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    檢驗(yàn)功能性提取物抗過敏活性方法綜述

    2021-12-06 11:40:53張夢潔邢麗杰羅瑞峰
    農(nóng)產(chǎn)品加工 2021年3期
    關(guān)鍵詞:肥大細(xì)胞牛乳透明質(zhì)

    李 晶 ,張夢潔 ,邢麗杰 , 羅瑞峰

    (1. 新疆農(nóng)墾科學(xué)院,新疆石河子 832000;2. 石河子大學(xué)食品學(xué)院,新疆石河子 832000)

    0 引言

    過敏反應(yīng)(Allergic reaction),是常見的一類機(jī)體免疫反應(yīng)[1]。由于體質(zhì)不同,人們過敏反應(yīng)癥狀也不同,輕者可以引起皮疹、呼吸不暢,重者可致過敏性休克甚至死亡。根據(jù)免疫反應(yīng)機(jī)制不同,又分為Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ型,常見的是Ⅰ型與身體中透明質(zhì)酸酶活性有關(guān)[2-3]。過敏是一種免疫應(yīng)答,由外源性或內(nèi)源性抗原攻擊細(xì)胞導(dǎo)致的免疫損傷。大多數(shù)的食物過敏是由牛乳、雞蛋、魚和甲殼類水產(chǎn)物、堅果類、麥類、動物皮毛、花粉、某些化學(xué)物質(zhì)等引起的[4-5]。

    食物過敏原:①牛乳。牛乳中大部分成分都可以導(dǎo)致過敏,經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),以牛乳酪蛋白的致敏性較強(qiáng)[6-7]。由牛乳蛋白過敏原引發(fā)的食物過敏不良反應(yīng)稱為牛乳過敏,兒童牛乳過敏較為常見,據(jù)報道約有2.5%的幼兒出現(xiàn)過牛乳過敏癥狀[8]。②雞蛋。蛋清中許多成分導(dǎo)致過敏,其中主要過敏原有溶菌酶、卵類黏蛋白和卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)[9],其中含量最多的是卵白蛋白OVA[10]。雞蛋過敏是一種較常見的食物過敏,在兒童過敏中雞蛋過敏最為普遍。③蝦。蝦味道鮮美、營養(yǎng)豐富,普遍受人歡迎,但易致敏。在易引起食物過敏的食物中,蝦及其制品是非常重要的一類,聯(lián)合國糧農(nóng)組織相關(guān)研究部門將其列入八大類易致敏食物中[11]。蝦中主要的過敏物質(zhì)有磷酸丙糖異構(gòu)酶(Triosephosphate isomerase)[12]、原肌球蛋白 (Tropomyosin)[13]、血藍(lán)蛋白 (Hemocyanin)[14]、精氨酸激酶 (Arginine kinase)[15]等。

    據(jù)報道,目前全世界約有22%的人受過敏性疾病的困擾,中國則約有 2 億多人患有過敏性疾病,并且每年患病率只增不減[16]。現(xiàn)如今已有很多抗過敏活性成分被發(fā)現(xiàn),比如一些功能性多糖、類黃酮化合物、多酚類化合物、益生菌等。對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的試驗(yàn)方法的研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述,以期為抗過敏研究提供參考。食物過敏目前研究的方法主要分為體內(nèi)和體外2 個方面。

    1 試驗(yàn)動物抗過敏試驗(yàn)方法

    1.1 過敏性休克試驗(yàn)法

    過敏性休克試驗(yàn)法是將過敏原(如異種動物蛋白和血清)刺激機(jī)體產(chǎn)生IgE 抗體,使試驗(yàn)動物處于過敏狀態(tài)。當(dāng)過敏動物再次接觸相同過敏原時,動物體內(nèi)產(chǎn)生的抗體與對應(yīng)的抗原結(jié)合,引起肥大細(xì)胞脫顆粒,釋放出組織胺等過敏化學(xué)物質(zhì),過敏物質(zhì)會作用于血管導(dǎo)致過敏性休克[1]。

    金亞宏等人[17]在茵陳五芩散抗變態(tài)反應(yīng)作用研究中的試驗(yàn)方法是將馬血清靜脈注射豚鼠使其過敏,然后用馬血清抗原再刺激,在注射抗原刺激前1 h 給藥。觀察記錄豚鼠過敏癥狀及死亡狀況,過敏體征表現(xiàn)按體征積分進(jìn)行統(tǒng)計比較為:0 =無明顯癥狀;1 =撓鼻子和撓頭;2 =眼睛腫脹,行動緩慢,呼吸緊張,瀉肚;3 =呼吸困難,眼睛呆滯;4 =抽搐,無法行動;5 =死亡。

    Tianyi Jiang 等人[18]用卵清蛋白將小鼠致敏,此試驗(yàn)設(shè)計了預(yù)防組合治療組,預(yù)防組從0~42 d 每隔1 d灌胃口服大棗cAMP 提取物,治療組在36~42 d 每天灌胃口服大棗提取物,觀察體征表現(xiàn)和休克死亡情況。例如,試驗(yàn)動物能減少過敏體征表現(xiàn),或能抑制過敏性休克死亡,即表示該抗過敏物質(zhì)大棗提取物具有抗過敏作用。

    該方法是研究抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)作用的常用方法,機(jī)理清晰、操作簡單、結(jié)果真實(shí)。

    1.2 被動皮膚過敏反應(yīng)

    被動皮膚過敏反應(yīng)(PCA reaction),是一種局部過敏反應(yīng),給予受體同種或異種動物有結(jié)合性質(zhì)的抗體所引起的過敏,是檢測抗體或者抗原的敏感度的試驗(yàn)方法[19]。

    大鼠或小鼠同種被動皮膚過敏試驗(yàn)法:使大鼠或小鼠過敏后再給予相同抗原刺激,引起肥大細(xì)胞產(chǎn)生一些過敏物質(zhì),這些物質(zhì)使皮膚血管的通透性增加,這個過程稱之為肥大細(xì)胞脫顆粒。在給予抗原刺激時,注入染料,染料就可滲透入皮膚,根據(jù)局部皮膚染料滲透的多少,可判斷血管通透性的變化。可用比色測定法測定,也可直接測量顏色反應(yīng)斑的大小[20-21]。

    王欽富[22]炒紫蘇子醇提物抗過敏試驗(yàn)采用這種方法,采用大鼠抗卵白蛋白抗體,測定藥物對抗原攻擊的過敏體征所產(chǎn)生藍(lán)斑大小的影響。對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,對比各組抑制IgE 所致的I 型過敏反應(yīng)的效果,從而得出了最佳炒紫蘇子組分和劑量。

    2 體外抗過敏試驗(yàn)方法

    2.1 肥大細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)

    在動物機(jī)體各處的微血管周邊廣泛分布肥大細(xì)胞(Mast cell)。肥大細(xì)胞可以產(chǎn)生許多調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)平衡的物質(zhì),也可以參與免疫反應(yīng),生產(chǎn)一定量的IgE Fc 受體,釋放過敏介物質(zhì),具有簡單的胞吞功能。并且肥大細(xì)胞具有強(qiáng)嗜堿性顆粒,存在于血液中的這些顆粒(如組織胺、肝素等) 通過肥大細(xì)胞崩解釋放,會在組織內(nèi)引起炎癥,稱為速發(fā)型過敏反應(yīng),該過程稱為肥大細(xì)胞脫顆粒[19]。

    Sakai S 等人[23]利用肥大細(xì)胞模型探究類胡蘿卜素的作用,結(jié)果表明類胡蘿卜素可以通過抑制過敏誘導(dǎo)的IgE 聚合而抑制肥大細(xì)胞脫顆粒的產(chǎn)生。Gao Y 等人[24]研究發(fā)現(xiàn),深海放線菌代謝產(chǎn)物 CDMW 可誘導(dǎo)激活之后肥大細(xì)胞的凋亡,進(jìn)而影響肥大細(xì)胞釋放過敏介質(zhì)。Sheikh R 等人[25]采用抗原誘導(dǎo)RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒模型研究蓮子草醇提物的抗過敏活性,研究發(fā)現(xiàn)蓮子草醇提物可以顯著減少β -氨基己糖苷酶的釋放和抑制過敏反應(yīng),證明了蓮子草醇提物具有一定的抗過敏活性,為今后的藥物開發(fā)提供了研究依據(jù)。Doseok H 等人[26]研究了 40 種黃酮類化合物對肥大細(xì)胞脫顆粒的抑制作用,證明了幾種黃酮類化合物具有一定的抗過敏功效。

    肥大細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)普遍在抗過敏試驗(yàn)中應(yīng)用,是一種條理清晰、技術(shù)成熟的抗過敏試驗(yàn)方法。

    2.2 透明質(zhì)酸酶體外抑制試驗(yàn)

    透明質(zhì)酸酶(Hyaluronidase) 可以降低透明質(zhì)酸活性,從而達(dá)到提高組織中液體滲透力目的的酶[19]??姑羲幠芤种仆该髻|(zhì)酸酶的活性,因此將抗敏物質(zhì)加入透明質(zhì)酸酶中,檢測酶抑制活性是研究抗過敏作用的一項指標(biāo)。

    李楊等人[27]研究中草藥提取物的抗過敏功效時,采用了透明質(zhì)酸酶體外抑制試驗(yàn),測定茶多酚、防風(fēng)多糖、仙人掌、洋甘菊等草藥提取物對透明質(zhì)酸酶活性的抑制率,利用紫外分光光度計測定吸光度,計算各草藥提取物抑制率,結(jié)果發(fā)現(xiàn),這幾種草藥提取物或成分均表現(xiàn)一定的抗過敏功效。

    韋保耀等人[28]以我國藥食兼用的紫蘇葉提取物HA,HB,HC,HD 作為研究對象,采用透明質(zhì)酸酶體外試驗(yàn)。結(jié)果表明,紫蘇提取物HD 能顯著抑制透明質(zhì)酸酶活性,紫蘇提取物HC 次之。證明紫蘇葉提取物HD 抗過敏功效最好。

    透明質(zhì)酸酶體外抑制試驗(yàn)作為植物有效成分的初步篩選方法,具有簡便、快捷的優(yōu)點(diǎn)。

    3 結(jié)語

    越來越多的研究表明,多種功能食品具有抗過敏作用。隨著食品醫(yī)藥學(xué)及其他學(xué)科的發(fā)展,抗過敏試驗(yàn)研究方法也在不斷完善,努力探索出組分的作用機(jī)理。運(yùn)用現(xiàn)代試驗(yàn)手段研究功能性食品,將有助于發(fā)掘效果好、無毒、無副作用的抗過敏功能食品,并可能為該類疾病的防治提供有效的預(yù)防改善措施。

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