J=5.2Hz,12.0Hz,H-6'''''）,3.47（2H,m,H-3'''',H-3'''''）,3.46（2H,m,H-2'''',H-2'''''）,3.41（2H,m,H-5'''',H-5'''''）,3.40（2H,m,H-4'''',H-4'''''）,2.57（1H,d,J=15.6Hz,H-3）,2.43（1H,d,J=15.6Hz,H-3）,1.71（1H,m,H-6）,1.67（1H,m,H-5）,1.54（1H,d,J=5.6Hz,14.0Hz,H-5）,0.94（3H,d,J=6.5Hz,H-7）,0.82（3H,d,J=6.5Hz,H-8）;13C-NMR（150MHz,CD3OD）:175.73（C-1）,170.97（C-4）,159.85（C-4'）,132.82（C-2',C-6'）,129.56（C-1'）,117.82（C-3',C-5'）,102.59（C-1'''',C-1'''''）,78.28（C-5'''',C-5'''''）,78.16（C-3'''',C-3'''''）,75.09（C-2）,74.82（C-2'''',C-2'''''）,71.55（C-4'''',C-4'''''）,67.34（C-7'）,62.68（C-6'''',C-6'''''）,46.89（C-5）,44.89（C-3）,25.33（C-6）,24.98（C-7）,24.89（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅸ為1（-4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基芐基）-4-乙基-2-異丁基蘋果酸。

化合物Ⅹ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,DMSOd6）:6.60（1H,s,H-6）,6.41（2H,s,H-2',H-6'）,6.01（1H,s,H-3）,4.06（1H,d,J=9.6 Hz,H-7'）,3.89（1H,d,J=7.4 Hz,H-1″）,3.86（1H,d,J=8.3Hz,H-9'）,3.73（3H,s,5-OCH3）,3.67（6H,s,3',5'-OCH3）,3.63（1H,m,H-5″）,3.58（1H,m,H-9）,3.45（1H,m,H-9）,3.29（1H,m,H-4″）,3.24（1H,m,H-9'）,3.11（1H,m,H-3″）,3.03（1H,dd,J=7.6Hz,4.6Hz,H-2″）,2.97（1H,d,J=11.0Hz,H-4）,2.94（1H,s,H-5″）,2.72（2H,m,H-7）,1.92（1H,m,H-8）,1.74（1H,m,H-8'）;13CNMR（150MHz,DMSO-d6）:148.48（C-3'）,148.09（C-5'）,144.08（C-3）,143.88（C-4）,136.78（C-1'）,133.88（C-4'）,132.33（C-6）,127.47（C-1）,115.94（C-5）,111.29（C-2）,105.03（C-2'）,75.99（C-3″）,72.11（C-2″）,69.32（C-4″）,67.07（C-9'）,61.09（C-9）,56.98（3'-OCH3,5'-OCH3）,44.34（C-7'）,38.40（C-8）,33.31（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅹ為5'-methoxyisolariciresinol-9'-O--D-xylopyranoside。

化合物Ⅺ，白色粉末。1H-NMR（600 MHz,DMSOd6）:7.14（1H,t,J=7.9Hz,H-5′）,6.74（1H,d,J=7.6 Hz,H-6′）,6.66（1H,s,J=7.9 Hz,H-4′）,6.62（1H,s,H-2′）,6.30（1H,s,H-6）,6.24（2H,s,H-2,H-4）,3.72（3H,s,5-OCH3）,2.78（4H,m,H-,H-′）;13C-NMR（150MHz,DMSO-d6）:158.26（C-5）,157.28（C-3）,157.22（C-3′）,143.70（C-1）,142.97（C-1′）,129.10（C-5′）,118.95（C-6′）,115.22（C-2′）,112.74（C-4′）,107.88（C-2）,104.88（C-6）,98.76（C-4）,54.77（5-OCH3）,37.11（C-）,36.77（C-′）。以上波譜數(shù)據(jù)和文獻[12]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物Ⅺ為山藥素III。

化合物Ⅻ，白色晶體（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,DMSO-d6）:5.28（1H,m,H-1）,3.55（1H,m,H-3）,1.03（3H,s,19-CH3）,0.97（3H,d,J=1.0 Hz,21-CH3）,0.87（3H,m,26-CH3），0.85（3H,m,29-CH3）,0.83（3H,m,27-CH3）,0.70（3H,m,18-CH3）;13C-NMR（150 MHz,DMSO）:140.43（C-5）,121.20（C-6）,70.09（C-3）,56.15（C-14）,55.41（C-17）,49.58（C-9）,41.84（C-24）38.29（C-4）,36.81（C-13）,36.20（C-12）,33.33（C-20）,31.41（C-22）,31.35（C-8）,29.25（C-25）,28.69（C-16）,25.42（C-2）,23.85（C-15）,22.59（C-28）,20.58（C-11）,19.70（C-27）,19.40（C-18）,19.03（C-29）,18.92（C-21）,11.77（C-26）,11.66（C-19）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅻ為-谷甾醇。

化合物XIII，黃色粉末。1H-NMR（600MHz,DMSO-d6）:8.18（1H,s,H-2）,7.89（1H,d,J=8.8Hz,H-5）,7.37（2H,d,J=8.0 Hz,H-2',H-6'）,6.96（1H,d,J=8.8Hz,H-6）,6.82（2H,d,J=8.0Hz,H-3',H-5'）,5.10（1H,d,J=9.9Hz,H-1″）,4.05-3.29（5H,m,H-2″,H-3″,H-4″,H-5″,H-6″）;13CNMR（150MHz,DMSO-d6）:174.89（C-4）,161.04（C-7）,157.14（C-9）,152.64（C-2）,130.01（C-2′,C-6′）,126.22（C-5）,123.05（C-1′）,122.51（C-3）,116.08（C-10）,115.67（C-6）,114.94（C-3′,C-5′）,112.65（C-8）,81.83（C-5″）,78.74（C-1″）,73.41（C-2″）,70.75（C-3″）,70.45（C-4″）,61.40（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致，故鑒定化合物XIII為葛根素。

化合物XIV，黃色針晶（甲醇）。1H-NMR（600 MHz,DMSO-d6）:7.58（1H,d,J=15.8Hz,H-7）,6.90（2H,s,H-2,H-6）,6.34（1H,d,J=15.8Hz,H-8）,3.85（6H,s,3-OCH3,5-OCH3）;13C-NMR（150MHz,DMSO）:168.42（C-9）,148.49（C-3,C-5）,145.28（C-7）,138.52（C-4）,125.06（C-1）,116.52（C-8）,106.55（C-2,C-6）,56.38（4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道基本一致，故鑒定化合物XIV為芥子酸。

化合物XV，黃色粉末。1H-NMR（600 MHz,DMSOd6）:12.95（1H,s,5-OH）,7.42（1H,d,J=2.0 Hz,H-6'）,7.38（1H,d,J=2.0 Hz,H-2'）,6.87（1H,d,J=8.2 Hz,H-5'）,6.64（1H,s,H-3）,6.52（1H,d,J=1.7 Hz,H-8）,6.19（1H,d,J=1.6 Hz,H-6）;13C-NMR（150MHz,DMSO-d6）:181.64（C-4）,164.10（C-7）,163.87（C-2）,161.46（C-5）,157.26（C-9）,149.67（C-4'）,145.71（C-3'）,121.48（C-1'）,118.97（C-6'）,115.99（C-5'）,113.35（C-2'）,103.68（C-10）,102.85（C-3）,98.80（C-6）,93.81（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物XV為木犀草素。

4 討論

本實驗采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20、半制備高效液相、結(jié)晶、重結(jié)晶等技術對山慈菇80%乙醇提取物進行分離，并依據(jù)所得單體化合物的物理化學性質(zhì)和核磁共振波譜圖對所得單體進行結(jié)構(gòu)分析鑒定得到15個化合物，分別鑒定為正三十二烷醇（Ⅰ）、麥角甾醇（Ⅱ）、5-羥甲基糖醛（Ⅲ）、羊毛甾（Ⅳ）、沒食子酸（Ⅴ）、shancigusinⅠ（Ⅵ）、天麻素（Ⅶ）、1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基芐基）-4-甲基-2-異丁基蘋果酸（Ⅷ）、1-（4-b-D-吡喃葡萄糖基氧基芐基）-4-乙基-2-異丁基蘋果酸、5'-methoxyisolariciresinol-9'-O--D-xylopyranoside（Ⅹ）、山藥素Ⅲ（Ⅺ）、-谷甾醇（Ⅻ）、葛根素（XIII）、芥子酸（XIV）和木犀草素（XV），其中化合物Ⅱ、Ⅹ和XIII為首次從杜鵑蘭屬植物中分離得到，化合物Ⅱ、Ⅹ、XIII和XIV為首次從該植物中分離得到。