長白山野生軟棗獼猴桃組培快繁技術(shù)研究

玄英實，周麗潔，周旭，李敏，張陽，樸雪梅，匙坤，金雪梅

（延邊特色產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心，吉林延吉133000）

軟棗獼猴桃[Actinida arguta(Sieb.et Zucc.)Planch]屬于獼猴桃屬（Actinidiace）多年生大型落葉藤本植物，俗稱軟棗子[1]。分布于東北、華北、西北及長江流域[1]，朝鮮、日本也有分布[2]，但以我國東北三省的資源最為豐富，尤其長白山更為常見。軟棗獼猴桃因其果實酸甜可口，柔軟多汁，富含維生素C[3]、B族維生素、氨基酸、類胡蘿卜素及鎂、鐵、鉀、鈉等多種營養(yǎng)成分[4]，深受廣大人們的青睞，近10年人工栽培也得到快速發(fā)展。吉林省對軟棗獼猴桃人工栽培研究歷史雖長，但發(fā)展速度相對較慢，近幾年受遼寧省軟棗獼猴桃產(chǎn)業(yè)的影響，多數(shù)推廣品種基本依靠遼寧省品種，還未發(fā)揮長白山豐富資源優(yōu)勢，形成自己獨特的軟棗產(chǎn)業(yè)。課題組在長白山一帶資源考察過程中，發(fā)現(xiàn)果實較大、酸甜適口、果皮淺綠而較厚的野生種質(zhì)資源。為了該優(yōu)良種質(zhì)資源快速應用于試驗示范推廣，也為了給長白山野生軟棗資源利用工作提供科學依據(jù)，對其組培快繁技術(shù)進行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2019年3 月份取1年生枝條，剪成約50 cm長的莖段，放入罐中水培催芽，溫度控制在20～25℃，15 d后腋芽陸續(xù)萌發(fā)，待腋芽長到5 cm左右，剪取作為外植體。

1.2 試驗方法

1.2.1 消毒方法將剪取的外植體放入小燒杯中罩紗布后，流水沖洗30 min，移到超凈工作臺上，用75%酒精消毒15 s，后用無菌水沖洗2次，再用0.1%升汞消毒3 min，最后用無菌水沖洗5～6次。

1.2.2 初代培養(yǎng)將消毒的外植體剪成1 cm長1芽1段，在無菌條件下將其接種于以MS為基本培養(yǎng)基，添加6種不同濃度6-BA和NAA的初代培養(yǎng)基中。每處理5瓶，每瓶接3個，設3次重復。每天觀察生長情況，30 d后在無菌條件下調(diào)查腋芽萌發(fā)率和株高。

1.2.3 增殖培養(yǎng)將培養(yǎng)30 d的上述腋芽，在無菌條件下剪成至少有1芽的1 cm長小段，轉(zhuǎn)接于以MS為基本培養(yǎng)基，添加9種不同濃度6-BA和ZT的增殖培養(yǎng)基中。每處理5瓶，每瓶接3個，設3次重復。每天觀察生長情況，40 d后在無菌條件下調(diào)查增殖系數(shù)和株高。

1.2.4 生根培養(yǎng)將培養(yǎng)40 d的上述增殖腋芽在無菌條件下剪成1 cm長的頂芽或1芽1段側(cè)芽，分別轉(zhuǎn)接于以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加5種不同濃度IBA和IAA植物激素的生根培養(yǎng)基中。每處理5瓶，每瓶接3個，設3次重復。每天觀察生長情況，30 d后打開培養(yǎng)瓶在室內(nèi)放置1 d，取出試管苗用水洗掉培養(yǎng)基，調(diào)查根數(shù)和株高。

1.2.5 移栽將調(diào)查后的生根試管苗移栽于草炭土中，15 d后調(diào)查小苗長出新葉個數(shù)（成活率）和長勢情況。

1.2.6 培養(yǎng)環(huán)境所有培養(yǎng)基均含蔗糖3%，瓊脂0.8%，pH 5.8～6.0。培養(yǎng)溫度25℃，光照時間15 h/d，光照強度2 000 lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng)

從表1可以看出，不同濃度的6-BA、NAA均能誘導外植體腋芽萌發(fā)，其中6-BA濃度為1.0 mg L-1、NAA濃度為0.3 mg L-1和6-BA濃度為1.5 mg L-1、NAA濃度為0.3mg L-1的兩種處理培養(yǎng)基中，其組培苗萌發(fā)率分別是88.97%和86.50%，顯著優(yōu)于其他處理，并且6-BA濃度為1.0 mg L-1、NAA濃度為0.3 mg L-1的培養(yǎng)基中，組培苗的平均株高達到5.29 cm，長勢也顯著優(yōu)于其他處理。綜上所述，此軟棗獼猴桃資源腋芽萌發(fā)的最適初代誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg L-1+NAA 0.3 mg L-1培養(yǎng)基。

表1 不同處理對初代培養(yǎng)的影響Table 1 Effects of different treatments on the primary culture

2.2 增殖培養(yǎng)

增殖培養(yǎng)10 d后，腋芽開始萌發(fā)，第40天觀察記錄其生長情況。由表2可以看出，不同濃度的6-BA和ZT均能誘導出叢生芽。當6-BA濃度為1.5 mg L-1、ZT濃度為0.4 mg L-1時，其組培苗平均增殖系數(shù)為3.55，顯著優(yōu)于其它處理；當6-BA濃度為1.5 mg L-1、ZT濃度為0.4 mg L-1和6-BA濃度為0.5 mg L-1、ZT濃度為0.6 mg L-1時，其增殖苗平均株高為5.44 cm和5.71 cm長勢優(yōu)于其他處理。綜上所述，此品種軟棗獼猴桃增殖的最佳增殖培養(yǎng)基是MS+6-BA 1.5 mg L-1+ZT 0.4 mg L-1培養(yǎng)基，見圖1。

表2 不同處理對增殖培養(yǎng)的影響Table 2 Effects of different treatments on proliferation culture

2.3 生根培養(yǎng)

由表3可以看出，不同濃度的IBA和IAA均能促使組培苗生根。當IBA濃度為0.2 mg L-1、IAA濃度為0.1 mg L-1時，生根率達93%，平均主根數(shù)最多達4.92個，株高為3.92 cm，毛細根發(fā)達旺盛數(shù)量較多，見圖2。所以此軟棗獼猴桃資源最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.2 mg L-1+IAA 0.1 mg L-1。

表3 不同處理對組培苗生根的影響Table 3 Effects of different treatments on the rooting culture

圖2 野生軟棗獼猴桃組培苗生根情況Fig.2 Rooting of the tissue culture seedlings of Actinidia arguta

2.4 煉苗

將組培苗移栽至草炭土中，在室內(nèi)溫度控制在25℃、濕度控制在70%，15 d后調(diào)查其成活率為90%，且成活的苗長勢良好，生長健壯，見圖3。

圖3 野生軟棗獼猴桃組培苗移栽花盆成苗情況Fig.3 The seedling formation of wild Actinidia arguta tissue culture seedlings transplanted in flowerpots

3 結(jié)論與討論

以長白山野生軟棗獼猴桃嫩莖段為外植體，研究不同植物激素種類及濃度對外植體的初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明，此軟棗獼猴桃資源的外植體最佳誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg L-1+NAA 0.3 mg L-1，平均萌發(fā)率達86.50%，平均株高5.29 cm；最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg L-1+ZT 0.4 mg L-1，平均增殖系數(shù)3.55，平均株高5.44 cm；最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.2mg L-1+IAA0.1mg L-1，成活率達93%，平均主根數(shù)4.92個，平均株高3.92 cm。生根后的組培苗移栽至草炭土中，其成活率達90%。植物組織培養(yǎng)中外植體芽的誘導、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)都與激素種類和激素組合濃度有關。外植體來源不同，內(nèi)源激素水平也不同，而且培養(yǎng)基中所含激素相對濃度也不同，從而導致來源不同的外植體在分化能力等方面存有差異[5,6]。

我國野生獼猴桃資源豐富，目前國內(nèi)外已有許多軟棗獼猴桃優(yōu)良品種的人工繁殖獲得成功[7-9]。在已報道的軟棗獼猴桃繁殖技術(shù)中，生根培養(yǎng)幾乎是把增殖培養(yǎng)的新苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，本研究繁殖技術(shù)中生根培養(yǎng)是把培養(yǎng)40 d的增殖培養(yǎng)苗的腋芽轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此繁殖技術(shù)能增加生根培養(yǎng)苗的數(shù)量，并在一定程度上能有效提高組織培養(yǎng)的效率。軟棗獼猴桃品種很多，但真正各項性狀都比較優(yōu)秀的品種很少[10]。本試驗研究長白山野生軟棗獼猴桃的組培快繁技術(shù)，可為吉林省此軟棗獼猴桃資源開發(fā)及其優(yōu)良品種培育奠定基礎。